Способ получения суммы фенольных соединений,обладающей желчегонным и противовоспалительным действием Советский патент 1983 года по МПК A61K35/78 

00

со

00 Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения природных полифе нолов , которые могут быть использов ны в качестве лекарственного средства. Известен способ получения полифе нолов путем экстрагирования соцветий бессмертника 50%-иым этанолом, упаривания, растворения остатка в воде с последующей обработкой его смесью этилацетата и этано лаСП. Недостатком этого способа является ограниченность сырьевой базы в связи с природным происхождени- ем сырья. Целью изобретения является расши рение сырьевой базы. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения суммы фенольных соединений, обладающей желчегонным и противовоспалительным действием, включающе му экстракцию растительного сырья этанолом, упаривание экстракта, растворение остатка в воде и очистк полученного водного раствора органи ческим растворителем, измельченные соцветия арники горной (Arnica пюп tana L) экстрагируют 78-82%-ным этанолом при соотношении сырье:экст рагент t:9-1:12, а водный раствор после .очистки хлороформом обрабаты,вают бутанолом при соотношении 1:2-1:3 и упаривают. Способ осуществляется следующим образом. Измельченные цветочные корзинки арники горной экстрагируют 78-82%ным этанолом, экстракт упаривают до водного остатка, который очищают от липофильных веществ обработкой хлороформом, очищенный водный раствор обрабатывают бутанолом в соотношении 1:2-1:3, бутанольное извлечение упаривают досуха и измельчают. Выход целевого продукта сост.а ляёт 3,7i)-«,5%. П р и м е р . 1 кг измельченных корзинок арники горной (Arnica mon tana L) экстрагируют десятикратным количеством 80%-ного этилового спир та. Полученный экстракт упаривают в вакууме (ост. давление 100 - i 140 мм рт. ст.) при 80-90°С до густого остатка (0,5 л), разбавляют двукратным количеством дистиллированной воды, .-а водный раствор обра d2 батывают хлороформом в соотношении 2:1 к полученному раствору с целью удаления липофильных веществ, очи- . щенный таким образом водный раствор обрабатывают бутанолом в соотношении 1:2-1:3. Бутанольные извлечения упаривают под вакуумом до полного удаления растворителя, сухой остаток измельчают. Получают 45 г (что составляет 4,5% от веса сухого сырья) аморфного желтовато-коричневого порошка со специфическим запахом, слабо горького вкуса, плохо .растворимого в холодной воде, растворимого в горячей воде, 91 %-ном спирте, нерастворимый в ацетоне, бензоле, )1лороформе. Сумма полифенольных соединений арники горной обладает выраженным желчегонным действием, противовоспалительным эффектом и по желчегонной активности не уступает фламину. Преимущество препарата арники зек лючается.в более выраженном действии на синтез желчных кислот. Сравнительное изучение желчегонной активности препарата суммы фенолов арники горной и фламина показывает, что при однократном введении по 25 мг/100 она примерно одинакова. Увеличение скорости секреции желчи составляет соответственно 19 и 24;s. При повторном введении препаратов в течение 7 дней в среднем на 16 под влиянием препарата арники и на 20 - фяамина. При более продол- . жительном повторном введении препаратов (в течение 14 дней) желчегонное действие суммы фенольных соединений арники проявляется почти в 1,5 раза больше по сравнению с таковым,г фламина. Прирост показателя общего количества выделившейся желчи за четыре часа наблюдения составляет 37 под влиянием первого препарата и 26% - второго. Под влиянием суммы фенольных со-, единений арники.горной концентрация желчных кислот в желчи увеличивается во всех опытах: при однократном введении препарата суммарная концентрация желчных кислот возрастает в среднем с 1421+139 до 1978±134 мг., и при повторном - в среднем с 1558±68 до 2140+156 мг.% (через 7 дней) и с 2157+206 до 2728+259 мг.% (через 14 дней) . Фламин также вызывает увеличение содержания желчных кислот, однако 31 лишь при повторном введении. При од нократном введении прироста этого показателя желчегонного действия фла мина не происходит. При однократном введении суммы фенольных соединений арники горной выделение желчных кислот возрастает в среднем с 2,867+0,208 до ,ь66+ ±0,51 (,05) мг7ч/100 или на 63, в том числе тауроконъюгатов на k2% и гликонъюгатоа - в три раза. В меньшей мере действие проявляется под влиянием фламина - соответственно на 8,3 и 43%. Эффективность влияния на дистрофию печени- белых крыс суммарного фенольного гтрепарата арники горной в сравнении с фламином. Опыты поставлены на О белых крысах массой 120-160 г. Острую дистро фию печени вызывали путем введения под кожу i)0 -Horo масляного раствора четыреххлористого углерода по О, мл на 100 г массы животного ежеу невно в течение 4 Дней. С целью профилактики некрозов на Месте введения яда дозу последнего делили пополам и вво дили в обе задние лапы в области бед ра. Об эффективности полученного сред ства судили по данным определения функционального состояния печени, проводимого на 7-й .и 1 день от . начала введения четыреххлористого уг лерода. В качестве тестов функционального состояния Лечени служили: скорость секреции желчи за каждый из четырех часов наблюдения, о&цеё количество желчи, полученное на 4ч, концентрация в желчи кислот (суммарно и раздельно конъюгированных с таурином и глицином), билирубина (суммарно, прямого и непрямого) и хо лестерина, а также количество этих ингредиентов, выделяющихся с желчью. На 7 и 14-й день после начала без действия на животных четыреххлористого углерода интенсивность секреции желчи была намного ниже по сравнению с интактными. На 7-й день наблюдения скорость секреции желчи не пре вышала 2,9+0,1 - 3,0+0,2 мг/мин/100 против 3,1+0,2-3,3+0,1 в контроле, а на 14-й день - 2,9+0,1-3,2±р,1. В эти сроки наблюдения за 4 ч было получено 714+3,2 и 720+24 мг/100 желчи или на 15 и 14% меньше, чем у инт тактных крыс. Происходило также зна84чительное уменьшение концентрации желчных кислот в желчи (на 7-й день почти вдвое), в том числе конъюгированных с таурином и глицином, а также билирубинаi Практически не изменялась концентрация холестерина в желчи. Еще в большей мере наблюдалось снижение показателей выделения с желчью холатов и билирубина, что свидетельствует о торможении синтеза и секреции печенью как желчных кислот, так и билирубина. Уже на 7-й день после введения скорость секреции желчи возрастала с 2,9±0,1-3,0±0,2 мг/мин/100 до 3,1+0,1-3,4+0,1 мг/мин/100 или почти на 10%, а на 14-й день - с 2,8+0,13.2+0,1 до 2,9+0,1-4,4+0,1 мг/мин/ЮО или на 18%, достигнув исходного уровня. Применение препарата сумАы фенольных соединений арники способствует очень быстрому восстановлению нарушенного четыреххлористым углеродом синтеза желчных кислот, причем в большей мере, чем применение фламина. Уже на 7-й день наблюдения суммарная концентрация желчных кислот более чем в 2 раза превышает .контрольный уровень. Она достигает 1826+38 мг.% против 1421+139 мг.% У интактных животных. В аналогичных опытах фламин Также приводит к повышению показателя суммарной концентрации, но не в такой степени, как препарат, арники горной (соответственно 1687+70 и 1826+38 мг.%). К 14-му дню суммарная концентрация желчных кислот под влиянием препаратое арники возрастала с 1086+82 до 1963+133 мг, а фламина - до 17ЙЗ± +144 мг.%. И в первом и во втором случае этот показатель намного превосходит контрольный уровень (1421+ 139 мг.%). Под влиянием препарата суммы фенольных соединений арники, быстро в сстанавливается содержание и билирубииа в желчи. Уже на 7-й день концентрация его увеличивается в среднем с 13,81+1,280 до 18,81+1,831 мгД , особенно за счет пигмента, конъюгированного с глюкуроновой кислотой с 10,56+1,100 до 15,25+3,724 мг.%. На 7-й день заболевания под влиянием препарата арники показатель общего количества выделяемых с желчью желчных кислот увеличивается с 1,358+0,094 до 3,558+0,034 мг/100/ч, значительно превосходя нормальный уровень (в среднем 2,867+0,208). противовоспалительное действие суммы фенольных соединений арники горной. Мышам весом 20-25 г в толщу бедра правой задней лапы вводили 0,1 мл Г-ё-ного раствора формалина. Спустя 2Ц ч животных забивали и на уровне тазобедренного сустава отрезали обе лапы, их взвешивали. По разнице межд Влияние суммы фенол на отек лапы, вызва весом правой и левой лапки судили о степени воспалительного отека (контрольные данные). Препарат мышам вводили внутрь в дозах 10 мг/100, 2ii мг/100 и 50 мг/100 за 2 ч до введения формалина. По разнице в весе лапы у мышей контрольной группы и получавших препарат арники судили о противоотечном действии. Результаты приведены в таблице. соединений арники горной у мышей формалином

Из данных таблицы видно, что у мышей под влиянием формалина развивается отек лапы. Максимальная величина отека лапы в контроле составляет 05+16 мг (100%). У мышей, получавших препарат, отек лапы значительно меньше.

Во второй серии опытов изучали действие веществ на асептический отек лапы крысы. Опыты проводились на крысах массой 120-180 г. Животные были распределены на две группы. Крысам первой группы (подгруппы 1,2,3) под апоневроз задней л«)пы вводили 0,1 мл 2, раствора формалина, 0, раствора серотонина, 5 декстрана. Крысам второй группы (подгруппы ,5,6)одновременно с флогогенными веществами и спустя ь1 ч вводили препарат арники горной в дозе 25 мг/100. В последующие дни препарат вводили 2 раза в день до дня исчезновения отека. Объем лапы измеряли онкометрически по методу И. А. Салямона. О противовоспалительном эффекте судили по разнице в величине отека лапы контрольной группы и животных, получавших одновременно с

флагогенными веществами фенольные вещества.

После введения формалина максимальная величина отека наблюдалась спустя 6 ч и сохранялась в пределах этого уровня в течение последующих 6 дней. На 10-й день, сравнительно с первым днем, отек лапы уменьшался почти в 2 раза и составил 58,1, к 12-13 дням отек лапы постепенно уменьшился, объем ее достиг исходной величины.

Под влиянием декстрана максималь-. ное развитие экссудативной фазы воспаления отмечалось спустя 60 мин, серотонина - 3ч. Затем произошло . постепенное уменьшение объема лапы, достигающее исходных величин после введения декстрана спустя 72 ч и серотонина - спустя 48 ч. Максимальный отек на фоне действия декстрана составил 133,3+6,7%, серотонина 108,6+,9%.

У крыс, которым одновременно с флогоТенными веществами вводили сумму фенольных- соединений арники, отек, по сравнению с контрольным.и данными, на всех моделях -был значительно мень710173388

ше, Наступило также сокращение време-рым вводили препарат арники на

чмени возвращения объёма лапы к исход-не действия серотонина, составляла

ной величине,, У крыс, получавших пре-88,,, декстрана - lOO+S. Слепарат, на формалиновой модели вели-довательно, величина отека, в отличие

чина отека -составила 57,, т.е. в sот контрольных данных, соответствендва раза меньше, чем в контрольнойно моделям на 32.,%, 16,6% .и

группе.меньше.

На шестой день отмечалось возвра-нольных соединений арники горной о6

щение объема лапы к исходной величи- toладает выраженным противовоспалине. Величина отека лапы у крыс,кото-тельным действием.

Эти данные указавают, что сумма Ое