Производные 3-метил-2-азафлуоренона-9,обладающие свойствами ингибиторов глутатионредуктазы Советский патент 1984 года по МПК C07D221/06 A61K31/439 A61P43/00 

4;;i)i эо | Изобретение относится к новым производным 2-вэафлуоренона-9, обладающим ферментингибируняцей актив ностью. Известно ингибированне глутатио редуктазы азофеном {дигидрохлорид (Ч-пипераэинил)-10-мeтил-3,4-диaзa фeнoнкcaзинa) , который полностью П давляет активность )ермента в концентрации 4 «10 ij . Недостатком этого соединения яв ляется его сравнительно невысокая ингибирующая активность. Наиболее близким к изобретению является З-метил-2-азафлуоренол, который в концентрации подавля ет активность глутатионредуктазы на 30% 2 . Недостатком этого соединения яв ляется его низкая ферментингибирую тая активность. Цель изобретения - новые производные 2-азафлуоренона-9, обладающие более высокой ингибирующей активностью по отношению к глутатион редуктазе. Поставленная цель достигается производными З-метил-2-азафлуорено на-9 общей формулы .ЙКз (Т) RX. где R О, когда RX НС , или R NOH, когда RX , обладающими свойствами ингибиторов глута ти,оиредуктазы„ Предлагаемый способ получения соединений основан на реакции соле образования з и включает взаимодействием 3-метил-2-азафлуоренонас. хлористым водородом или З-метилазафлуоренон-9-оксима с йодистым м тилом. Пример 1. Гидрохлорид 3метил-2-азафлуоренона-9 (соединени 1). В раствор 0,5 г З-метил-2-азафлу ренона-9 в 50 мл абсолютного эфира пропускают ток сухого хлористого во дорода до прекращения выпадения оса ка. Осадок отфильтровывают, сушат н щелочью, кристаллизуют из абсолютного спирта. Получают 0,51 г (86%) хлоргидрата 3-метил-2-азафлуоренона т.пл.199-2000с. Найдено, % : С 66,8. Н 4, 5,9 Вычислено, %: С 67,4; Н 4,3, N 5,0 ИК-спекто: 1770 смЧС 0) 2800, 1700 шир,). При м е р 2. Йодметилат З-ме-тил-2-азафлуоренона-9-оксима(соединение 2). К 0,3 г (1,4 1 1моль; Т-м тил-2-азафлуоренон-9-оксима добавляют 0,32 мл (5 ммоль) йодистого метила. Сразу после растворения оксима выпадает осадок йодметилата. Реакционную массу нагревают в течение 20 мин до кипения йодистого метила.. Затем осадок отфильтровывают, сушат в. вакууме, кристаллизуют из этанола. Получают 0,45 г (90%) целевого 240 С (с разложепродукта с т.пл. нием), С 47,8-; Н 3,б, N 7,7 Найдено, % C,.2H|.jN201 С 47,7,И 3,7/ N 7,9. Вычислено,% i ИК- спектр| 3200 (ОН) 2800, 1700 (N-), 1710 (, C N), Инрибирование глутатионредуктазы. Использовали высокоочищенные препараты глутатионредуктазы (ГР), полученные из печени и гепатомы крыс с использованием методов фракционирования сульфатом аммония, гель-фильтрации и афинной хроматографии. Активность глутатионредуктазы.определили спектрофотометрически по уменьшению оптической плотности НАДФ. Н при 340 им в термостатированных кюветах при . Система для определения активности содержала в конечном объеме 2 мг 0,1 М калий-фосфатного буфера, рН 7,6; 0,1 мНАДФ.Н, 0,5 мм ЭДТА, 1,0 мМ окисленного глутатиона. Растворы субстрата, кофермента и. ингибиторов готовили непосредственно перед работой. Исследуемые вещества вносили в кювету перед добавлением субстрата. Растворы ингибиторов готовили в исходной концентрации , конечная концентрация достигналась последовательным разведением исходных растворов непосредственно в кювете для определения активности. Начинали ферментативную реакцию добавлением субстрата. Полное ингибирование ГР достигалось при конечной концентрации (1) и (2) - 4-10- М. Ингибирование на 50% наблюдалось соответственно при концентрации (1) - 2,510 М и (2) - , Ингибирование обратимо, так как активность ГР восстанавливалась после снижения концентрации ингибитора разведением спустя 1 ч после предварительной инкубации фермента с избытком ингибитора. Ингибирование носит конкурентный характер по отношению к субстрату (глутатиону) и бесконкурентный по отношению к коферменту (НАДФ.Н). Ингибирующее действие (1) и (2) на ГР превосходит ранее показанное влияние азофена, .который полностью ингибировал ферменты в концентрации 410 М, а также действие хлоргидрата З-метил-2-азафлуоренона, подавляющего в концентрации 10 м активность ГР всего на 30%.

310748704

Таким образом, соединения (1) и редуктаэу, превосходящим действие (2) облёщают специфическим ингибиру- аналога азофена и хлоргидрата 3-меющим действием на фермент глутатИон- тил-2-аэафлуоренона.

Производные З-метил-2-азафлуоренона-9 общей формулы Л О, когда RX НСг или где R NOH, когда RX СНз, обладающие свойствами ингибиторов глутатионредуктазы. С € (Л