СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГОМЕОПАТИЧЕСКОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА Российский патент 2012 года по МПК G01N33/68 

Одним из направлений в современной гомеопатии являются комплексные испытания гомеопатических средств, включающие оценку их качества, эффективность и безопасность, проводимые чаще всего по международным стандартам, установленным для аллопатических препаратов.

Вместе с тем, доклиническое выявление фармакологической активности гомеопатических средств, и особенно неизвестных, в большинстве случаев является затруднительным или даже невыполнимым из-за низкой концентрации действующих веществ или множественного разведения лекарственного вещества.

Внедрение доклинических испытаний в изучение эффективности и безопасности гомеопатических препаратов «in vitro» будет способствовать более объективной характеристике этой группы лекарственных средств.

Гомеопатию - особый, проверенный веками эффективный метод лечения, условно можно отнести к современной наномедицине. Объединяет гомеопатические препараты и наноразмерные лекарственные вещества использование сверхмалых и ультранизких концентраций действующих веществ.

Однако в приготовлении гомеопатических лекарственных средств особую роль играет процесс множественных разведении с динамизацией - встряхиванием или растиранием (потенцирование) [см., например: В.Швабе. Гомеопатические лекарственные средства. М., 1967. С.12-34].

Не подвергшиеся процессу потенцирования субстанции, содержащие сверхмалые дозы лекарственных средств (при разбавлении выше числа Авогадро), биологической активностью не обладают. Потенцирование придает всем потенцированным препаратам особые свойства, активность потенцированных средств воспроизводима и специфична [Эпштейн О.И., Мартюшев А.В., Сергеева С.А. Перспективы терапии антителами в сверхмалых дозах // http://www.norna.ru/DIR00/3673.htm].

Известен способ изменения физико-химических или физико-химических и биологических свойств вещества путем физического воздействия, отличающийся тем, что физическое воздействие осуществляют введением в исходное вещество его потенцированной формы, полученной путем последовательного прогрессирующего разведения и многократного вертикального встряхивания или растирания исходного вещества по гомеопатическому методу динамизации. Экспериментальные данные показали замедление скорости реакции гидролиза, изменение токсичности и достоверно отличающейся метаболической активности, если в один из компонентов дополнительно вводят его потенцированную форму [Пат. РФ 2161955, 7 МПК А61К 9/00, B01F 3/00. Способ изменения физико-химических или физико-химических и биологических свойств вещества].

Одной из гипотез гомеопатии является представление о том, что в процессе изготовления гомеопатического лекарства происходит специфическое изменение структуры молекулярных конгломератов (кластеров) исходного вещества. Вероятно, воздействием этих молекулярных кластеров и опосредован эффект гомеопатических лекарств.

Есть свидетельства об изменениях свойств самой воды (как растворителя), в которой разводится субстанция. С помощью ядерного магнитного резонанса исследователи обнаружили четкие отличия при растворении высоких потенций Silicea от эффекта на воду плацебо.

«Растворяемое лекарственное вещество производит ряд физико-химических превращений в растворяющей среде с формированием в ней коллективного состояния конденсированной среды, включающей протонсодержащие аквокомплексы, несущие информацию о лекарственном веществе в своей ровибронной структуре, при полном устранении этого вещества из растворителя. В связи с этим определение качества гомеопатических лекарственных средств должно быть связано с определением параметров коллективного состояния лекарственной гомеопатической среды».

Но безопасность и эффективность, «Пригодность лекарства для любого данного случая болезни зависит не только от точного гомеопатического выбора этого лекарства, но также и от размера, или даже малости дозы», - говорил основоположник гомеопатии Ганеман о дозе.

Известны результаты, полученные при тестировании доз субмолекулярного уровня (потенции выше 24 десятичной). В частности, несколько исследователей давали животным (обычно крысам) значительные дозы мышьяка, висмута, кадмия, хлорида ртути или свинца. Результаты показали, что у животных, получавших гомеопатические дозы этих веществ до и повторные гомеопатические дозы после введения больших доз, наблюдалось более активное выделение этих токсических веществ с мочой, фекалиями и потом, чем у животных, получавших плацебо.

Эффективность и безопасность, фармакологическую активность лекарственного средства гарантируют подлинность и качество препарата.

Известен способ определения качества гомеопатических лекарственных средств путем освещения когеррентным линейно поляризованным оптическим излучением исследуемой среды, регистрации рассеянного прошедшего излучения, анализа и сравнения с соответствующей оптической характеристикой эталонного образца, отличающийся тем, что в качестве исследуемой среды используют множественное разведение гомеопатического лекарственного вещества, не содержащее его молекул, и размещают ее в постоянном магнитном поле с возможностью регулирования его интенсивности, регистрацию рассеянного прошедшего излучения проводят посредством временного накопления значений интенсивности его поляризованной компоненты в режиме оптического смещения от разных точек исследуемой среды, а анализ осуществляют при вычислении частотного спектра сверхмедленных флуктуации интенсивности прошедшего излучения и сравнении его с эталонным образцом [Пат. РФ 2112976, МПК G01N 33/15, G01N 21/00, G01N 21/21. Способ определения качества гомеопатических лекарственных средств и устройство для его реализации].

Известен способ качественного определения гомеопатического лекарственного препарата или потенцированной формы вещества, включающий воздействие эталонным реагентом на исследуемую среду и регистрацию изменения физико-химических параметров, отличающийся тем, что в качестве эталонного реагента используют набор известных веществ, близких или сходных по структуре и/или составу к определяемому гомеопатическому лекарственному препарату или веществу в потенцированной форме, и антител к этим известным веществам, при этом идентификацию гомеопатического лекарственного препарата или потенцированной формы вещества производят по тому известному веществу, реакция которого с соответствующим антителом при введении в реакционную среду гомеопатического лекарственного препарата или потенцированной формы вещества протекает с изменениями, регистрируемыми иммунохимическим методами анализа, основанными на реакции "антиген-антитело" [Пат. РФ 2195648, 7 МПК G01N 33/15. Способ качественного определения гомеопатического лекарственного препарата или потенцированной формы вещества].

Однако приведенные способы предусматривают заранее определенное знание об исследуемом лекарственном средстве и использование эталонного образца или набора известных веществ, близких или сходных по природе, структуре и/или составу к определяемой малой дозе.

Известны способы выявления биологической активности вещества в аллопатических средствах по его влиянию на скорость реакции ферментной тест-системы при добавлении к специфическому изолированному ферменту in vitro [см., например, пат. РФ 2181890, МПК G01N 33/68, G01N 33/15. Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro]. Результаты тестирования биологически активных веществ с помощью ферментных биотест-систем in vitro коррелируют с результатами фармакологических экспериментов.

В серии подобных работ приведены результаты исследований только аллопатических препаратов с оговоркой об «оптимальных концентрациях вещества в пробе».

Не является очевидной возможность выявления фармакологической активности гомеопатического лекарственного средства, когда вероятность присутствия молекул действующего вещества близка к нулю, методами, пригодными для аллопатических средств, и остается актуальной разработка адекватных методов исследования, позволяющих in vitro выявлять в анализируемой пробе гомеопатического средства фармакологическую активность, с которой связаны эффективность и безопасность гомеопатического лекарственного средства, имея в виду возможное проявление разнонаправленных видов фармакологической активности одних и тех же средств в алло- или гомеопатических формах. Вариабельная активность матричной гомеопатической настойки и различных потенций гомеопатического средства, приготовленных из нее, является проявлением неаддитивности свойств, не позволяющим однозначно распространять возможности способов выявления активности биологических веществ на анализ гомеопатических средств.

Патентов, отечественных и зарубежных, по способам выявления in vitro фармакологического действия гомеопатических средств с применением ферментов в качестве тест-объектов обнаружено не было.

Задачей изобретения является расширение функциональных возможностей способов выявления видов активности лекарственных средств in vitro, расширение арсенала и создание технологически простого, достоверного и эффективного способа, позволяющего с высокой специфичностью достаточно быстро определить фармакологическую активность гомеопатического лекарственного средства «in vitro».

Задача решается созданием способа определения фармакологической активности гомеопатического лекарственного средства по его активирующему или ингибирующему влиянию на скорость реакции ферментной тест-системы in vitro, характеризующегося тем, что гомеопатическое лекарственное средство получают путем последовательного прогрессирующего разведения матричной субстанции и многократного вертикального встряхивания или растирания по гомеопатическому методу динамизации, тест-система представляет собой набор лиофилизированных ферментов, выбранных из ключевых или лимитирующих метаболизм в живом организме ксенобиотиков, измерение скорости ведут путем спектрофотометрического контроля параметров реакции до и после добавления тестируемого гомеопатического лекарственного средства к каждому специфическому изолированному ферменту, причем скорость реакции отражает коллективное состояние энергоинформационных характеристик частиц гомеопатического лекарственного средства, в том числе субмолекулярного, не содержащего молекул вещества исходного уровня, а фармакологическую активность гомеопатического лекарственного средства определяют по сочетанию активирующего или ингибирующего влияния на скорость реакций ключевых или лимитирующих ферментов, руководствуясь принципом выявления наличия отдельных видов биологической активности фактически присутствующего лекарственного вещества в аллопатическом средстве.

Задача решается еще и тем, что набор из ключевых или лимитирующих метаболизм ксенобиотиков лиофилизированных ферментов выбран из группы супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы, ацетилхолинэстеразы, пируваткиназы и включает, по меньшей мере, супероксиддисмутазу, каталазу, глутатионпероксидазу, глутатионредуктазу, активация которых соответствует адаптогенной активности, ингибирование - противомикробной, противовирусной активности, а активация супероксиддисмутазы и глутатионредуктазы при ингибировании каталазы и глутатионпероксидазы - адаптогенной, активация пируваткиназы дополнительно свидетельствует об антиоксидантной и адаптогенной активности, а ингибирование ацетилхолинэстеразы дополнительно свидетельствует об адаптогенной активности.

При возникновении и развитии более шестидесяти видов различных заболеваний считается доказанным в настоящее время участие избыточного продуцирования активных форм кислорода.

Результат непосредственного переноса кислорода на субстрат с образованием активных форм кислорода, которые играют важную роль в биохимических окислительно-восстановительных процессах в живом организме как при его нормальных состояниях, так и при многочисленных патологиях, называется свободнорадикальным окислением. Большинство образующихся радикалов высоко активны и цитотоксичны.

Существует большое число как эндогенных, так и экзогенных источников свободных радикалов. К экзогенным относятся неблагоприятные факторы внешней среды, такие как загрязненная атмосфера, радиация, табачный дым, вода, различные ксенобиотики (химические вещества, попадающие в организм с пищей, а также витамины, лекарственные препараты).

Многие эндогенные клеточные органеллы в процессе жизнедеятельности способны продуцировать различные свободные радикалы.

Многоуровневая система антиоксидантной защиты организма включает ферментные и неферментные механизмы.

Учитывая огромную роль в метаболизме различных ксенобиотиков, в том числе гомеопатических препаратов, свободнорадикального окисления, для разработки заявляемого способа применяли ключевые и лимитирующие ферменты системы антиоксидантной защиты: супероксиддисмутазу (СОД, КФ 1.15.11), каталазу (КАТ; КФ 1.11.1.6), глутатионпероксидазу (ГП, КФ 1.11.1.9) и глутатионредуктазу (ГР; КФ 1.6.4.2). В качестве примера возможностей ферментных тест-систем in vitro применяли тест-систему на основе фермента ацетилхолинэстеразы (АХЭ; КФ 3.1.1.7), позволяющей in vitro выявлять соединения холинергического действия. В качестве тест-объекта был использован и один из ферментов энергетического обмена - пируваткиназа (ПК; КФ 2.7.1.40).

Ранее была экспериментально выявлена и доказана корреляция скорости реакции ферментов антиоксидантной защиты с наличием у лекарственных веществ и биологически активных соединений (в аллопатических дозах) с антиоксидантной, адаптогенной, противомикробной и противовирусной активностью. Антиоксиданты активируют все четыре фермента; для адаптогенов характерно увеличение скорости ГР и СОД, но ингибирование КАТ и ГП; противомикробные, противовирусные препараты и препараты для лечения онкологических заболеваний ингибируют все антиоксидантные ферменты.

Для доказательства специфичности тестов применительно к гомеопатическим средствам выбраны гомеопатические препараты с установленной адаптогенной (женьшень), антибактериальной активностью (арника, анемон, пульсатилла), а также с неопределенной фармакологической активностью - кактус.

Изучены гомеопатические настойки в диапазоне доз от Д1 до С30 в соответствии с Процедурами 1 а-е.

Процедура 1а. Определение скорости АХЭ-реакции.

Скорость ацетилхолинэстеразной реакции определяли спектрофотометрически с автоматической регистрацией образования 5-тио-2-нитробензойной кислоты при 412 нм. Измерения проводили в кварцевых кюветах при комнатной температуре, объем пробы составил 3 мл. Инкубационная проба содержала 0,05 М Трис-НС1 буфер и 5 мМ ЭДТА, рН 8,0. Использовали АХЭ в конечной концентрации 0,3-0,01 мкг на 1 мл пробы. Продолжительность записи составляла 1-1,5 минуты.

Процедура 1б. Определение скорости ПК-реакции.

Инкубационная среда содержала 0,05 М трис-НС1 буфер, рН 7,8-8,0, содержащий 0,25 мМ ЭДТА-Na, ПК в концентрации 1 мкг/мл, лактатдегидрогеназу, АДФ, НАДН, фосфо(енол)пируват. Активности ПК определяли спектрофотометрически, регистрируя убыль поглощения НАДН при λ=340 нм.

Процедура 1в. Скорость ГР-реакции определяли в кварцевых кюветах при спектрофотометрической регистрации убыли НАДФН при длине волны 340 нм.

В кювету измерения и кювету сравнения спектрофотометра приливают 0,05 М трис-НСl буфер, рН 7,8-8,0, содержащий 0,25 мМ ЭДТА-Na, и вносят раствор фермента, перемешивают. В кювету измерения добавляют раствор глутатиона, окисленного в конечной концентрации 3,3 мМ/мл. Контрольная проба не содержала глутатиона. Обе пробы инкубируют 10 минут при комнатной температуре. После инкубирования в контрольную и опытные пробы добавляют исследуемое вещество. Помещают кюветы в спектрофотометр, добавляют одновременно при перемешивании в каждую кювету НАДФН в концентрации 0,1 мМ/мл и включают запись. Поглощение при 340 нм уменьшается, что свидетельствует об активности ГР. Продолжительность записи составляет 1-1,5 минуты.

Процедура 1г. Определение скорости реакции КАТ in vitro.

Навеску лиофилизированного фермента каталазы растворяют в дистиллированной воде. В опытные пробирки вносят раствор фермента и добавляют исследуемый препарат в количестве 40 мкл. Реакцию запускают добавлением 0,03% раствора гидропероксида. В холостую пробу вместо фермента вносят дистиллированную воду. Реакцию останавливают через 3-10 минут добавлением раствора молибденовокислого аммония - (NН₄)₆Мо₇O₂₄*4Н₂О в конечной концентрации 20 мг/мл пробы. В опытных и холостой пробирках развивается окраска светло-желтого цвета, интенсивность которой измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм против контрольной пробы, в которую вместо гидропероксида вносят дистиллированную воду. Эффект вещества рассчитывают по соотношению скорости реакции в присутствии изучаемого вещества и скорости реакции в контроле (без вещества).

Процедура 1д. Скорость СОД-реакции определяли по методу [Дубинина Е.Е., Сальникова Л.А., Ефимова Л.Ф. Активность и изоферментный спектр супероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови человека // Лаб. дело. 1982. №10. С.30-33] в присутствии 0,05 М КН₂РO₄-NaOH буфере, рН 8,0, 0,05 мМ тетразолия нитросинего, 4,0 мкМ НАДН и 2,5 мкМ феназинметасульфата при спектрофотометрической регистрации прироста поглощения при 540 нм.

Процедура 1е. Скорость ГП-реакции определяли по методу Beutler [Beutler E. Red cell metabolism / Ed. E.Beutler // Churchill. Livingson, 1986. P. 60-79] при спектрофотометрической регистрации убыли НАДФН при длине волны 340 нм.

Инкубационная среда содержала 0,05 М трис-НС1 буфер, рН - 7,8-8,0 с добавлением 0,25 мМ ЭДТА-Na. В среде присутствовали 6 мкмоль/мл Г-SH, 0,1 U/мл ГР и ГП, 0,6 мкмоль/мл НАДФН. Реакцию запускали добавлением в кювету измерения гидроксибутила в конечной концентрации 0,14 мкмоль/мл, в кювету сравнения - дистиллированной воды.

Результаты проиллюстрированы графическими изображениями и табличными данными.

Фиг.1 - Влияние гомеопатических разведений женьшеня на скорость реакции фермента ГР.

Фиг.2 - Влияние гомеопатических разведений женьшеня на скорость реакции фермента ПК.

Фиг.3 - Влияние гомеопатических разведений женьшеня на скорость реакции фермента АХЭ.

Пример 1. Влияние женьшеня, обладающего адаптогенными свойствами, на скорость ПК-, ГР-, и АХЭ-реакций in vitro.

Результаты процедур 1а-1в проиллюстрированы на Фиг.1-3, приводятся средние арифметические значения из 2-3-х определений и стандартные отклонения среднего результата.

При добавлении потенцированных гомеопатических растворов женьшеня в инкубационную среду, содержащую в качестве тест-объекта фермент ГР, наблюдается тенденция к повышению скорости ГР-реакции при всех изученных дозах, что характерно для веществ адаптогенного действия. Активация фермента ГР является определяющим фактором в поддержании эндогенного глутатиона в клетке (Фиг.1).

Фермент ПК является одним из ключевых ферментов углеводного обмена, участвующего в образовании молекулы АТФ. Практически все разведения женьшеня активируют этот фермент (Фиг.2). Увеличение скорости ПК реакции при тестировании лекарственных средств in vitro характерно для адаптогенов и антиоксидантов. Известно, что биологическое действие адаптогенов связано в основном с их оптимизирующим влиянием на энергетический обмен.

Фермент ацетилхолинэстераза катализирует реакцию гидролиза природного нейромедиатора - ацетилхолина, принимающего участие в процессе передачи импульса нервными волокнами. Усиление действия ацетилхолина, благодаря накоплению его в органах и тканях, может быть достигнуто путем ингибирования АХЭ.

Из данных, приведенных на Фиг.3, видно, что все изученные дозы гомеопатического препарата женьшень ингибируют фермент АХЭ. Величина ингибирования для различных потенцированных разведении препаратов не одинакова, что свидетельствует о специфичности теста in vitro, а значительно различающиеся уровни величин наглядно иллюстрируют возможность доклинической оценки фармакологической эффективности различных потенций.

Применение высокочувствительных биохимических тест-систем in vitro позволяет определять наличие биологической активности и в потенцированных растворах. Использование в тест-системах in vitro в качестве тест-объектов ключевых или лимитирующих ферментов, которые быстро реагируют на изменения внутренней среды организма, ускоряя или замедляя скорость биохимических реакций, показало высокую специфичность и экономичность таких тест-систем.

Пример 2. Влияние настойки анемона в гомеопатических разведениях на скорость реакции КАТ.

Как сказано выше, противомикробные вещества ингибируют все антиоксидантные ферменты.

Гомеопатические настои анемона при всех изученных дозах обладают характерным для антибактериального действия ингибированием КАТ-реакции (табл.1).

Пример 3. Влияние настойки арники в гомеопатических разведениях на скорость каталазной реакции.

Угнетение в разной степени фермента КАТ настойкой арники в гомеопатических разведениях (табл.2) создает условия для окислительного стресса в бактериальных клетках.

Пример 4. Влияние настойки пульсатиллы в гомеопатических разведениях на скорость реакции каталазы и ГР.

Гомеопатические разведения настойки пульсатиллы также проявляют антибактериальные свойства (табл.3), но в меньшей степени, чем настойки арники и анемона.

Практическое отсутствие влияния настоек пульсатиллы на фермент ГР (табл.4) против характерного для аллопатических дозировок угнетения свидетельствует об избирательности биотест-систем in vitro и об особенностях фармакологической активности гомеопатического средства.

Биохимические методы in vitro позволяют контролировать наличие искомой биологической активности в многокомпонентных гомеопатических препаратах, что является важным, т.к. не всегда известно сочетанное действие компонентов, входящих в состав матричных настоек и лекарственных форм, содержащих действующее вещество в сверхмалых дозах.

Пример 5. Влияние побегов кактуса в гомеопатических разведениях на скорость реакции КАТ, СОД, ПК.

Материалом исследования служили матричные настойки из свежих побегов кактуса. Разведение матричных настоек готовили последовательным перенесением одной части раствора к 9 (Д-разведения) или 99 частям (С-разведения) растворителя (43° этиловый спирт) и встряхиванием колбы 36 раз.

Скорость каталазной реакции возрастает при добавлении веществ, обладающих антиоксидантным действием, к изолированному ферменту в условиях in vitro. Как следует из данных таблицы 5, потенцированные растворы, полученные из побегов кактуса, активируют фермент, повышая скорость ферментативной реакции. Этот эффект особенно показателен для С-разведений.

Значительное возрастание скорости СОД-реакции (табл.6) при добавлении гомеопатических настоек из побегов кактуса свидетельствует о наличии антиоксидантной активности.

Значительная активация одного из ключевых ферментов гликолиза - ПК (табл.7) также характерна для антиоксидантов, оказывающих оптимизирующее влияние на энергетический обмен.

Таким образом, тестирование гомеопатических препаратов из побегов кактуса с помощью ферментов системы антиоксидантной защиты показало, что потенцированные настойки свежих побегов кактуса активируют ферменты СОД, КАТ и ГП, что коррелирует с наличием антиоксидантных свойств.

Специфические ферментные тест-системы in vitro позволяют увеличить скорость проведения оценки качества и безопасности гомеопатических средств, что, прежде всего, связано с высокой селективностью и информативностью таких тест-систем. Кроме того, с помощью тест-систем in vitro можно первично оценить целевую биологическую активность без предварительного определения химического состава изучаемого объекта, его природы, что весьма существенно для гомеопатических препаратов сложного состава. С помощью ферментных тест-систем in vitro можно первично оценить целевую биологическую активность разных технологических продуктов.

Для целей задач предлагаемого изобретения были выбраны ферментные тест-системы in vitro с использованием в качестве тест-объектов ключевых или лимитирующих ферментов, которые быстро реагируют на изменения внутренней среды организма, ускоряя или замедляя скорость биохимических реакций, показывая высокую специфичность и экономичность использования таких тест-систем.

Предлагаемые оригинальные способы тестирования in vitro гомеопатических настоек в широком диапазоне доз (от Д₁ до С₃₀) могут осуществляться на препаратах лиофилизированных ферментов, по меньшей мере, СОД, ГП, ГР, КАТ, АХЭ, ПК, что позволяет стантартизировать тест-объекты.

Предлагаемый способ обладает высокой специфичностью и чувствительностью, прост, не требует больших затрат времени.

Таблица 1. Влияние настойки анемона в гомеопатических разведениях на скорость реакции КАТ Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Контроль 3,21±0,60 100,0 Контроль 3,80±0,51 100 D30 2,73±0,41 83,2 С30 3,11±0,29 82,1 D18 2,12±0,80 65,8 С18 3,01±0,45 79,3 D12 2,52±0,69 76,6 С12 3,12±0,50 81,5 D6 2,30±0,42 69,6 С9 3,40±0,40 88,2 D3 2,12±0,20 64,9 С6 3,03±0,38 77,6 D1 0,00 0,0 С3 2,92±0,17 75,4       С1 0,40±0,10 10,3

Таблица 2 Влияние настойки арники в гомеопатических разведениях на скорость каталазной реакции Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Контроль 2,71±0,25 100,0 Контроль 2,57±0,40 100,0 D30 1,74±0,10 64,1 С30 2,65±0,26 103,3 D18 1,97±0,10 72,6 С18 2,63±0,34 102,3 D12 1,85±0,18 68,2 С12 2,34±0,09 91,2 D10 1,65±0,37 60,8 С9 2,15±0,59 83,7 D6 1,75±0,30 64,5 С6 2,19±0,46 85,3 D3 1,77±0,08 65,4 С3 2,23±0,40 86,7 D1 0,00 0,0 С1 1,15±0,08 44,8

Таблица 3 Влияние настойки пульсатиллы в гомеопатических разведениях на скорость реакции каталазы Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент.реакции, % отн. Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент.реакции, % отн. Контроль 1,62±0,05 100,0 Контроль 2,67±0,01 100,0 D30 1,71±0,06 104,2 С30 2,59±0,01 97,1 D18 1,22±0,20 74,1 С18 2,66±0,06 99,6 D12 0,81±0,21 49,5 С12 2,90±0,27 108,7 D6 1,03±0,61 62,3 С9 2,80±0,13 104,9 D3 0,54±0,23 30,8 С6 2,52±0,20 94,5 D1 0,00 0,0 С3 2,13±0,41 79,6       С1 0,68±0,19 25,3

Таблица 4 Влияние настойки пульсатиллы в гомеопатических разведениях на скорость реакции ГР Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Контроль 15,86±0,51 100,0 Контроль 15,86±0,51 100,0 D30 15,80±0,10 95,6 С30 16,01±0,56 97,1 D18 15,63±0,46 98,6 С18 16,52±0,58 99,6 D12 15,13±0,21 93,8 С12 15,87±0,12 108,7 D9 14,88±0,05 97,9 С9 15,14±0,75 104,9 D6 15,53±0,22 97,5 С6 17,08±099 94,5 D3 15,46±0,67 97,5 С3 15,68±0,46 98,9 D₁ 16,23±0,50 102,3      

Таблица 5 Влияние настойки кактуса в гомеопатических разведениях на скорость реакции КАТ Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость фермент. реакции, % отн. Контроль 13,98±0,68 100,0 Контроль 4,66±0,05 100,0   13,05±0,84 93,36 С₁₇ 6,61±1,17 123,94 Д₁₉ 14,82±0,10 105,99 С₁₆ 6,49±0,09 137,64 Д₁₈ 14,82±0,89 105,99 С₁₅ 4,18±0,22 86,29 Д₁₇ 16,26±1,40 116,28 С₁₄ 4,05±0,44 93,24 Д₁₆ 14,28±1,09 102,13 С₁₃ 4,34±1,13 110,23 Д₁₅ 14,53±0,25 103,93 С₁₂ 4,68±0,22 97,10 Д₁₃ 16,17±0,30 104,83 С₁₁ 4,27±0,09 92,85 Д₁₂ 14,66±0,79 115,66 С₁₀ 6,38±0,97 122,40 Д₉ 14,81±0,16 104,83 С₉ 5,33±0,97 128,96 Д₇ 14,80±0,23 105,86 C₈ 4,97±0,55 114,86 Д₆ 15,11±0,41 108,05 С₇ 4,72±0,37 95,56 Д₃ 14,94±0,23 106,89 С₆ 4,99±0,42 100,60 Д₁ 13,39±0,14 110,05 С₅ 6,77±0,18 142,47       С₄ 5,29±0,22 124,89       С₃ 5,51±0,89 118,24       С₂ 6,57±0,06 131,66       С₁ 4,61±0,94 98,84

Таблица 6 Влияние настоек из побегов кактуса и гомеопатических разведениях на скорость СОД-реакции Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин *мг Скорость ферментативной реакции, % отн. Контроль 2,81±1,68 100,00 Д₆ 3,24±0,80 115,30 Д₅ 4,96±0,52 176,51 Д₄ 5,78±0,64 205,69 Д₃ 4,94±0,23 175,80 Д₁ 3,39±0,45 120,64

Таблица 7 Влияние настоек из побегов кактуса и гомеопатических разведениях на скорость ПК-реакции Разведение Скорость ферментативной реакции, мкмоль/мин*мг Скорость ферментативной реакции, % отн. Контроль 18,94±0,14 100,00 Д₆ 24,38±1,80 128,71 Д₅ 24,24±0,52 128,00 Д₄ 22,52±1,64 118,92 Д₃ 22,63±0,23 119,49 Д₁ 19,58±1,45 103,37

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу определения фармакологической активности гомеопатического лекарственного средства. Способ определения адаптогенной, противомикробной, противовирусной, антиоксидантной активности гомеопатического лекарственного средства по его активирующему или ингибирующему влиянию на скорость реакции ферментной тест-системы in vitro, характеризующийся тем, что гомеопатическое лекарственное средство получают по гомеопатическому методу динамизации, тест-система представляет собой набор лиофилизированных ферментов, измерение скорости реакции ведут путем спектрофотометрического контроля параметров реакции до и после добавления тестируемого гомеопатического лекарственного средства к каждому специфическому изолированному ферменту, а фармакологическую активность гомеопатического лекарственного средства определяют по сочетанию активирующего или ингибирующего влияния на скорость реакций ключевых или лимитирующих ферментов. Вышеописанный способ позволяет повысить точность определения фармакологической активности средства «in vitro». 3 ил., 7 табл., 5 пр.

Способ определения адаптогенной, противомикробной, противовирусной, антиоксидантной активности гомеопатического лекарственного средства по его активирующему или ингибирующему влиянию на скорость реакции ферментной тест-системы in vitro, характеризующийся тем, что гомеопатическое лекарственное средство получают путем последовательного прогрессирующего разведения матричной субстанции и многократного вертикального встряхивания или растирания по гомеопатическому методу динамизации, тест-система представляет собой набор лиофилизированных ферментов, выбранных из ключевых или лимитирующих метаболизм в живом организме ксенобиотиков, таких как супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза, ацетилхолинэстераза, пируваткиназа, измерение скорости ведут путем спектрофотометрического контроля параметров реакции до и после добавления тестируемого гомеопатического лекарственного средства к каждому специфическому изолированному ферменту, причем скорость реакции отражает коллективное состояние характеристик частиц гомеопатического лекарственного средства, в том числе, субмолекулярного, не содержащего молекул вещества исходного уровня, а фармакологическую активность гомеопатического лекарственного средства определяют по сочетанию активирующего или ингибирующего влияния на скорость реакций ключевых или лимитирующих ферментов, где активация супероксиддисмутазы и глутатионредуктазы при ингибировании каталазы и глутатионпероксидазы соответствует адаптогенной активности, активация супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы соответствует антиоксидантной активности, ингибирование - противомикробной, противовирусной активности, активация пируваткиназы свидетельствует об антиоксидантной и адаптогенной активности, а ингибирование ацетилхолинэстеразы свидетельствует об адаптогенной активности.