Способ определения рецессивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 

60

i т

Г

(Л

гм

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЦЕССИВНОГО ГЕНА ПИГМЕНТАЦИИ У ЖИВОТНЫХ С БЕЛОЙ ШЕРСТЬЮ путем измерения изменений ее характеристик после облучения ультрафиолетовыми лучами, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и быстроты способа, в качестве измеряемой характеристики используют интенсивность люминесценции пробы шерсти.

гт

10-20

20

а

М

ЮО Изобретение относится к селекции .Сельскохозяйственных животных, преимущественно овец, и может быть использовано для проверки отбираемых для племенного использования животных на гомоэиготность по белой маети и для отбора из стада гомозиготных или гетерозиготных особей для .проведения генетических экспериментов . Известен способ определения рецес сивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью, основанный :на изучении изменения сигнала электронного парамагнитного резонанса пос ле ультрафиолетового облучения обра цов шерсти Недостатком этого метода являетс установление присутствия гена у данной особи по результатам корреляционного анализа, т.е. по результатам обязательного исследования образцов шерсти от (как минимум) нескольких десятков животных. Целью изобретения является повышение точности И быстроты способа. в способе определения рецессивно го гена пигментации у животных с бе лой шерстью путем измерения изменений ее характеристик после облучения ультрафиолетовыми лучами в качестве измеряемой характеристики используют интенсивность люминесценции пробы шерсти. П р. и м .е р. Для осуществления предлагаемого способа можно использо вать в качестве флнюриметра, например, люминесцентный микроскоп МЛ-2 с микрофотометрической насадкой ФМЭЛ1у4.2 { в состав которой входит фотоэлектронный умножитель ФЭУ-ЗЭА, со единенный с электрометрическим усилителем У5-7), а в качестве ультрафиолетового облучателя - терапевтическую установку ОРК-21 со ртутнокварцевой лампой высокого-давления ПРТ-375. Образцы состриженной весно шерсти из нижней защищенной сохранив шимся жиропотом части штапеля моют в трех сменах ксилола, высушивают п комнатных условиях, нарезают ножницами на короткие отрезки длиной около 0,5 мм, помещают в дистиллирован ную воду, налитую на чистое npe,nweT ное стекло, и, по возможности, равн мерно распределяют на предметном стекле. Препарат хранят в темноте или при слабом рассеянном освещении до полного высыхания в течение нескольких часов. Далее препарат устанавливают на столик люминесцентного микроскопа, предвар.ительно отъюстир ванного для наблюдения волос в свет их лк 1инесценции при освещении свер ху через объектив светом ртутной лам пы сверхвысокого давления ДРК-120, пропущенным через светофильтр УФС3(5)(зона пропускания 300-400 нм).Вы бор чувствительности прибора диафрагмы осуществляется с таким расчетом, чтобы темновой ток ФЭУ не превышал 10-20% длины шкалы гальванометра усилителя У5-7,а помещение на столик микроскопа эталона яркости люминесценции - уранового стекла ЖС-19 толщиной 1,5 мм,при использовании зонда 0,1 мм насадки ФМЭЛ-1У4.2 при объев тине 40х и запирающем светофильтре ЖС-3(2) с зоной пропускания больше 400 нм вызывает дополнительное отклонение стрелки гальванометра еще на 1/3 шкалы. Для измерения яркостилюминесценции волос устанав ливается зонд 0,5 мм. При этих условиях диаметры наблюдаемых в окуляр изображений волос оказываются немного большим, чем диаметр изображения зонда. Перемещая предметный столик микроскопа, последовательно устанавливают изображения 100 волосков так, что центр зонда оказывается на продольной оси.волоса, и для каждого волоска регистрируют показания гальванометра, соответствующие лркости его люминесценции. Затем стекло с волосками подвергают облучению лампой ДРТ-375 (лучистый поток при длине волны 240-320 нм равен 30 Вт) с расстояния 0,5 м в течение 1ч, после чего вновь наливают на препарат дистиллированную воду и после высушивания стекла с волосками в темноте или на рассеянном свету в течение нвскольких часов.повторяют процедуру измерения яркости лнвлинесценции 100 волосков. Далее для 100 волосков вычисляют среднюю яркость по (J) и после ( ) облучения лампой ДРТ-375 и разность средних яркостей выражают в процентах исходной яркости -100%. На чертеже представлен график осуществления способа. , Животные, образцы шерсти которых имеют iD больше 29%, являются гомозиготными по доминантной белой масти, т.е. лишены рецессивного гена пигментации шерсти, а образцы с меньше 21% принадлежат гетерозиготам, т.е. : животным, несущим рецессивный ген пиг ментации. В силу стохастических флюктуации в редких случаях возможно получение значений д.и меньше 30% и больше 21%. В этом случае необходимо произвести повторные измерения Э., и на новом препарате шерсти от того же животного и взять среднее значение прежнего и нового значения t, которое неизменно оказывается или больше или равно 30% или меньше 21%. Преимуществом предлагаемого способа является возможность определить наличие у данного животного рецессивного гена пиг юнтации шерсти, ограничившись исследованием шерсти только этого животного без исследования мно гих десятков других животных, как эт го требует существенный способ, осно ванный на ЭПР-спетрометрии образцов Шерсти с последующим корреляционным анализом. Это существенно, когда воз никаёт необходимость исследовать конкретное животное/намеченное для широкого генетического использования на наличие рецессивного гена пигментации шерсти, В этом случае предлагаемый способ снижает .необходимость в трудовых затратах на сбор шерсти от многих десятков особей, расходы времени и материалов и взвешивание большого числа образцов шерсти, необходимых для проведения корреляционного анализа. и потребность в самом проведении десятков записей ЭПР-сигналов и их корреляционном анализе. Процедура приготовления препарата шерсти для флюориметрического исследования не требует такой медленной процедуры, как взвешивание образцов на аналитических весах, без которого нельзя обойтись при ЭПР-спектрометрическом способе определения рецессивного гена. Время измерения яркости люминесценции одной пробы шерсти составляет 30 мин. За три рабочих дня квалифицированный лаборант может исследовать 10 образцов с учетом н.еобходимости двухкратного флюориметрирования образца, мытья, смачивания, сушки шерсти и настройки прибора по эталону яркости.