Способ консервирования изолированных клеток печени Советский патент 1983 года по МПК A01N1/02 

9 1

С

СИОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ИЗОЛИРОВАЙНЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ путем Помещения их в консервирующие растворы, охлажденные до , о т л и ч :Д ю щ и и с я тем, что, .0 целью уветтче ня срока храиениА и увеличения жизнеспособных клеток, взвесь изолированных клеток сначала помещают в отдельные емкости объемом 1,0-1,5 см из полупроницаемой мембран ы, смену среды проводят трижды через каждые 10

о ел :о эо

Изобретение, относится к медицине и может быть использовано . при консервировании изолированных клеток печени.

. Известе способ консервирования изолировануых клеток печени путем помещения в консервирующие растворы Тироде, Эрка, Хенса, Игла среды. 199 с последующим -выставлением их в холодильник при + 2-4 С и сменой средычерез определенные интервалы l

Однако известный способ характеризуется тем, что клеточная взве при хранении в среде консервирования в нижних отделах флакона образует осадок - многослой клеточной взвеси толщиной lvO-1,.5 см и поэтому поверхностный слой клеток имеет хороший- контакт со средой, а нижние слои клеток - плохой что и определяет значительное разpyuJёниe клеток и особенно в нижних слоях осадка, что подтверждается проведенными морфологическими исследованиями. В результате этого способ позволяет сохранить к 30 дню только 47% клеток, которые при окрашивании 0,2%-ным раствором трипановой срни остаются светлыми, то есть жизнеспособными

Цель изобретения - увеличение срока сохранения и увеличение количества жизнеспособных клеток печен

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу консервирования изолированных клеток печени путем помещения их в кОнсервир тщие .растворы, охлажденные до 2-4°С взвесь изолированных клеток помещают в отдельные емкости объемом 1,0-1,5 см из полупроницаемой меМ браны, смену среды проводят трижды через каждые 10-12 дней.

Способ осу|;5ествляют следующим образом.;

В стерильных условиях проводят заготовку изолированных клеток печени путем использования ферментномеханического способа. Полученную клеточную взвесь разводят в среде 199 до концентрации 20 млн/мл и

заполняют ими стерильный шприц с точной градуировкой и стерильной системой гибких силиконовых трубок. . Одновременно проводят подготовку

пoлyпpoн цaeмoй целлофановой плен5 ки (.30, 100) , которую помещают в физиологический раствор, затем переносят в раствор дирцида 1 : .2000 для стерилизации, а зат.ем промывают целлофан дистиллированной 0 водой.

В условиях операционной участок пленки надевают на конец силиконово .го шланга и, отсупив на 1,0 см от его конца, накладывают лигатуру,

5 после чего в эту полость вводят 1. мл клеточной взвеси и, затягивая лигатуру, удаляют, силиконовый шланг. Таким образом, образуется замкнутая полость, в ко горой находится клеточQ ная взвесь. В стерильный флакон . (500 мл) помещают 350-400 гранул, которые дополнител ьно заливают средой 199, и флакон вновь герметично закрывают в холодильник с темпера5 турой -ь 4°С. Гранулы во флаконе находятся как бы во взвешенном состоянии. За флаконом с гранулами проводят динамическое наблюдение (10-12, 20-24, 30-36 дн), следят за окраской среды изме,няют рН среды, через определенные временные цнтервалы проводят забор гранул, вскрытие их, приготовление мазка клеток с последующим подсчетом клеток в поле зр,ения . после обработкиих витальными телями. Через каждые 1о-12 дн проводят смену среды путем удаления старой и заливки флакона новой средой 199.Гранулы сохраняют в течение 30-J6 дн.

0 Использование предлагаемого способа консервирования изолированных клеток печени позволяет увеличить срок сохранения и количество жизнеспособных клеток 9 47 до 76%, прб5 водить просто и быстро смену среды, сохранять гранулы, а соответственно и изолированные клетки во взешенном состоянии и, обеспечивая хороший кон т а.ктклеток со средой, упрощает

Q их использование