Штамм черных дрожжей @ @ @ -11,используемый для очистки сточных вод от фенолов и лигнина Советский патент 1984 года по МПК C12N1/16 C02F3/34 C12N1/16 C12R1/00 C02F3/34 C02F101/30 C02F103/28 C02F103/36 

с Изобретение относится к микробй логической промвдоленности и может быть использовано для биологическо очистки сточных вод от органически соединений, в частности от фенольных и серосодержащих соединений, на предприятиях целлюлозно-бумажно нефтяной, углехимической и других областей промышленности. Известен штамм Citrobacterfгеundii 21 для очистки сточных вод от додецилсульфатов. Известен штамм Pseudomonas sp 1 для очистки промышленных сточных вод от алкилсульфатов til. Известен также способ очистки сточных вод от фенолов Грибами С21 Недостатками этих штаммов является невысокая активность деструкции по отношению к фенольным соеди нениям.,Целью изобретения является штам который способен утилизировать фено лыи лигнин. Поставленная цель достигается тем, что используют штамм черных дрожжей вида Exophiala nigrum R-11 который осуществляет биологическую очистку от фенолов и лигнина. Культура ; черных дрожжей, иден тифицированных как Е nigrum J твапелена из проб байкальской воды, отобранных в прибрежной зоне Южног Байкала с использованием мембранны фильтров. Штамм R-11 вьщелен методом клон рования с применением микрсмианипул тора и последующего рассева. Получ но около сорока клонов, послуживши материалом для селекции и токсикогенетических испытаний. Штам14 черных дрожжей Exophiala nigrum R-11 хранится в коллекции лаборатории генетики НИИ биологии Иркутского госуниверситета и в кол лекции ВНИИ генетики промышленных микроорганизмом (Москва), где ему присвоен регистрационный номер ЦМПМУ- 309 . После проверки на патогенность для теплокровных животных и человека, а также для злаковых сельскохозяйственных культур штамм R-11 рекомендован к внедрению в промыишенности, как непатогенный . Г1тамм черных дрожжей- Exophiala nigrum R-11 обладает следующими признаками. Морфологические признаки. В жидких средах при без встряхивания штамм образует овально-удлиненные клетки 5,2/8,3x1,9-4,7 мкм. Раз множение верхушечным или боковым почкованием, часто односторонним. Иi округлых крупных клеток образуют ся гифы мицелия. Мицелий 30-суточноП. культуры сильно развит, септированный, нерегулярно-разветвленный, в основном истинный, субстратный или воздушный. Культуральные признаки. При росте в жидкой глюкозо-пептонной среде или на сусле на 3 сут наблюдается помутнение, на дне осадок, неясная пленка, колько отсутствует или частичное . Через месяц кольцо очень толстое, на поверхности среды обособленные дерновинки мицелия. На дне незначительный осадок дрожжеподобных клеток, мути нет. На агаризованиых средах штрих прямой, профиль выпуклый, край ровный, цвет черный блертящий, консистенция Слабослизистая. Через месяц штрих черный или буровато-серый, неравномерно-опущенный, поверхность складчатая, край ворсинчато-окаймленный. Гигантская колония .достигает диаг метра 19-25 мм, выпуклая, опущенная, буровато-серая с ровным крЬем, с приподнятой центральной частью, окруженной гладким черным валиком, редкие радиальные складки. Физиологические признаки. Лэроб, образует черный пигмент, сахара не Сбраживает. Хорошо ассимилирует D.глюкозу, D-ксилозу, сахарозу, раство римый крахмал, глицерин, D-молочную кислоту, медленно ассимилирует ot-рамнозу, - -арабинсзу , малЬтозу, D-ijiaHHHT, D-сорбит, Слабо ассимилирует D-галактозу, рафинозу, этанол, дульцит, i-инозит, не ассимилирует, лактозу, лимонную кислоту, гексадекан. Из источников азота .ассимилирует нитриты, в среде без витаминов рост медленный, на среде с 50%-ной глюкозой не растет, выдерживает концентрацию Had, равную 7%. Оптимальная температура роста 20-25 С:, при 30-37С не растет. Чувствителен к 100 мкм/мл циклогексимида, обладает уреазной активностью, кислотообразование на меловом агаре отсутствует, желатин не разжижает, жир не гидролизует, эфир и крахмалоподобные соединения не образует. Шта№1 R-11 способен утилизировать фенолы. Пример 1. Штамм черных дрожжей Expplviala nigrum R-11 выращивают на сусло-агаре или. глюкозопептонной среде при , делают смыв, В 100 мл воды, содержащей пирокатехин или любой другой фенол: гидрохинон, фенол, гваякол в концентрации 10 м, вводят суспензию 2 г черных дрожжей и через 24 ч определяют остаточное содержание фенолов методом потенциометрического титрования. Степень очистки от пирокатехина 96,6%, от гидрохинона - 86,2%, от фенола - 04,3%, гваякола - 82,3%.

Штамм. R-ll способен усваивать лигнин в качестве источника углевод ного питания.

Пример 2. Данные приведены в табл. 1.

Штамм R-11 способен расти на средах, где единственным источником углеводного питания является диоксан-лигнин..

П РИМ е р 3. Интенсивность прироста штамма R-11 на 1%-ном растворе диоксан-лигнина приведена / в табл. 2.

Через 20 сут культивирования концентрация клеток в 1 мл питательной диоксанлигниновой.среды увеличивается в 9,У раз по сравнению с исходной. За 5 сут штамм П-11 усваивает 30% лигнина, растворенного в нейтрал ьной среде.

Показана высокая устойчивость штамма R-11 к органическим и неорганическим соединениям и их смесям, встреча1ац1}мся в промстоках сульфатцеллюлозного производства.

Показатели

Пример 4. В табл. 3 приведена выживаемость штамма R-11 при действии высоких концентраций соединений и смесей.

Полученный штамм позволяет очищать стоки сульфатцеллюлозных предприятий и может быть рексмендован как компонент микробиоцёноза, осуществляющего биологическую очистку от фенолов и лигнина, не вызывает 0 вторичнЬго загрязнения.

I .Т а б л. и ц а 1

15

УЕР

59

100

Азотная

0 основа+ лигнин (0,5%)

84142,4

Таблица, 2

Продолжительность культивирования,

сут.

Штакм черных дрожжей Ехоphialar nigrum R-11 (депонирован в Центральном Музее промьюшенных мик- роорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номергЦМПМу-309), используемый для очистки сточных вод от фенолов и лигнина.

Концентрация клеток в 1 мл

-(х 10)6,53 35,1 52V4

Коэффициент прироста

Концентрация, мг/л

СоёдИ нение (смесь)

.Смесь монофенолов (80% гваякола, 9,5% о-крезола, 9,5%. ванилина, 1% фенола )

Смесь дифенолов 50% гидрохинона, 25% пирокатехина, 25% резорцина) Смесь моно-дифенолов (50% смеси монофенолов, 50% смеси дифенолов)

64,5

53,2

9,9

8,1

8,0

5,4

Таблица 3

Выживаемость tx f m), %

93,1i- 9,7

87,0± 9,7 81,4 ±4,0