СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИМ И ПРОТИВОАТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1994 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к получению лечебных средств из растительного сырья.

Известны способы получения отдельно желчегонного препарата "Фламин" из бессмертника песчанного, отдельно гепатопротекторного препарата - Силибор из семян расторопшии пятнистой, а также отдельно гипохолестеринемического средства из шрота чебреца.

Фламин получают из соцветий бессмертника песчанного экстракцией водой при температуре 60-70^оС. Экстракт упаривают, обрабатывают 5 объемами этанола, отстаивают, декантируют раствор с осадка, разбавляют водой и извлекают смесью этилацетата со спиртом (9: 1). Органическую фазу удаляют, остаток сушат и получают продукт с выходом 4-5% по отношению к исходному сырью.

Однако данный способ трудоемок, ограничен сырьевой базой (острая нехватка соцветий бессмертника). Кроме того, препарат характеризуется только желчегонной активностью.

Силибор получают экстракцией семян расторопшии пятнистой 80% этанолом с последующим упариванием и растворением осадка в 50% этанола. Этот раствор последовательно обрабатывают четыреххлористым углеродом, затем смесью хлороформ-этанол в соотношении 2: 1. Полученное хлороформно-этанольное извлечение упаривают, сушат и получают целевой продукт с выходом 4,5-5% (по отношению к растительному сырью).

Однако данный способ предполагает использование нативного сырья, запасы которого ограничены, а также высокотоксичных растворителей-хлороформа и четыреххлористого углерода. Кроме того, средство, получаемое этим способом, обладает лишь гепатозащитным действием.

Наиболее близким к заявленному объекту является способ получения гипохолестеринемического средства из шрота чебреца, по которому сырье экстрагируют этанолом в соотношении 1: 6, этанольное извлечение сгущают и разбавляют водой в соотношении 1: 2. Выделившийся осадок отделяют фильтрацией, промывают водой и сушат. Выход целевого продукта составляет 4% . Однако указанный способ позволяет получить лишь гипохолестеринемическое средство.

Целью изобретения является расширение спектра действия за счет гепатозащитной, желчегонной, антилитогенной активности.

Поставленная цель достигается экстракцией сырья изопропиловым спиртом, отгонкой экстрагента, осаждением петролейным эфиром, фильтрацией осадка и перекристаллизацией его из изопропилового спирта.

П р и м е р 1. 40 кг шрота облепихи заливают 120 кг изопропанола и настаивают в течение 8 ч, экстракт сливают. Этот процесс повторяют еще раз. Кратность экстракции равна двум. Экстракты объединяют, отгоняют изопропанол, а к остатку прибавляют 10 л петролейного эфира (фракция с т. кип. 70-100^оС), выделившийся при этом желто-коричневый осадок (0,6 кг, 1,5% ), отделяют фильтрацией, промывают 2 раза по 2 л продукта.

П р и м е р 2. 40 кг шрота облепихи заливают 120 кг изопропанола и настаивают 8 ч. Этот процесс повторяют еще два раза. Кратность экстракции равна 3. Процесс продолжают как это описано в примере 1. Выход целевого продукта составляет 0,72 кг (1,8% ).

П р и м е р 3. 40 кг шрота облепихи заливают 150 кг изопропанола и настаивают 8 ч. Процесс повторяют еще два раза и продолжают как это описано в примере 1. Выход целевого продукта составляет 0,72 кг (1,8% ).

П р и м е р 4. 40 кг шрота облепихи заливают 120 кг изопропанола и настаивают 6 ч. Процесс повторяют еще два раза и продолжают как это описано в примере 1. Выход целевого продукта составляет 0,62 кг (1,55% ).

П р и м е р 5. 40 кг шрота облепихи заливают 120 кг изопропанола и настаивают 10 ч. Процесс повторяют два раза и продолжают как описано в примере 1. Выход целевого продукта составляет 0,72 кг (1,8% ).

Влияние соотношения сырье-экстрагент на выход целевого продукта при трехкратной экстракции приведено в табл. 1.

Использование менее 120 кг экстрагента не позволяет покрыть все сырье экстрагентом, не образуется зеркало над поверхностью сырья. Поэтому минимальным количеством экстрагента является 120 кг изопропанола на 40 кг сырья, т. е. соотношение сырье-экстрагент составляет 1: 3.

Влияние кратности экстракции на выход целевого продукта при соотношении сырье-экстрагент 1: 3 и 8-часовом настаивании дано в табл. 2.

Влияние времени настаивания на выход целевого продукта при соотношении сырье-экстрагент 1: 3 и трехкратной экстракции приведено в табл. 3.

Изучение биологической активности
Желчегонная активность исследуемого продукта изучалась в опытах на здоровых белых крысах по методике Н. Д. Новосилец путем регистрации степени заполнения желчи трубки капилляра, вставленного в изолированную часть двенадцатиперстной кишки с впадаемым в нее желчным протоком. В выделившейся за трехчасовой опыт желчи определяли холестерин и желчные кислоты по методике В. П. Мирошниченко. Исследуемый продукт в дозе 10 мг/кг в 2 мл подсолнечного масла вводился зондом в желудок крыс ежедневно в течение 10 дней. Контрольными служили опыты с введением подсолнечного масла в том же количестве.

Для сравнения эффективности желчегонного действия исследуемого продукта ставились дополнительные опыты по той же методике с официальным препаратом фламином. Результаты опытов обрабатывали методом вариационной статистики.

Под влиянием исследуемого продукта у животных увеличилось выделение желчи по сравнению с контрольными опытами на 68,2% (Р < 0,001) (табл. 4). В выделившейся желчи содержание холестерина оказалось пониженным по сравнению с контрольными опытами на 22,8% , Р < 0,5, а желчных кислот - на 2,0% (Р < 0,5). Холятохолестериновый коэффициент в результате этого увеличился на 171,4% (Р < 0,01), что свидетельствует о антилитогенном действии продукта (табл. 5). Желчегонный эффект фламина был значительно ниже: выделение желчи под влиянием фламина по сравнению с соответствующим контролем повысился лишь на 25,9% , (Р < 0,05) (табл. 4).

Приведенные результаты свидетельствуют о значительном желчегонном и антилитогенном действии исследуемого продукта и могут служить экспериментальным обоснованием для разработки на его основе лечебного средства при патологии гепатобилиарной системы.

Гепатозащитное действие исследуемого продукта из отходов переработки ягод облепихи изучалось в опытах на белых крысах с дистрофическим поражением печени, вызванным трехразовым пероральным введением через день четыреххлористого углерода по 0,3 мл на 100 г массы тела в 50% маслянном растворе. Исследуемый продукт в дозе 10 мг/кг вводился перорально в 2 мл подсолнечного масла в течение 12 дней, из которых последние 6 дней одновременно вводился четыреххлористый углерод. В качестве вещества сравнения использовался официальный гепатопротектор легалон в терапевтической дозе 6 мг/кг. В сыворотке крови животных определялись общий белок, общий билирубин, холестерин, триглицериды, а в тканях печени - холестерин и гликоген. Результаты опытов обрабатывались методом вариационной статистики.

Как видно из табл. 6, гепатозащитное действие исследуемого продукта выразилось в нормализующем влиянии на нарушенные биохимические показатели: повышении по сравнению с контролем общего белка сыворотки крови на 38% (Р < 0,01) и гликогена печени на 166% ( Р < 0,01), снижении в сыворотке крови общего билирубина на 53% (Р < 0,001), холестерина на 28% (Р > 0,05), триглицеридов на 30% (Р < 0,01), а в тканях печени - холестерина на 46% (Р < 0,001), триглицеридов на 28% (Р < 0,02) и общих липидов на 40% (Р < 0,001).

Эффективность действия продукта была несколько ниже влияния легалона, однако превосходила последний по воздействию на содержание в печени триглицеридов, что весьма важно, учитывая развитие жирового перерождение печение при ее дистрофическом поражении.

Приведенные результаты позволяют заключить, что исследуемый продукт отличается достаточно высокими гепатозащитными свойствами.

Гиполипидемическая активность продукта из отходов переработки ягод облепихи исследовалась на белых крысах с экспериментальной гиперлипидемией, а также изучалось его влияние на возникновение экспериментального атеросклероза в опытах на кроликах.

При проведении исследований в сыворотке крови определяли холестерин по Мрскоса и Товарека, бета-липопротеидов по А. П. Климову с соавт. , фосфолипиды - по фосфору, определяемому по Фиске-Суббароу, вычисляли коэффициент ; в ткани аорты определяли холестерин и бета-липопротеиды по Т. Н. Ловягиной и Э. Б. Баньковской. Результаты полученных определений обрабатывали методом вариационной статистики.

Экспериментальная гиперхолестеринемия у 86 белых крыс вызывалась внутрибрюшинным введением твина-80 из расчета 200 мг/100 г массы тела. Одновременно перорально вводился исследуемый препарат в дозах 1, 10 и 100 мг/кг. Через 12 ч крыс забивали декапитацией и в сыворотке крови определяли содержание холестерина. В качестве веществ сравнения использовались полиспонин и цетамифен - официальные гипохолестеринемические препараты, а также сапарал - прототип по строению, гипохолестеринемическое действие которого было изучено ранее. Эти вещества вводились в максимальных терапевтических дозах.

Как показали опыты (табл. 7), в результате введения твина-80 у крыс контрольной группы уровень холестерина в крови по сравнению с интактными животными существенно повысился (на 43,5% , p < 0,001). Введение исследуемого препарата задерживало повышение холестерина в крови у животных под влиянием твина-80, причем наиболее выраженный эффект оказали дозы 10 и 100 мг/кг, обусловившие снижение холестерина 34,6% , p < 0,001 и на 28,3% p < 0,01 соответственно. Гипохолестеринемическое влияние исследуемого продукта заметно превышало действие полиспонина, цетамифена и сапарала.

Сходные результаты были получены также при применении тритерпенового продукта из облепихи у кроликов с экспериментальным атеросклерозом.

Изучение противоатеросклеротического действия препарата проводили в опытах на 12 кроликах.

Исследуемый продукт скармливали в дозе 10 мг/кг ежедневно в течение 2 месяцев на фоне дачи холестерина (200 мг/кг).

При одновременном скармливании кроликам продукта и холестерина происходило более медленное, чем в контроле (при скармливании кроликам только холестерина) развитие гиперхолестеринемии и гипер-бета-липопротеидемии (табл. 8). Содержание в крови холестерина к концу опыта отличалось от контроля на 57,9% (Р < 0,001), содержание бета-липопротеидов на 39,9% (Р < 0,02), величина - на 40,9% (Р < 0,001). Исследование аорты также выявило отчетливое влияние продукта на нормализацию холестерина и бета-липопротеидов (табл. 9). В аорте кроликов опытной группы содержание холестерина было на 42,3% ниже, чем в контроле (p < 0,01) и существенно не отличалось от его содержания у интактных кроликов количество бета-липопротеидов аорты у опытных животных было меньше, чем в контроле на 39,5% (p < 0,02) и приближалось к уровню у интактных животных.

Полученные результаты свидетельствуют, что прием исследуемого препарата из облепихи оказывает значительный нормализующий эффект на показатели липидного обмена как у белых крыс с гиперлипидемией, так и у кроликов с экспериментальным атеросклерозом, превышающим по своему уровню официальные противоатеросклеротические препараты. Это позволяет полагать, что исследованный продукт может быть использован в качестве основы для получения нового эффективного гиполипидемического и противоатеросклеротического средства.

Использование: изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения средства, обладающего гиполипидемическим и противоатеросклеротическим действием. Целью изобретения является расширение спектра действия за счет гепатозащитной, желчегонной и антилитической активности. Сущность изобретения заключается в экстракции шрота ягод облепихи после получения облепихового масла изопропиловым спиртом при соотношении сырье: экстрагент 1 : 3 в течение 8 ч при кратности экстракции 3. Далее выделяют целевой продукт осаждением из упаренного концентрата петролейным эфиром и отфильтровывают. Положительный эффект заключается в получении продукта, обладающего многофункциональным действием. 9 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИМ И ПРОТИВОАТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ путем экстракции растительного сырья органическим растворителем, с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью расширения спектра действия за счет гепатозащитной, желчегонной и антилитогенной активности, в качестве растительного сырья используют шрот ягод облепихи после получения облепихового масла, экстракцию проводят изопропиловым спиртом при соотношении сырье : экстрагент 1 : 3, в течение 8 ч при кратности экстракции 3, а выделение осуществляют осаждением целевого продукта из упаренного концентрата петролейным эфиром и фильтрацией.