ШТАММ БАЗИДИАЛЬНОГО ГРИБА CORIOLUS HIRSUTUS (WULF EX. FR.) QUEL - ПРОДУЦЕНТ ЛАККАЗЫ Российский патент 1995 года по МПК C12N9/08 C12N9/08 C12R1/645 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма Cor. hirsutus (Wulf. ex. Fr.) Quel, который при культивировании на жидкой питательной среде синтезирует внеклеточные окислительные ферменты, в частности лакказу.

Прототипом предлагаемого штамма может служить известный штамм базидиомицета Cor. hirsutus (Fr.) Quel, синтезирующий внеклеточную лакказу при температуре 25^оС в течение 5-7 сут роста [1]
Предлагаемый новый штамм C. hirsutus 0935 обладает способностью синтезировать внеклеточную лакказу с более высокой каталитической активностью и за более короткий срок культивирования, что очень важно в промышленных условиях, т.к. значительно сокращается вероятность заражения посторонней микрофлорой.

Выделяемая из культуральной жидкости лакказа может быть использована в медицине при иммунохимических исследованиях, для проведения исследовательских работ, для очистки сточных вод от фенолов, в аналитических целях для анализа полифенолов и лигнинов.

Штамм C. hirsutus изолирован в чистую культуру из ткани плодового тела и хранится во Всесоюзной коллекции базидиомицетов Ботанического института им. В.Л. Комарова РАН под номером ЛЕ 0935.

Культурально-морфологические признаки.

Культура С. hirsutus 0935 поддерживается на косяках сусло-агара. Хранится в рефрежираторе при температуре 4-6^оС.

Макроскопические признаки.

Образует гифы субстратного и воздушного мицелия белого цвета. Агар не пигментирован. Чашки Петри с сусло-агаром при температуре 24-26^оС полностью зарастают на 5-7 сут роста. Культура ватообразная, растущий край тонкий волокнистый. Ткань колонии кожистая.

Микроскопические признаки.

Гифы воздушного мицелия трех типов:
Сильноразветвленные, тонкостенные гифы с псевдопряжками 0,5-1 мкм в диаметре;
Широкие тонкостенные гифы с частыми перегородками и многочленными пряжками диаметром 2-3 мкм и 4-6 мкм.

Длинные, чуть извитые, толстостенные без перегородок, иногда с вздутиями гифы без пряжек.

Гифы субстратного мицелия: по 1 и 2 типу воздушного мицелия.

Физико-биохимические признаки.

Культура гриба интенсивно развивается при температуре 24-28^оС. На жидких питательных средах с органическим и минеральным источником азота и углерода в присутствии минеральных солей (калий фосфорнокислый однозамещенный или двузамещенный, магний сернокислый, марганец сернокислый, цинк сернокислый и сернокислое железо) при поверхностном и глубинном культивировании синтезирует внеклеточную лакказу.

Cor. hirsutus 0935 культура дереворазрущающего гриба, относится к возбудителям белой гнили древесины, дает положительный тест на реакцию Бавендама на среде с таннином.

Применимость штамма доказывается следующим примером.

П р и м е р. Штамм-продуцент выращивают глубинным способом в колбах Эрленмейера, содержащих по 100, 300 и 700 мл питательной среды следующего состава, г/л: глюкоза 10; пептон 3; KH₂PO₄ 0,6; K₂HPO₄ 0,4; MgSO₄˙7H₂O 0,05; FeSO₄˙7H₂O 0,005; ZnSO₄˙7H₂O 0,001; MnSO₄˙5H₂O 0,003; вода до 1 л; рН после стерилизации 5,6-5,8. Культивируют при температуре 24-26^оС на качалке при 120-140 об/мин в течение 3-5 сут.

Посевной материал вносят в виде суспензии (измельченная пленка, выращенная на питательной среде того же состава) в количестве 10% от объема среды.

Через 3-4 сут (при достижении максимальной активности лакказы) культуральный фильтрат отделяют от мицелия, лиофильно высушивают и используют для выделения фермента лакказы путем осаждения этанолом с последующей очисткой методом гель-хроматографии. Активность лакказы определяли спектроскопически с использованием в качестве субстратов феррацианид-иона, гидрохинона и пирокатехина.

Преимуществом предлагаемого нового штамма является высокая каталитическая активность лакказы, достигаемая за более короткий срок культивирования гриба, что видно из таблицы.

Из таблицы видно, что значение каталитических констант лакказы, выделенной из культурального фильтрата предлагаемого нового штамма, выше в 1,2 раза, чем в прототипе и, что особенно важно, есть возможность получения более активного препарата лакказы при значительно сокращенном времени культивирования.

Предлагаемый новый штамм расширяет набор штамма базидиальных грибов, продуцентов лакказы, необходимой в медицине, в аналитических целях и для очистки сточных вод от фенолов.

Использование: изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для проведения научно-исследовательских работ, в аналитических целях для анализа полифенолов и лигнинов, а также для очистки сточных вод, содержащих лигногуминовые вещества. Сущность изобретения: выявление штамма базидиального гриба Coriolus hirsutus (Wulf ex.Fr.) Quel ле 0935 - продуцента внеклеточной лакказы с высокими значениями каталитических констант (540, 320, 550) за 3-4 сут. культивирования базидиомицета. 1 табл.

Штамм базидиального гриба Coriolus hirsutus (Wulf ex.Fr.) Quel LE 0935 - продуцент лакказы.