Способ подготовки для исследования на электронном микроскопе мелких водных животных Советский патент 1983 года по МПК A01N1/00 A01N1/02 

(Л

с:

4 Ю Ю |1зобрете4ние относится к способам подготовки для исследования на растровом электронном микроскопе мелких, преимущественно водных животных: инфузорий, коловраток, ракообразных, и может быть использовано для изучения морфологического строения микроорганизмов, водорослей и других биологических объектов, форма которых меняется при высушивании их. Известен способ сушки биологических образцов при критической точке, в котором предварительно фиксированные в спирте или формалине организмы проводят через ацетоновые растворы повышающейся концентрации с последующей обработкой жидким углекислым газом. После переведения биологиче-кого объекта, из ацетона в углекислоту последнюю испаряют в специальном аппарате при температуре критической точки углекислого газа С 1 Недостатками этого способа являются дороговизна-его ималая доступность для большинства исследователей из-за необходимости применения особых криостатов, главным образом зарубежного производства, а.также необходимость полумения и хранения сжиженного углекислого газа. Цель изобретения - устранение дороговизны, малой доступности для исследователей - морфологов и необходимости работы со сжиженными газами. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу подготовки для исследования нэ электронном микроскопе мелких -водных животных, включающему фиксацию животных органическими растворителями, химическое обезвоживание, многократную промывку эфиром при повышении его концентрации и сублимационной сушке последнюю проводят с помощью нафталина, которым пропитывают животных, предварительно введя нафталин в эфир в процессе химического обезвоживания, причем отгонку эфира проводят при 20 - . П р и. м е р . Объект фиксируют спиртом и помещают на поверхность шелкового сита в стеклянную трубку. Концентрацию водного раствора спирта в ванночке повышают до абсолютного спирте путем полной смены растворов. Абсолютный спирт сменяют дважды, после чего его заменяют серией растворов диэтилового эфира повышающихся кон ют про лин рас 20° ют вре при О Ра Эт сп во Сп эт Ди вы На в ентраций. Объект трижды промываистым диэтиловым эфиром, а затем одят через серию растворов нафтав диэтиловом эфире. Последний вор этой серии насыщенный при раствор нафталина в эфире сменяважды. Концентрация растворов и я выдерживания в них объекта одятся в таблице. ПримечаКонцентВремяворы рация, % ние выдерживанияв растворах, мин. овый т в рт Двойная ловый смена реактиватилоТройнаяэфир смена реактиваталин фире Насыщенный растДвойнаявор смена реактива

После этого объект пипеткой пере-носят в вытяжной шкаф, где при 20 носят с шелкового сита на столик30°С производит сублимацию нафталина,

растрового электронного микроскопаПосле возгонки нафталина объект освместе с небольшим количеством раст-тается на поверхности столика в том

вора. Эфир Постепенно отгоняют, при 5же виде, какой имел в водной среде,

этом нафталин кристаллизуется и объектпричем неповрежденными оказываются

оказывается включенным в монолит , даже тончайшие реснички коловращатель

нафталина. Столик с объектом пере-ного аппарата.