2-(4-Карбонилбензилидено)диптерокарпол, проявляющий гипогликемическую активность, его применение и способ его получения Российский патент 2025 года по МПК C07J9/00 C07J75/00 A61K31/575 A61P3/10 

Область техники

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, конкретно к 2-(4-карбонилбензилидено)диптерокарполу формулы (1), который может быть использован в медицине в качестве лекарственного средства, обладающего гипогликемической активностью.

Уровень техники

Известно, что нативный диптерокарпол (2), даммарановый тритерпеноид, выделенный из Dipterocarpus alatus, и производные на его основе в условиях in vitro являются эффективными ингибиторами альфа-глюкозидазы. Хотя сам диптерокарпол не превосходит по активности акарбозу (IC₅₀=264,91±9,64 мкмоль и IC₅₀=184,44±3,78 мкмоль, соответственно), но некоторые его полусинтетические производные проявили ингибирующую активность в значительно меньших концентрациях (IC₅₀ от 228,09 мкмоль до 2,73 мкмоль) [T.T.P. Thao, T.Q. Bui, N.T.T. Hai, L.K. Huynh, P.T. Quy, N.C. Bao, N.T. Dung, N.L. Chi, T. Van Loc, I.E. Smirnova, A.V. Petrova, P.T. Ninh, T. Van Sung, N.T.A. Nhung. RSC Advances, 2021, 11(57), 35765-35782]. Было показано, что даммарановые тритерпеновые сапонины Cyclocarya paliurus усиливали стимулированное инсулином поглощение глюкозы в культуре адипоцитов 3T3-L1 [X. Liang, S. Deng, Y. Huang, L. Pan, Y. Chang, P. Hou, C. Ren, W. Xu, R. Yang, K. Li, J. Li, R. He. Molecules, 2023, 28(8), 3294]. Однако, в обоих исследованиях не была показана гипогликемическая активность производных даммарана на моделях сахарного диабета (СД) в условиях in vivo.

Показано, что соединение (1) проявляет ингибирующую активность in vitro в отношении фермента альфа-глюкозидазы в концентрации 0.204±0.026 мкмоль.

Технический результат, на достижение которого направлено заявленное изобретение, заключается в расширении арсенала лекарственных средств для лечения СД, а именно, в соединении, обладающем гипогликемической активностью и низкой токсичностью.

Технический результат достигается соединением формулы (1), представляющим собой соединение тритерпеновой природы - 2-(4-карбонилбензилидено)диптерокарпол (1).

Изобретение также направленно на достижение второго технического результата, который заключается в применении соединения формулы (1) в качестве лекарственного средства для лечения СД, а именно в качестве гипогликемического средства.

Обозначенный технический результат достигается путем использования 2-(4-карбонил-бензилидено)диптерокарпола (1), проявляющего гипогликемическую активность.

Изобретение также направленно на достижение третьего технического результата, который заключается в способе получения соединения формулы (1).

Обозначенный технический результат достигается путем синтеза 2-(4-карбонил-бензилидено)диптерокарпола (1).

Сущность изобретения

2-(4-Карбонилбензилидено)диптерокарпол (1) синтезирован путем реакции соединения (2) с 1,4-бензолдикарбальдегидом по методу реакции Кляйзена-Шмидта. Соединение (2) (1 ммоль), растворенное в этаноле, обрабатывали 1,4-бензолдикарбальдегидом (1-1.5 ммоль) и гидроксидом калия (1-1.5 ммоль), далее реакционную массу перемешивали 4 ч. После окончания реакции, смесь выливали в 100 мл 5% раствора HCl, выпавший осадок отфильтровывали, промывали водой до нейтральной среды остаток сушили на воздухе, очищали с использованием колоночной хроматографии на Al₂O₃ с получением соединения (1) (Схема 1).

Схема 1

Контроль реакции осуществляли методом ТСХ на пластинах Sorbfil (Сорбполимер, Краснодар, Россия), проявляли 10% раствором серной кислоты. Элементный анализ осуществляли на CHNS-анализаторе Euro EA-3000 (Eurovector, Италия), основной стандарт ацетанилид. Масс-спектры соединений снимали на приборе LCMS-2010 EV (Shimadzu, Япония). Спектры ЯМР ¹Н и ¹³С зарегистрированы на импульсном спектрометре «Bruker» Avance III (Bruker, США) с рабочей частотой 500.13 МГц (¹H) и 125.47 МГц (¹³C) с использованием 5 мм датчика с Z-градиентом PABBO при постоянной температуре образца 298K. Химические сдвиги в спектрах ЯМР ¹Н и ¹³С приведены в м.д. относительно сигнала внутреннего стандарта тетраметилсилана (ТМС). Строение полученных соединений устанавливали на основании анализа спектров ЯМР ¹Н и ¹³С.

Соединение формулы (1) вводилось перорально в течение 14 дней крысам с экспериментальным СД, вызванным введением стрептозотоцина. По окончании эксперимента наблюдали влияние соединения (1) на биохимические показатели крови, мочи, печени, массу тела, ориентировочно-двигательную активность и смертность и сравнивали с данными показателями не леченных животных с СД и группой препарата сравнения глибенкламида. Было показано, что соединение (1) снижает уровень глюкозы (p=0,000305) и гликозилированного гемоглобина (p>0,05) в крови почти на уровне препарата сравнения глибенкламид по сравнению с группой контроля с диабетом и в 2 раза снижает уровень малонового диальдегида по сравнению с группой контроля с диабетом (p=0,003821) и глибенкламидом (p=0,002422), проявляя выраженные антиоксидантные свойства. Соединение (1) проявляет тенденцию к снижению экскреции глюкозы и пировиноградной кислоты c мочой и суточный диурез, улучшая функциональное состояние почек. Соединение (1) оказывает влияние на поведение животных с диабетом, увеличивая их двигательную активности (p>0,05) и снижая уровень стресса (p=0,011878). Соединение (1) способствует выживаемости животных с диабетом и уменьшению потери массы тела. Соединение (1) обладает низкой токсичностью, при пероральном введении мышам и относится к 4 классу малоопасных соединений.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами:

Пример 1. Синтез 2-(4-карбонилбензилидено)диптерокарпола (1).

В качестве исходного соединения использовали диптерокарпол (2), полученный в результате экстракции латекса Вьетнамского дерева Dipterocarpus alatus (диптерокарпус крылатый) семейства Dipterocarpaceae с выходом 37%. Далее, к раствору соединения (2) (0.44 г, 1 ммоль) в этиловом спирте (20 мл) добавляли 1,4-бензолдикарбальдегид (0.20 г, 1.5 ммоль) и 30% KOH в этаноле (1 ммоль). Реакционную массу перемешивали 4 ч, далее смесь выливали в 100 мл 5% раствора HCl, выпавший осадок отфильтровывали, промывали водой до нейтральной среды, остаток сушили на воздухе, очищали с использованием колоночной хроматографии на Al₂O₃, элюируя смесью петролейный эфир→этиловый эфир уксусной кислоты (40:1→1:1), хлороформ с получением соединения (1). Масса полученного соединения (1) 0.50 г (выход 89%). Т. пл. 108°С, [α]_D²⁰ +24 (c 0.005, CHCl₃). Найдено, MS (HRMS) m/z 559.41 [M+ H]⁺ C₃₈H₅₄O₃. Вычислено М 558.85. Спектр ЯМР ¹Н соединения (1), δ, м.д. (J, Гц): 0.82 (s, 3H, H-30); 0.92 (s, 3H, H-19); 1.01 (s, 3H, H-18); 1.10 (m, 1H, H_eq-15); 1.15 (s, 3H, H-28); 1.15 (s, 3H, H-21); 1.18 (s, 3H, H-29); 1.28 (m, 1H, H_ax-12); 1.31 (m, 1H, H_ax-11); 1.32 (m, 1H, H_eq-7); 1.46 (m, 1H, H_ax-15); 1.47 (m, 1H, H_eq-6); 1.48 (m, 2H, H-22); 1.48 (m, 1H, H_eq-16); 1.53 (m, 1H, H-5); 1.55 (m, 1H, H-9); 1.56 (m, 1H, H_ax-6); 1.57 (m, 1H, H_eq-11); 1.58 (m, 1H, H_ax-7); 1.63 (d, 3H, ⁴J_26-24 = 1.5, H-26); 1.66 (m, 1H, H-13); 1.69 (d, 3H, ⁴J_27-24 = 1.5, H-27); 1.74 (m, 1H, H_ax-16); 1.76 (m, 1H, H-17); 1.88 (m, 1H, H_eq-12); 2.06 (m, 2H, H-23); 2.29 (dd, 1H, ²J = 16.6, ⁴J_1α-31 = 3.6, H_α-1); 3.05 (dd, 1H, ²J = 16.6, ⁴J_1β-31 = 1.7, H_β-1); 5.12 (tt, 1H, ³J_24-23 = 7.1, ⁴J_24-26 = 1.5, ⁴J_24-27 = 1.5, H-24); 7.49 (dd, 1H, ⁴J_31-1α = 3.6, ⁴J_31-1β = 1.7, H-31); 7.57 (d, 1H, ³J_{33(37)-34(36)} = 8.3, H-33(37)); 7.91 (d, 1H, ³J_{34(36)-33(37)} = 8.3, H-34(36)); 10.03 (s, 1H, H-38). Спектр ЯМР ¹³С соединения (1), δ, м.д. (J, Гц): 14.82 (C18); 15.85 (C19); 16.32 (C30); 17.72 (C26); 20.34 (C6); 22.29 (C11); 22.38 (C29); 22.56 (C23); 24.78 (C16); 25.40 (C21); 25.74 (C27); 27.59 (C12); 29.37 (C28); 31.14 (C15); 34.10 (C7); 36.53 (C10); 40.18 (C8); 40.64 (C22); 42.36 (C13); 44.80 (C1); 45.48 (C4); 48.60 (C9); 49.78 (C17); 50.32 (C14); 53.38 (C5); 75.33 (C20); 124.63 (C24); 129.68 (C33(37)); 130.57 (C34(36)); 131.72 (C25); 135.52 (C31); 135.58 (C35); 137.06 (C2); 142.11 (C32); 191.61 (C38); 207.95 (C3).

Пример 2. Изучение влияния 2-(4-карбонилбензилидено)диптерокарпола (1) при пероральном введении на биохимические показатели крови, мочи, печени, массу тела, смертность и ориентировочно-двигательную активность у крыс с СД, вызванным введением стрептозотоцина.

Эксперименты были проведены на крысах-самцах линии Вистар, массой 250-300 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария. Эксперименты проводили в соответствии с международными правилами [European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimentation and other Scientific Purposes, N 123 Strasbourg 1986; Protocol of Amendment to the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and other Scientific Purposes, Strasbourg, 22 June 1998] и были одобрены комиссией по биомедицинской этике Уфимского института химии - обособленного структурного подразделения УФИЦ РАН.

Животные были лишены пищи за сутки до эксперимента, со свободным доступом к воде. Диабет воспроизводили внутрибрюшинным введением стрептозотоцина (Индия, 98%) в дозе 50 мг/кг, раствор готовили на цитратном буфере, pH=4,5 [A.S.D. Wickramasinghe, A.P. Attanayake, P. Kalansuriy. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods, 2022, 113, 107144].

Уровень глюкозы в крови хвостовой вены определяли до начала введения стрептозотоцина и через 96 ч после с помощью глюкометра (OneTouch select plus flex, Швейцария). В эксперимент отбирали животных с показателем глюкозы выше 15 ммоль/л. Формировали 4 группы: 1 - стрептозотоциновый диабет; 2 - диабет + соединение (1); 3 - диабет + глибенкламид; 4 - интактные.

Соединение (1) в дозе 20 мг/кг и препарат сравнения глибенкламид (таблетки, 5 мг, Озон фармацевтика, Россия) в дозе 0,2 мг/кг вводили внутрижелудочно в течение 14 дней. Животные контрольной группы с диабетом получали эквивалентное количество разводящего раствора (вода с твином-80).

На 13-й день от начала введения соединения (1) у крыс собирали мочу. Для этого животных по одному помещали в клетки-мочесборники. Измеряли объем мочи, выделившейся за 24 ч. В моче определяли уровень глюкозы (энзиматическим колориметрическим методом с помощью стандартного биохимического набора «глюкоза-8-ольвекс», Россия), и суточную экскрецию пирувата. Количественное содержание пировиноградной кислоты в моче определяли колориметрическим методом (490 нм) по реакции взаимодействия пировиноградной кислоты с 2,4-динитрилфенилгидразином с образованием в щелочной среде 2,4-динитрофенилгидразона с последующим расчетом по калибровочному графику. Найденную величину (мг/мл) умножали на суточный объем мочи [A. Makahleh, G.M. Ben-Hander, B. Saad. Bioanalysis, 2015, 7(6), 713-723].

На 14-й день эксперимента изучали ориентировочно-двигательную активность крыс в установке «открытое поле» («OpenSience», Россия). Установка представляет собой круглое поле, диаметром 95 см, поделенное на 16 внешних и 8 внутренних секторов с отверстиями («норками»), огороженное бортиком, высотой 35 см. Крысу помещали в центр поля и в течение 5 мин наблюдали двигательную активность: число пересеченных секторов, число стоек, чисток (груминг) и заглядываний в норки. Метод позволяет оценить выраженность и динамику отдельных поведенческих элементов у животных с СД [G. Mayer, R. Nitsch, S. Hoyer. Brain Research, 1990, 532, 95-100].

На 15-й день после последнего введения соединений животных вывели из эксперимента декапитацией под эфирным наркозом.

Собирали кровь для приготовления сыворотки и эритроцитов и печень для приготовления гомогенатов. В сыворотке крови определяли уровень глюкозы энзиматическим колориметрическим методом с помощью стандартных биохимических наборов «Ольвекс диагностикум» (Россия). Гликированный (гликозилированный) гемоглобин (HbA_1c) определяли в гемолизате эритроцитов, методом кислотного гидролиза с образованием 5-оксиметилфурфурола, спектрофотометрически по реакции с тиобарбитуровой кисотой. Оптическую плотность (ОП) раствора определяли при длине волны 443 нм. Концентрацию гликозилированного гемоглобина рассчитывали по формуле: HbA_1c(%)=ОП_{образца}/0,029, где 1% HbA_1c соответствует ОП=0,029 [L.N. Viktorova, V.K. Gorodetskiĭ. Lab Delo, 1990, 5, 15-18].

Процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) изучали по содержанию малонового диальдегида в гомогенатах печени общепринятым методом по реакции с тиобарбитуровой кислотой [K. Yagi. Methods in Enzymology, 1984, 105, 328-331].

Активность каталазы определяли в гомогенатах печени кинетическим методом по [H. Aebi. Methods in Enzymology, 1984, 105, 121-126; O.R Oyenihi, N.L. Brooks, O. Oguntibeju. BMC Complementary and Alternative Medicine, 2015, 15(1), 236]. Метод основан на принципе измерения разложения пероксида водорода каталазой при длине волны 240 нм. Реакционная смесь состояла из 5 мкл образца (сыворотка крови или гомогенат ткани печени), 170 мкл 50 ммоль фосфата натрия (pH 7.0) и 50 мкл 0,1% раствора перекиси водорода в 50 ммоль фосфата натрия. Скорость разложения пероксида водорода измеряли в течение 2 минут с интервалом 15 с на планшетном спектрофотометре FlexA-200HT (Allsheng, Китай). Активность каталазы выражали как количество молей разложившейся перекиси водорода в минуту на 1 г сырой массы печени.

Данные представлены как средние (m) и их ошибки (±SEM). Статистическую обработку данных проводили методом однофакторного дисперсионного анализа (программа Statistica 10, Start Soft) с последующей оценкой статистической значимости различий между группами с применением критерия Тьюки для неравных объемов и критерия Фишера. При внутри- и межгрупповом сравнении двух групп применяли t-критерий Стъюдента. Различия считались статистически значимыми при p≤0,05.

Токсическое действие стрептозотоцина на β-клетки поджелудочной железы связано с алкилированием ДНК, что приводит к гибели клеток и развитию диабета 1 типа [K.K Wu, Y. Huan. Current Protocols in Pharmacology, 2008, 5(5.47), 1-14]. Внутрибрюшинное введение стрептозотоцина крысам вызвало повышение уровня глюкозы в крови в 5,4 раза относительно интактных животных (p=0,000001). Введение крысам в течение 14 дней соединения (1) понизило уровень глюкозы в сыворотке крови в 1,3 раза (p=0,000305) по сравнению с контролем. Показатели были незначительно выше, чем у группы препарата сравнения глибенкламида. По полученным данным, уровень гликозилированного гемоглобина в группе не леченного контроля повышается за 14 дней по сравнению с интактными животными в 1,8 раза (p<0,000003). Соединение (1) снижало уровень гликозилированного гемоглобина в 1,2 раза (p>0,05) по сравнению с контролем, но данный показатель был выше, чем у глибенкламида. Данные в таблице 1.

Стрептозотоцин запускает процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме. Чувствительными к воздействию стрептозотоцина тканями, помимо поджелудочной железы являются клетки печени и эпителия канальцев почек, содержащие рецепторы к переносчику Glut-2, доставляющему внутрь клетки глюкозу и стрептозотоцин [В.К. Мазо, Ю.С. Сидорова, С.Н. Зорин, А.А. Кочеткова. Вопросы питания, 2016, 85(4), 14-21; S. Lenzen. Diabetologia, 2008, 51, 216-226]. При этом в результате разрушения мембран клеток образуются эндопероксиды полиненасыщенных жирных кислот в результате деградации которых, образуется малоновый диальдегид и другие низкомолекулярные альдегиды (продукты, реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой), как маркеры усиления процессов ПОЛ [K.N. Belosludtsev, E.Yu. Talanov, V.S. Starinets, A.V. Agafonov, M.V. Dubinin, N.V. Belosludtseva. Cells, 2019, 8(9), 1014]. На фоне диабета, вызванного стрептозотоцином у контрольных животных, в 1,4 раза (p=0,014217) выросло значение МДА, по сравнению с интактными животными, что говорит об усилении процессов перекисного окисления липидов в печени. В группе соединения (1) уровень МДА был в 2 раза ниже, чем у контроля (p=0,003821), и в 1,9 раза ниже, чем у глибенкламида (p=0,002422). Активность каталазы в печени в группе соединения (1) была снижена по сравнению с не леченным контролем и другими опытными группами примерно в 1,3 раза (p>0,05). Снижение активности каталазы в группе соединения (1) коррелировало со снижением процессов перекисного окисления липидов мембран гепатоцитов и, таким образом, могло быть связано с более низким содержанием перекиси водорода (являющегося субстратом для каталазы) в печени, чем у других групп: опытных и интактной. Данные в таблице 1.

Экскреция пировиноградной кислоты увеличивается при СД по сравнению с интактными (здоровыми) крысами. Соединение (1) снижало уровень экскреции пирувата с мочой в 2 раза (p>0,05) по сравнению с контролем. В норме глюкоза почти полностью реабсорбируется в проксимальном отделе нефрона и ее концентрация в моче составляет до 0,8 ммоль/л. Поскольку при повышении уровня глюкозы в крови происходит максимальная загрузка канальцевых систем транспорта, то избыток глюкозы попадает в мочу. Соединение 1 снижало содержание глюкозы в моче в 1,7 раза (p>0,05) по сравнению с контролем. Диурез в группе животных, леченных соединением (1) был также ниже, чем у контроля. Данные в таблице 2.

У животных, леченных соединением (1), было отмечено медленное снижение массы тела (на 15%, p>0,05) по сравнению с исходной массой и по сравнению с интактными животными (на 27%, p=0,001290). Тогда, как в группах контрольных животных и глибенкламида масса тела снизилась на 25% (p=0,024173) и 26% (p=0,017033) относительно исходной массы и на 36% (p=0,000096) и 35,4% (p=0,000112) по сравнению с интактными животными. Падение массы тела может быть связано с увеличением мышечной атрофии из-за деградации структурных белков и недоступности углеводов для использования в качестве источника энергии [N.K. Achi, O.C. Ohaeri, I.I. Ijeh, C. Eleazu. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2017, 86, 562-569]. Соединение (1) при лечении в течение 14 дней могло замедлять деградацию белков у животных с диабетом, и способствовать усвоению глюкозы клетками. Ранее, способность усиливать стимулированное инсулином поглощение глюкозы адипоцитами 3T3-L1, была показана для дамаррановых тритерпеноидных сапонинов выделенных из Cyclocarya paliurus [X. Liang, S. Deng, Y. Huang, L. Pan, Y. Chang, P. Hou, C. Ren, W. Xu, R. Yang, K. Li, J. Li, R. He. Molecules, 2023, 28(8), 3294], однако данные были получены только в условиях in vitro и in silico, без оценки активности соединений на живом организме с диабетом. Соединение (1) снижало смертность у животных с диабетом, в группе была отмечена гибель 1 животного из 9-ти, тогда, как у не леченного контроля погибло 66,7% животных. То есть способность соединения регулировать уровень глюкозы в крови могла предотвратить гибель организма от осложнений, связанных с повышенным уровнем глюкозы. Данные в таблице 3.

В тесте ОП у контрольных животных на фоне диабета была снижена двигательная активность, показателем которой является количество пересеченных животными квадратов за 1 мин. Также наблюдали повышенный уровень стресса, показателем которого является количество чисток (груминг). В группе соединения (1) двигательная активность животных была выше, чем в группах контроля и препарата сравнения, на что указывает количество пересеченных квадратов и число обследованных «норок». Количество чисток было ниже в 3 раза (p=0,011878), чем у контроля. Данные в таблице 4.

Пример 3. Изучение острой токсичности 2-(4-карбонилбензилидено)диптерокарпола (1).

Острая токсичность 2-(4-карбонилбензилидено)диптерокарпола (1) была изучена на мышах самцах массой 25-28 г. В каждой группе было 5 животных [OECD Guidelines for the testing of chemicals, Section 4, Test No. 425 Acute oral toxicity: up-and-down-procedure. 16 Oct. 2008, 27 pp. https://doi.org/10.1787/9789264071049-en.]. Для приготовления суспензии соединение растворяли в твине-80 и затем добавляли дистиллированную воду. Соединение (1) вводили перорально однократно, в дозах 1000 мг/кг, 3000 мг/кг и 6000 мг/кг. Дозу 6000 мг/кг вводили дробно, в 3 приема с интервалом 20 мин. Наблюдения за животными проводили в течение суток, и далее в течение 14 дней.

Параметры острой токсичности определяли по методу Литчфилда и Уилкоксона [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, Миронов А.Н. (ред.), Москва, 2013, с. 15-17].

Сразу после введения изучаемых доз (1000 мг/кг - 6000 мг/кг) животные сидели, сгорбившись, в течение 30 мин или 2 часов, затем, начинали двигаться, на следующие сутки все мыши были активны. Введение соединения (1) в дозах 3000 и 6000 мг/кг не вызывало гибели животных в течение первых суток. В последующие 14 дней не было отмечено отсроченной гибели, животные активно передвигались, потребляли корм и воду, вес не теряли. Дозы свыше 6000 мг/кг не изучали по причине явно низкой токсичности соединения [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, Миронов А.Н. (ред.), Москва, 2013, с 15-17].

По классификации ГОСТ 12.1.007.76, соединение (1) относится к VI классу малоопасных соединений.

Биологическая часть

Влияние соединения (1) на показатели сахарного диабета (глюкозу, гликозилированный гемоглобин, каталазу, малоновый диальдегид, массу тела, смертность и ориентировочно-двигательную активность) изучали при его 14-ти дневном внутрижелудочном введении крысам с сахарным диабетом, вызванным стрептозотоцином. В качестве референс-препарата использовали глибенкламид (производное сульфонилмочевины, в дозе 0.2 мг/кг). Изучение гипогликемической, антиоксидантной, ориентировочно-двигательной активности осуществляли согласно руководству по доклиническим исследованиям [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, Миронов А.Н. (ред.), Москва (2013), с. 672-687]. Полученные результаты приведены в таблицах 1-4.

Таблица 1. Влияние соединения (1) на уровень глюкозы, гликозилированного гемоглобина и пирувата у крыс с сахарным диабетом, вызванным стрептозотоцином

№ Соединение Доза, мг/кг Глюкоза, ммоль/л Гликированный гемоглобин, % МДА, моль/г сырой массы печени Каталаза, мкмоль/мин/г сырой массы печени 1 Контроль (диабет), n=4 - 36,8±1,45 5,32±0,10 12,25±0,76 0,213±0,024 2 Интактные, n=6 - 6,8±0,22
p₁=0,000000 3,04±0,09
p₁=0,000003 8,51±0,83 p₁=0,014217 0,239±0,033 3 Диабет+
Глибенкламид n=8 0,2 24,1±3,03
p₁=0,017844 3,51±0,36
p₁=0,006362 11,35±1,16 0,274±0,041 4 Диабет+соединение (1) n=8 20 29,4±0,68
p₁=0,000305 4,50±0,29 6,00±1,06
p₁=0,002422p₂=0,003821 0,163±0,043

Данные представлены как m±SEM; n - количество животных в группе; данные достоверны при p≤0.05 согласно t-критерию Стъюдента.

Таблица 2. Влияние соединения (1) на экскрецию пирувата уровень глюкозы в моче и суточный диурез у крыс СД, вызванным стрептозотоцином

№ Соединение Доза, мг/кг Пируват (мкг/мл) Глюкоза (ммоль/л) Диурез 24 часа, мл 1 Контроль диабет, n=4 - 645,0±326,7 83,2±3,4 17,3±7,5 2 Интактные, n=6 - 204,3±57,0
p₁=0,034297 5,0±2,2 p₁=0,000001 12,4±6,0 3 Диабет+Глибенкламид, n=6 0,2 255,3±60,9
p₁=0,039722 24,3±12,0
p₁=0,011 9,7±1,2 4 Диабет+соединение (1), n=6 20 317,2±88,1 47,6±20,7 12,6±5,4

Данные представлены как m±SEM; n - количество животных в группе. Данные достоверны при p≤0,05 согласно критерию Фишера.

Таблица 3. Динамика массы тела крыс и количество выживших животных в группах на фоне СД, вызванного стрептозотоцином, на начало и конец эксперимента.

№ Соединение Доза, мг/кг Масса в начале эксперимента, г Масса на 15 день эксперимента, г Количество животных: к концу эксперимента/в начале эксперимента 1 Контроль диабет, n=4 - 282,5±11,0 211,3±23,0
p₁=0,024173 p₂=0,000096 4/12 2 Интактные, n=6 - 277,5±10,3 329,5±17,5 6/6 3 Диабет+Глибенкламид, n=8 0,2 293,8±11,0 213,0±9,6
p₂=0,000112
p₃=0,017033 8/9 4 Диабет+соединение (1), n=8 20 282,5±14,9 240,8±14,9
p₂=0,001290 8/9

Данные представлены как m±SEM; n - количество животных в группе. Данные достоверны при p≤0,05 относительно интактных животных согласно критерию Фишера при межгрупповых сравнениях и при внутригрупповых сравнениях (Масса в начале эксперимента и масса на 15 день) согласно t-критерию Стъюдента для зависимых выборок.

Таблица 4. Влияние соединения 1 на двигательную активность в тесте «открытое поле» на фоне диабета, вызванного стрептозотоцином у крыс

№ соединение Доза, мг/кг Количество пересеченных квадратов Количество стоек Количество заглядываний в «норки» Количество чисток 1 Контроль (Диабет), n=4 - 5,9±0,18 p₂=0,024651 3,1±0,68 0,4±0,40 1,8±0,50 2 Интактные,
n= 4 - 16,1±1,36 2,9±0,34 1,6±0,34 0,5±0,21
p₁=0,026060 3 Диабет+Глибенкламид, n=8 0,2 6,3±1,02 p₂=0,009881 1,6±0,24 0,3±0,11 0,5±0,16
p₁=0,034240 4 Диабет+соединение (1), n=9 20 9,8±1,64 2,6±0,65 0,6±0,25 0,6±0,16
p₁=0,011878

Данные представлены как m±SEM; n - количество животных в группе. Данные достоверны при p≤0,05 согласно критерию Тьюки для неравных выборок при межгрупповых сравнениях.

Проведенные исследования показали, что соединение (1) обладает гипогликемической активностью на модели сахарного диабета, вызванного стрептозотоцином, и снижает уровень глюкозы (p=0,000305) и гликозилированного гемоглобина (p>0,05) в крови почти на уровне препарата сравнения глибенкламид по сравнению с группой контроля с диабетом. Соединение (1) в 2 раза снижает уровень малонового диальдегида по сравнению с группой контроля с диабетом (p=0,003821) и глибенкламидом (p=0,002422), проявляя выраженные антиоксидантные свойства. Соединение (1) проявило тенденцию к снижению экскреции глюкозы и пировиноградной кислоты c мочой и суточный диурез. Соединение (1) оказало влияние на поведение животных с диабетом, в условиях открытого поля, проявляя тенденцию к увеличению двигательной активности (p>0,05) и снижая стрессовую составляющую (p=0,011878) исследовательского поведения. При этом соединение (1) способствовало выживаемости животных с диабетом и уменьшению потери массы тела.

Таким образом, предложено средство, представляющее собой соединение (1), проявляющее гипогликемическую активность на модели сахарного диабета у крыс, вызванного введением стрептозотоцина. Соединение (1) обладает низкой токсичностью, относится к 4 классу малоопасных соединений. Соединение (1) может быть потенциальным препаратом, снижающим уровень глюкозы в крови при гипергликемических состояниях, вызванных сахарным диабетом обоих типов.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, конкретно к 2-(4-карбонилбензилидено)диптерокарполу общей формулы (1), который обладает гипогликемической активностью, низкой токсичностью и может найти применение в медицине в качестве лекарственного гипогликемического средства. Изобретение относится также к способу его получения и его применению в качестве гипогликемического средства. 3 н.п. ф-лы, 4 табл., 3 пр.

1. 2-(4-Карбонилбензилидено)диптерокарпол общей формулы (1)

.

2. Применение соединения формулы (1) в качестве гипогликемического средства.

3. Способ получения соединения формулы (1), заключающийся во взаимодействии диптерокарпола с 1,4-бензолдикарбальдегидом в мольном соотношении 1:1-1,5 в среде этанола при перемешивании в течение 4 ч с использованием 30%-ного раствора KOH в этаноле в качестве основания, при этом мольное соотношение диптерокарпол : гидроксид калия составляет 1:1-1,5, обработке реакционной смеси 5%-ным раствором HCl, фильтровании осадка, промывке водой до нейтральной среды, сушке на воздухе и очистке с использованием колоночной хроматографии.