Способ подготовки жидкой питательной среды для выращивания микроорганизмов Советский патент 1984 года по МПК C12N1/00 

Изобретение относится к микробио логической промьшшенности, в частно сти к способам приготовления жидкой питательной среды для выращивания микроорганизмов. Известен способ приготовления жидкой питательной среды, предусмат риванщий отвар разнообразных животных тканей l . Однако данный способ не обеспечи вает высокую скорость роста микроор ганизмов. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ подго товки жидкой питательной среды для выращивания микроорганизмов, предусматривающий растворение ингредиентов, необходимых для роста микроорганизмов в воде с последующим выращиванием их в условиях аэрации. Согласно известному способу углевод минеральные соли микроэлементы раст воряют в воде 23 . Недостатком способа является низ кий выход биомассы . микроорганизмов Цель изобретения - повьшение выхода биомассы. Поставленная цель достигается те что согласно способу подготовки жидкой питательной среды для выращива ния микроорганизмов, предусматривающему растворение ингредиентов, нео ходимых для роста микроорганизмов, в воде с последующим выращиваением их в условиях аэрации, перед вьфащиванием питательную среду обрабатывают озоно-воздушной смесью до достижения концентрации озона 410 2,610 мас.% от объема средь. При. этом перед растворением ингредиентов, необходимых для роста микроорганизмов, воду обрабатывают, озоно-воздушной смесью при содержании в ней озона 1 10 - 2,4- 10 мае от объема воды. Сущность способа заключается в следующем. Жидкая питательная среда после приготовления и стерилизации подверг ется однократной озоно-воздушной обработке при концентрациях озона в ней - 2,6Ш мас.% от объема среды, после чего произ:водится засев микроорганизмов и осуществ.ляется их культивирование. При обработке озоно-воздушной смесью воды, если процесс выращивания микробов идет в нестерильных условиях, не требуется предварительной стерилизации воды и ингредиентов, если же процесс стерилен, то перед обработкой вода и ингредиенты стерилизуются отдельно, а затем стерильно смешиваются. В табл.1 показано влияние концентрации озона на выход бактерий., В табл. 2 показано влияние обработки озоно-воздушной смесью воды на выход биомассы. Пример 1. Бульон Хоттингера наливают в качалочную колбу объемом 50 мл и помещают для стерилизации в автоклав. После стерилизации питательную среду однократно обрабатывают путем барботажа озоновоздушной смесью Через слой среды проходит 6.10 .мас.% озона от ее объема. Бульон Хоттингера после озоновоздушной обработки засевают культурой бактерий Pseudomonas seryngae культивирование проводят на качалке 320 об/мин при и рН 7,2. Через .2 ч число клеток в мл составляет 232, через 4 ч роста - 901. Пример 2. 100 мл жидкой питательной среды, содержащей, г: 0,5; 0,1; Ma30 0,2; 0,3; 0,1; 0,01; глюкозы 2,5; H, - 100 мл, помещают в качалочную колбу, до засева в нее микроорганизмов обрабатывают путем барботажа озоном в концентрации 440 мас.% от объема среды. За тем в нее вносят суспензию бактерий Pseudomonas seryngae и культивируют их на качалке при и скорости вращения каретки качалки 250-280 об/ Ьшн. Бактерии культивируют 4 ч в ло гарифмической фазе-роста. Изменение количества клеток определяют через каждые 2 ч путем высева на плотную питательную среду с последуюпщм /сче-. том колоний. Через 2 ч роста число клеток в мл составляет 431, через 4 ч - 1683. Пример 3, 100 МП водопроводной воды (стерильной t, помещенной в колбу, однократно обрабатывают путем барботажа озоно-воздушной смесью. при этом суммарная концентрация озона в смеси составляет мас.% от объема воды. После этого добавляют в стерильных условиях,-НдС& 0,1; , 0,2; N 504-7115 0 0,05; NoCe.

0,2; СаСО 0,4; глюкозы 0,1. В приготовленную таким образом среду с рН 7,2 вносят 10 мг культуры PSeudomonas,seryngae и культивируют при 30 С 4 ч на качалке. Изменение количества бактерий в процессе роста определяют путем высева из сусупензии на плотную питательную среду с последующим подсчетомКОЛОНИЙ.

Число .клеток в мл увеличивается от 265 (контроль) до 317.

П р и м е р 4. 100 мл дистиллированной воды, -помещенной в колбу, однократно обрабатывают озоно-воздуш ной смесью при суммарной концентрации озона в ней 840 мас.% от

объема воды. Затем в колбу вносят 2 мл кукурузного экстракта, 10 мл 40%-ного раствора сахарозы и 10 мл пекарских дрожя(ей. Культивирование

5 производят .при 28 С и рН 4,5 в течение 4 ч. Изменение количества клеток при росте в жидкой среде определяют путем высева сусйензии клеток на плотную питательную среду с

последующим счетом колоний. %сло клеток в 1 мл возрастает с 118 до 129.

Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет увеличить

5 выход биомассы микроорганизмов на 90-95%.

, Т .а б л и ц а 1

1. СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНрЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫРА- ЩИВАНИЯ .МИКРООРГАНИЗМОВ, предус- ;матривающий растворение ингредиентов, необходимых для роста микроорганизмов, в воде с последующим выращиванием их в условиях аэрации, о тли чающийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы, перед выращиванием питательную среду обрабатывают озоно-воздушной смесью до достижения концентрации озона 400 -2,6-10 мае.% от объема среды. 2. Способ поп., отличающийся тем, что перед растворением ингредиентов, нeoбxoди alIx для рОста микроорганизмов, воду обрабатывают озоно-воздушной смесью при содержании в ней озона 1 10-2,410 «асЛ (Л от объема воды. с

Бульон Хоттигера

Примечание. Время культивирования 4 мин.

Таблица 2