СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУЦИНА УЛИТКИ Российский патент 2025 года по МПК A01K67/33 

Изобретение относится к области биотехнологии и предназначено для получения активного компонента для производства косметических средств.

Известен способ извлечения улиточной слизи (патент CN102846519, опубл. 02.01.2013), включающий сбор и промывку улиток водой, сушку при комнатной температуре, удар электрическим током по лапкам улиток, сбор слизи с последующей обработкой. Недостатком данного способа является то, что во время получения слизи улитки (муцина) данным способом, улитка гибнет.

Известен способ выделения слизи улитки (патент PL234591, опубл. 13.03.2017), включает встряхивание улиток в физиологическом растворе NaCI таким образом, чтобы улитка вымывалась из слизи, выживая при этом. Соотношение массы и объема улиток к количеству раствора NaCI должно быть выбрано таким образом, чтобы сохранить стабилизацию белков в слизи. Затем после отлова животных раствор центрифугируют. Недостатком данного способа является то, что во время получения слизи улитки (муцина) данным способом, улитка гибнет.

Задачей изобретения является разработка гуманного способа извлечения муцина улиток.

Техническим результатом, решаемым предлагаемым изобретением, является получение муцина улитки при сохранении их жизни. Во время получения слизи улитки (муцина) данным способом, улитка остается жива, ее промывают очищенной водой, после чего отправляют на восстановительные процедуры, которые позволяют ускорить процессы метаболизма и синтеза аминокислот для нормализации процессов жизнедеятельности.

Технический результат достигается тем, что способ получения муцина улиток включает сбор необходимого количества улиток по массе и их промывку от механических частиц, помещение улиток в темную камеру для обработки, нахождение улиток в темной камере в течение 20 мин, орошение улиток очищенной водой в течение 20 мин, орошение улиток в течение 20-40 мин озонированной водой при концентрации О₃ 0,05-0,2%, выдержка улиток в темной камере в течение 10-50 мин, интервальное орошение улиток стимулирующим раствором, осуществляющееся в следующей последовательности: очищенной водой в течение 800-1500 сек с ожиданием 60-150 сек, озонированной водой в течение 1000-2000 сек с ожиданием 30-140 сек, стимулирующим раствором в течение 20-80 сек с ожиданием 800-1500 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 60-150 сек с ожиданием 50-120 сек, озонированной водой в течение 100-400 сек с последующим размещением в среду обитания, стандартизация полученного муцина, при этом стимулирующий раствор имеет следующий состав, мас.%: вода - 93,65-96,925, сорбат калия - 0,025-0,1, бензоат натрия - 0,05-0,3, бетаин – 1 – 5, лимонная кислота – 1-4.

Способ извлечения муцина улиток основывается на интервальном орошении улиток в камере через систему подачи жидкости. Орошение осуществляется жидкостями трех видов: очищенной водой, озонированной водой и стимулирующим выработку муцина раствором.

Способ получения муцина улиток включает в себя следующие этапы:

1. Подготовительные работы. Этот этап включает в себя сбор необходимого количества улиток по массе, их промывка от механических частиц.

2. Очистка воды. С помощью обратного осмоса осуществляется набор воды в накопительную камеру, в которой в том числе происходит микробиологическая очистка воды, ее подогрев до температуры на менее 27°С.

3. Озонирование воды. Осуществляется путем подачи очищенной и подогретой воды в резервуар для озонирования, в котором происходит процесс озонирования воды генератором озона.

4. Помещение улиток в темную камеру для обработки.

5. Нахождение улиток в темной камере в течение 20 минут.

6. Орошение улиток очищенной водой температурой 27°С в течение 20 мин.

7. Орошение улиток озонированной водой, при этом время обработки зависит от степени озонирования воды, при концентрации О₃ равной 0,05-0,2% процесс занимает 20-40 мин. При [C]О₃ =0,1% орошение улитки производится в течение 30 мин. На выходе должна образоваться необходимая концентрация озона в камере из расчета 500 ppm/L. Скорость подачи жидкости составляет 2,5-4,5 л/ч. Данная концентрация и скорость не наносят вреда улитке, но способствует более качественной микробиологической очистке и расслаблению для секреции муцина.

8. Выдержка улиток в темной камере в течение 10 - 50 мин. Время выдержки зависит от образа жизни в последние 24 часа, улитка должна находится в благоприятных условиях (теплое помещение - от +18°С до +25°С, влажность в помещении от 70 до 90%, без прямых солнечных лучей, предварительно накормленная. В последние 24 часа улитка должна находится в благоприятных условиях: теплое помещение +25°С, влажность в помещении 80%, без прямых солнечных лучей, предварительно накормленная.

9. Интервальное орошение улиток стимулирующим раствором.

Стимулирующий раствор имеет следующий состав, мас.%:

Вода - 93,65 - 96,925

Сорбат калия - 0,025-0,1

Бензоат натрия - 0,05-0,3

Бетаин – 1-5

Лимонная кислота – 1-4.

Орошение улиток осуществляется интервально, в следующей последовательности: очищенной водой в течение 800-1500 сек с ожиданием 60-150 сек, озонированной водой в течение 1000-2000 сек с ожиданием 30-140 сек, стимулирующим раствором в течение 20-80 сек с ожиданием 800-1500 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 60-150 сек с ожиданием 50-120 сек, озонированной водой в течение 100 – 400 сек с последующим размещением в среду обитания. Данные интервалы напрямую влияют на качество, количество и скорость получения муцина. При выдерживании данных интервалов внутренние процессы улитки настроены на выделение муцина с наименьшим количеством отрицательных гормонов и максимальным количеством муцина, содержащего правильный набор чистых аминокислот, витаминов и сопутствующих полезных веществ. А также, качественный и количественный состав стимулирующего раствора сформирован так, чтобы улитка могла получить дополнительное питание (бетаин), для запуска последующих восстановительных процессов.

10. Стандартизация муцина, включающая фильтрацию муцина через сито величиной 1 мкм, микрофильтрацию слизи с помощью фильтра 0,5 мкм, консервацию в 1% бензиловом спирте.

Ниже представлены примеры осуществления способа.

Пример 1.

Собирают 4400 г улиток Мюллер (Helix Aspersa Muller) и Максима (Maxima), промывают, помещают в камеру. Параллельно подготавливают воду, в том числе озонированную концентрацией 0,05% скорость подачи 1,38 мл/сек.

Улиток оставляют в темной камере на 20 минут. Затем осуществляют орошение очищенной водой. Далее осуществляется орошение озонированной водой концентрацией 0,05% в течение 1000 сек.

Следующий этап – получение муцина, на котором осуществляется интервальная подача стимулирующего раствора. Для данного примера взяли стимулирующий раствор следующего состава:

Вода – 96,925

Сорбат калия – 0,025

Бензоат натрия – 0,05

Бетаин – 1

Лимонная кислота – 2.

Орошение осуществляется согласно следующей схемы подачи жидкостей:

Наименование жидкости Время подачи, сек Время ожидания, сек Объем, мл Вода очищенная 800 60 548,90 Вода озонированная 1000 30 750,40 Стимулирующий раствор 20 800 30,45 Стимулирующий раствор 10 600 10,20 Стимулирующий раствор 10 600 10,20 Стимулирующий раствор 10 600 10,20 Стимулирующий раствор 60 50 75,30 Вода озонированная 100 Размещение в среду обитания 198,20

Далее осуществляют стандартизацию муцина, включающая фильтрацию муцина в две стадии: фильтрация через сито величиной 1 мкм и микрофильтрация слизи с помощью фильтра 0,5 мкм, консервацию 1% бензиловым спиртом. Через 2 недели после получения муцина производится отбор проб для проверки на микробиологическую чистоту.

Таким образом, получен муцин, представляющий собой почти прозрачную жидкость желтоватого оттенка без запаха в объеме 15% от массы улитки. Получать, хранить муцин в темном, прохладном месте, в объеме с небольшим содержанием воздуха.

Пример 2.

Собирают 5400 г улиток Мюллер (Helix Aspersa Muller) и Максима (Maxima), промывают, помещают в камеру. Параллельно подготавливают воду, в том числе озонированную концентрацией 0,1% скорость подачи 1,18 мл/сек.

Улиток оставляют в темной камере на 20 минут. Затем осуществляют орошение очищенной водой. Далее осуществляется орошение озонированной водой концентрацией 0,1% в течение 800 сек.

Следующий этап – получение муцина, на котором осуществляется интервальная подача стимулирующего раствора. Для данного примера взяли стимулирующий раствор следующего состава:

Вода – 94,85

Сорбат калия – 0,05

Бензоат натрия – 0,1

Бетаин – 2

Лимонная кислота – 3.

Орошение осуществляется согласно следующей схеме подачи жидкостей:

Наименование жидкости Время подачи, сек Время ожидания, сек Объем, мл Вода очищенная 1000 80 760,30 Вода озонированная 1200 60 905,75 Стимулирующий раствор 30 1000 40,64 Стимулирующий раствор 15 800 15,75 Стимулирующий раствор 15 800 15,75 Стимулирующий раствор 15 800 15,75 Стимулирующий раствор 80 70 88,60 Вода озонированная 200 Размещение в среду обитания 240,50

Далее осуществляют стандартизацию муцина, включающая фильтрацию муцина в две стадии: фильтрация через сито величиной 1 мкм и микрофильтрация слизи с помощью фильтра 0,5 мкм, консервацию 1% бензиловым спиртом. Через 2 недели после получения муцина производится отбор проб для проверки на микробиологическую чистоту.

Таким образом получен муцин представляющая собой слегка мутную жидкость, желтоватого оттенка, без запаха, в объеме 12% от массы улитки. Получать, хранить муцин в темном, прохладном месте, в объеме с небольшим содержанием воздуха.

Пример 3.

Собирают 6400 г улиток Мюллер (Helix Aspersa Muller) и Максима (Maxima), промывают, помещают в камеру. Параллельно подготавливают воду, в том числе озонированную концентрацией 0,1%.

Улиток оставляют в темной камере на 20 минут. Затем осуществляют орошение очищенной водой. Далее осуществляется орошение озонированной водой концентрацией 0,1% скорость подачи 1,02 мл/сек в течение 1200 сек.

Следующий этап – получение муцина, на котором осуществляется интервальная подача стимулирующего раствора. Для данного примера взяли стимулирующий раствор следующего состава:

Вода – 94,1

Сорбат калия - 0,1

Бензоат натрия - 0,3

Бетаин – 1,5

Лимонная кислота – 4.

Орошение осуществляется согласно следующей схемы подачи жидкостей:

Наименование жидкости Время подачи, сек Время ожидания, сек Объем, мл Вода очищенная 1100 100 980,50 Вода озонированная 1500 80 1400,15 Стимулирующий раствор 50 1100 54,80 Стимулирующий раствор 25 900 25,75 Стимулирующий раствор 25 900 25,75 Стимулирующий раствор 25 900 25,75 Стимулирующий раствор 100 90 110,55 Вода озонированная 350 Размещение в среду обитания 345,85

Далее осуществляют стандартизацию муцина, включающая фильтрацию муцина в две стадии: фильтрация через сито величиной 1 мкм и микрофильтрация слизи с помощью фильтра 0,5 мкм, консервацию 1% бензиловым спиртом. Через 2 недели после получения муцина производится отбор проб для проверки на микробиологическую чистоту.

Таким образом получен муцин представляющая собой мутную жидкость желтоватого оттенка без запаха в объеме 10% от массы улитки. Получать, хранить муцин в темном, прохладном месте, в объеме с небольшим содержанием воздуха.

Пример 4.

Собирают 7400 г улиток Мюллер (Helix Aspersa Muller) и Максима (Maxima), промывают, помещают в камеру. Параллельно подготавливают воду, в том числе озонированную.

Улиток оставляют в темной камере на 20 минут. Затем осуществляют орошение очищенной водой. Далее осуществляется орошение озонированной водой концентрацией 0,15 % в течение 1600 сек.

Следующий этап – получение муцина, на котором осуществляется интервальная подача стимулирующего раствора. Для данного примера взяли стимулирующий раствор следующего состава:

Вода – 93,65

Сорбат калия - 0,05

Бензоат натрия - 0,3

Бетаин – 5

Лимонная кислота – 1.

Орошение осуществляется согласно следующей схеме подачи жидкостей:

Наименование жидкости Время подачи, сек Время ожидания, сек Объем, мл Вода очищенная 1200 120 1233,60 Вода озонированная 1800 120 1850,40 Стимулирующий раствор 60 1200 61,680 Стимулирующий раствор 20 1080 20,560 Стимулирующий раствор 20 1080 20,560 Стимулирующий раствор 20 1080 20,560 Стимулирующий раствор 120 120 123,360 Вода озонированная 300 Размещение в среду обитания 308,40

Далее осуществляют стандартизацию муцина, включающая фильтрацию муцина в две стадии: фильтрация через сито величиной 1 мкм и микрофильтрация слизи с помощью фильтра 0,5 мкм, консервацию 1% бензиловым спиртом. Через 2 недели после получения муцина производится отбор проб для проверки на микробиологическую чистоту.

Таким образом, получен муцин, представляющий собой мутную жидкость желтоватого оттенка без запаха в объеме 16% от массы улитки. Получать, хранить муцин в темном, прохладном месте, в объеме с небольшим содержанием воздуха.

Пример 5.

Собирают 8400 г улиток Мюллер (Helix Aspersa Muller) и Максима (Maxima), промывают, помещают в камеру. Параллельно подготавливают воду, в том числе озонированную концентрацией 0,2 % скорость подачи 1,5 мл/сек.

Улиток оставляют в темной камере на 20 минут. Затем осуществляют орошение очищенной водой. Далее осуществляется орошение озонированной водой концентрацией 0,2% в течение 1800 сек.

Следующий этап – получение муцина, на котором осуществляется интервальная подача стимулирующего раствора. Для данного примера взяли стимулирующий раствор следующего состава:

Вода – 93,65

Сорбат калия - 0,05

Бензоат натрия - 0,3

Бетаин – 5

Лимонная кислота – 1.

Орошение осуществляется согласно следующей схеме подачи жидкостей:

Наименование жидкости Время подачи, сек Время ожидания, сек Объем, мл Вода очищенная 1500 150 1350,40 Вода озонированная 2000 140 1680,35 Стимулирующий раствор 80 1500 80,350 Стимулирующий раствор 30 1250 30,55 Стимулирующий раствор 30 1250 30,55 Стимулирующий раствор 30 1250 30,55 Стимулирующий раствор 150 120 145,65 Вода озонированная 400 Размещение в среду обитания 410,15

Далее осуществляют стандартизацию муцина, включающая фильтрацию муцина в две стадии: фильтрация через сито величиной 1 мкм и микрофильтрация слизи с помощью фильтра 0,5 мкм, консервацию 1% бензиловым спиртом. Через 2 недели после получения муцина производится отбор проб для проверки на микробиологическую чистоту.

Таким образом получен муцин представляющий собой слегка мутную жидкость желтоватого оттенка без запаха в объеме 18% от массы улитки. Получать, хранить муцин в темном, прохладном месте, в объеме с небольшим содержанием воздуха.

Для получения муцина используется два вида улитки Helix Aspersa Muller и Maxima. Муцин, полученный данным способом, отправлялся на анализ для качественного и количественного определения аминокислот, водо- и жирорастворимых витаминов методом ВЭЖХ с использованием хроматографической системы Vanquish (Thermo Fisher Scientific), оснащенной диодно-матричным детектором, результаты которого представлены в таблице 1, 2 и 3.

Таблица 1 Содержание аминокислот

Helix Aspersa Muller Maxima Метионин <1.0 мкг/мл 132±15 мкг/мл Валин 83±11 мкг/мл 38.9±4.5 мкг/мл Аланин 108±12 мкг/мл 45.9±5.1 мкг/мл Глутаминовая кислота <10.0 мкг/мл <10.0 мкг/мл Серин <5.0 мкг/мл <5.0 мкг/мл Треонин <5.0 мкг/мл <5.0 мкг/мл Глицин <7.0 мкг/мл <7.0 мкг/мл Лизин <4.0 мкг/мл <4.0 мкг/мл Аспарагиновая кислота <5.5 мкг/мл <5.5 мкг/мл Тирозин 10.7±2.0 мкг/мл <1.0 мкг/мл

Таблица 2 Водорастворимые витамины

Helix Aspersa Muller Maxima Витамин С
(аскорбиновая кислота) 0.33±0.05 мкг/мл <0.005 мкг/мл В12 (цианокобаламин) <5.0 мкг/мл <5.0 мкг/мл Никотиновая кислота 0.01-0.05 мкг/мл 0.43±0.06 мкг/мл В6 (пиридоксин) <0.05 мкг/мл <0.05 мкг/мл В1 (тиамин) 1.24±0.14 мкг/мл 0.59±0.08 мкг/мл В2 (рибофлавин) 3.7±0.4 мкг/мл 5.8±0.8 мкг/мл Никотинамид <0.01 мкг/мл <0.01 мкг/мл

Таблица 3 Жирорастворимые витамины

Muller Helix pomatia Витамин А <0.05 мкг/мл <0.05 мкг/мл Витамин Е <1.0 мкг/мл <1.0 мкг/мл

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения муцина улиток, включающий сбор улиток по массе и их промывку от механических частиц, помещение улиток в темную камеру для обработки, орошение улиток очищенной водой, орошение улиток озонированной водой, выдержка улиток в темной камере и интервальное орошение улиток стимулирующим раствором, с последующим размещением в среду обитания. Стандартизация полученного муцина путем фильтрации муцина через сито величиной 1 мкм, микрофильтрации слизи с помощью фильтра 0,5 мкм и консервации. Изобретение обеспечивает получение муцина улитки при сохранении их жизни. 1 з.п. ф-лы. 3 табл., 5 пр.

1. Способ получения муцина улиток, включающий сбор улиток по массе и их промывку от механических частиц, помещение улиток в темную камеру для обработки, нахождение улиток в темной камере в течение 20 мин, орошение улиток очищенной водой в течение 20 мин, орошение улиток в течение 20-40 мин озонированной водой при концентрации О₃ 0,05-0,2%, выдержка улиток в темной камере в течение 10-50 мин, интервальное орошение улиток стимулирующим раствором, осуществляющееся в следующей последовательности: очищенной водой в течение 800-1500 сек с ожиданием 60-150 сек, озонированной водой в течение 1000-2000 сек с ожиданием 30-140 сек, стимулирующим раствором в течение 20-80 сек с ожиданием 800-1500 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 10-30 сек с ожиданием 600-1250 сек, стимулирующим раствором в течение 60-150 сек с ожиданием 50-120 сек, озонированной водой в течение 100-400 сек с последующим размещением в среду обитания, стандартизация полученного муцина путем фильтрации муцина через сито величиной 1 мкм, микрофильтрации слизи с помощью фильтра 0,5 мкм, консервации в 1% бензиловом спирте, при этом стимулирующий раствор имеет следующий состав, мас.%:

вода – 93,65-96,925

сорбат калия – 0,025-0,1

бензоат натрия – 0,05-0,3

бетаин – 1-5

лимонная кислота – 1-4.

2. Способ получения муцина улиток по п.1, отличающийся тем, что используется два вида улитки Helix Aspersa Muller и Maxima.