Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления антител к @ @ типа " @ Советский патент 1984 года по МПК A61K39/02 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам серологической диагностики инфекционных заболеваний. Известен способ получения эритроцитарного даагностикума для выявления антител Наето- philus influenzas типа В, в котором в качестве сенситина для эритроцитов используют лнзаты культур Haemophilus influenzae типа В, полученные в результате действия додецилсульфата с последующим освобождением от белков путем многократной обработки смесью хлороформ - амиловый спирт, очисткой активирован ным углем-, осаждением спиртом и обработкой ферментом ДНК-азой 1. Однако данный способ недостаточно чувствителен и характеризуется нестабильностью получаемых реагентов. Целью изобретения является повышение чувствительности и стабильности зритроцитарного даагностикума. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения зритроцитарного даагносЕикума для выявления антител к Haemophilus influenzae типа В путем сенсибилизации зритроцитов сенситином, в качестве сенсипша используют капсульный антиген E.coli К100, перекрестно реагирующий с Haemophilus influenz типа В и полученный путем обработки водног зкстракта культуры возрастающими концентрапнями триметилцетиламмония бромистого и натртя хлористого. Способ осуществляется следующим образом. Культавируют E.coli К100 на коммерческих агаровых средах. Затем получают водные зкстра ты культур. После чего их обрабатьгоают триме галцетиламмонкем бромистым и натрием хлористым. Полученным сенситином (генсибилизируют эритроциты. Пример. Взвесь 20-часовой апаровой культуры E.coli К100смьшают дистиллированной водой, помещают в аппарат для встряхивания на 1 ч и центрифугируют при 5 тыс. об/мин 20 мин (схема 1). К надосадочной жидкости добавляют до 0,1% триметилцетиламмония бромистого (0,1 мл 10%-ного раствора на 100 мл жидкости). Сформировавшийся в течение 2 ч при 4 С осадок отделяют. К надосадочной жидкости, полученной после центрифугирования при 5 тыс. об/мин 20 мин, добавляют до 0,01 Мтриметнлцетиламмония бромида (3,65 мл 10%-ного раствора на 100 мл жидкости). Сформировавшийся в течение 2 ч при -4 С осадок отделяют центрифугироваиием при 5 тыс. об/мин и ресуо пендируют в 0,1 N -растворе NaCl и вновь центрифугируют при тех же условиях. Осадок ресуспендируют в 2 М растворе NaCl, центрифугируют, осадок отбрасывают, а к надосадку добавляют зтанол в соотнощении 1:2. Осадок формируется :18-20 ч, при . Полученный антигенный ком Ш1екс (КПС) отделяют центрифугированием, раст(рас-гворяют в 50 мл дистиллированной воды и 1лиофильно высушивают. Сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барабана (или кур) проводят при в течение 2 ч. Доза КПС E.coli К100 составляет 50 мкг на 1 мл 5% эритроцитов. После , трехкратного отмывания физиологическим раствором (центрифугирование при 1000 об/мин 10 мин) надосадочную жидкость удаляют и добавляют 0,85% NaCl. с 1%-ного нейтрального формалина (рН-7,2) так, чтобы получить 2,5%-ную взвесь сенсибилизированных зритроциюв. Контроль проведенной сенсибилизации проводят в РПГА с применением стандартной агглютинирзкнцей сьгеоротки к Haemophilus, influen- zae Tffiia В и E.coli К100. Полученный препарат КПС E.coli К1 СЮ обладает высокой антигенной специфичностью и активностью. Наиболее высокие титры гемагглютишшов выявлены в опытах с ди:агностикумом из КПС E.coli KIOO. С диагностикумом КПС Е.со11 К 100 в 25 сыворотках выявлено наличие антител к Haemophilus influenzae типа В с диагностическим титром 1:1280 и выше. Для выявления аналогичного количества положительных сьгоороток (26) в опытах с диагностикумом из Haemophilus influenzae типа В (прототип в качестве диагностического приходилось считать титр 1:20 и выше.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭИПТОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К Haemophiius influenzae ,ТИПА В путем сенся&шизащш эритроците сенситином, отличающийся тем, что, с целью повышения чувсгвятелыюстя я .стабильности препарата-, в качестве сенситяяа используют капсульный антиген E.coli klOO, перекрестно реапфующий с Haemophiius influenzae типа В и получеш1Ь1й путем обработки ВОЩ1СГО экстракта культуры врзрас таюпдами концентрациякп тримютилцБтюпммония бромистого и натрия хлористого.