КАССЕТНЫЙ СПОСОБ ПРОРАЩИВАНИЯ ПЫЛЬЦЫ Российский патент 2025 года по МПК A01H1/02 

Изобретение относится к области лесоведения и лесного хозяйства и может быть использовано в семеноводстве и селекции хвойных пород, а также в работах по их гибридизации.

Одним из главных показателей качества пыльцы является ее жизнеспособность и эффективность формирования пыльцевых трубок. Из известных способов определения качества пыльцы в лабораторных условиях проращивание на искусственной питательной среде во влажной камере является наиболее почным методом, который позволяет наблюдать рост пыльцевых трубок и последующие этапы развития мужского гаметофита (Паушева, 1988). Существующие ныне методы проращивания пыльцы не могут обеспечить достаточно качественный массовый анализ пыльцы особенно хвойных пород, которые характеризуются длительным периодом прорастания пыльцы и роста пыльцевых трубок в сравнении с лиственными породами (Размологов, 1964; Голубинский, 1974; Кокшеева, 2004; Паущева, 1988; Мелиян, Балошова, Мелиян, 1992). Это связано с тем, что пространство, в котором проводят проращивание пыльцы, не в полной мере ограничено от контакта с внешней средой. В результате чего происходит испарение и снижение влажности питательного субстрата, а также не исключается его инфицирование различными видами микроорганизмов, которые могут препятствовать нормальному прорастанию пыльцы и развитию пыльцевых трубок. Существующие способы также не позволяют проводить массовый анализ качества пыльцы. Поэтому большое значение имеет разработка способа, позволяющего длительно проращивать большое количество образцов пыльцы.

Целью изобретения является разработка кассетного способа проращивания пыльцы, обеспечивающего длительность и массовость анализа процесса прорастания пыльцы и формирования пыльцевых трубок на основе применения висячей капли питательной среды в кассетах с замкнутым пространством.

Технический результат, обеспечиваемый изобретением: способ может быть использован при проведении экологического мониторинга состояния окружающей среды, в селекции растений, выявлении видоспецифических особенностей прорастания пыльцы и формирования пыльцевых трубок, оценки результативности, выявлении аномалий развития мужского гаметофита растений на стадии прорастания.

Способ осуществляется следующим образом.

При проведении наблюдений используют чашки Петри, стеклянные палочки, фильтровальную бумагу, предметные стекла с луночкой и обычные предметные стекла с матовой поверхностью.

Кассетный способ проращивания пыльцы характеризуется тем, что на дно лунки предметного стекла размещают питательную среду, высевают на нее пыльцу, переворачивают стекло каплей вниз и накрывают обычным предметным стеклом с матовой поверхностью, между предметными стеклами закапывают стерильную дистиллированную воду, и образованные таким образом кассеты размещают на стеклянные палочки в чашку Петри, на дно которой выкладывают увлажненную фильтрованную бумагу.

Пыльцу проращивают на искусственной питательной среде на дне лунки предметного стекла. В одной лунке размещают четыре-пять капель питательной среды. После завершения высева пыльцы предметное стекло с лункой переворачивают каплей вниз и накрывают его обычным предметным стеклом с матовой поверхностью. Между соединенными предметными стеклами закапывают стерильную дистиллированную воду, что ограничивает контакт с внешней средой и обеспечивает формирование замкнутой камеры проращивания пыльцы. Созданные таким образом кассеты с проращиваемой пыльцой помещают на стеклянные палочки в чашку Петри, на дне которой для поддержания высокой влажности размещают увлажненную фильтровальную бумагу. В одной чашке Петри можно разместить четыре кассеты с исследуемой пыльцой. Используют стандартные предметные стекла с лунками.

Наблюдения за процессом прорастания пыльцы и формирования пыльцевых трубок осуществляют с использованием микроскопа, временно извлекая из чашек Петри кассеты и размещая их на предметном столике под объективом 8-10 кратного увеличения, что позволяет эффективно фокусировать плоскость наблюдения на объектах исследования.

КАССЕТНЫЙ СПОСОБ ПРОРАЩИВАНИЯ ПЫЛЬЦЫ позволяет одновременно закладывать и вести длительные наблюдения по образцам пыльцы с 100-120 растений, с достаточной репрезентативностью, обеспечивая высокое качество проводимых исследований.

Изобретение относится к области лесоведения и лесного хозяйства. Кассетный способ проращивания пыльцы предусматривает размещение на дне лунки предметного стекла питательной среды, в которую высевают пыльцу, далее стекло переворачивают каплей вниз и накрывают обычным предметным стеклом с матовой поверхностью, образуя таким образом кассеты. Между предметными стеклами закапывают стерильную дистиллированную воду. Кассеты размещают на стеклянные палочки в чашку Петри, на дно которой выкладывают увлажненную фильтрованную бумагу. Предлагаемый кассетный способ проращивания пыльцы в висячей капле питательной среды обеспечивает выявления видоспецифических особенностей прорастания пыльцы и формирования пыльцевых трубок, пригоден для проведения экологического мониторинга состояния окружающей среды и селекции растений. 1 пр.

Кассетный способ проращивания пыльцы, характеризующийся тем, что на дно лунки предметного стекла размещают питательную среду, высевают на нее пыльцу, переворачивают стекло каплей вниз и накрывают обычным предметным стеклом с матовой поверхностью, между предметными стеклами закапывают стерильную дистиллированную воду и, образованные таким образом, кассеты размещают на стеклянные палочки в чашку Петри, на дно которой выкладывают увлажненную фильтрованную бумагу.