Способ приготовления посевного материала для выращивания бактерий Советский патент 1984 года по МПК C12N1/00 

VI

Р

-Й

:о Изобретение относится к области экспериментальной и промьдыленной ми робиологии и может быть использовано при подготовке посевного материа ла для лабораторных микробиологичес ких исследований, а также при крупномасштабном культивировании м)1кроорганизмов в ферментерах. Известен способ выращивания микроорганизмов, предусматривающий подачу к питательной среде нестерильного воздуха с добавлением озона ил перекиси водорода через 35 часов от начала процесса l) . . Однако в данном способе озон необходим для антисептирования подава мого в ферментер воздуха и питатель ной среды, которые нестерильны. Увеличение выхода дрожжей связано с улучшением условий культивирования. Без антисептиронания воздуха и питательной среды попадаюдая в ферментер посторонняя (вредная) мик рофлора мешала бы росту культурыпродуцента, поскольку возможно выде ление вредной микрофлорой метаболитов, ингибирующих рост продуцента, а также потребление субстрата, что также снижает конечный выход продуцента. Известен способ приготовления по севного материала микроорганизмов, заключающийся в том, что микроорганизмы переносятся с плотной питательной среды в жидкую в виде суспензии 2j . . Данный способ практически непригоден для получения высокой биомассы в ферментерах из-за малочисленнос ти клеток микроорганизмов в посевно материале. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ приготовления посевного материала для вы ращивания бактерий, предусматривающ получение исходной суспензии микроб ных клеток. Способ заключается в том, что приготавливают суспензию . микробов путем смыва с плотной сред Затем эта суспензия подращивается о нескольких часов донескольких суто в жидкой питательной среде и только после этого производят основное культивирование в ферментерах для . получения высокой биомассы з . К недостаткам способа относится то, что оя трудоемок, особенно вторая стадия, часто требует приготовления особых жидких питательных сред и режимов выращивания, а также длителен.: Цель изобретеиия - упрощение и Ч ускорение процесса. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу приготовления посевного материала для выращи.вания бактерий, предусматривающему получение исходной суспензии микробных клеток, исходную микробную суспензию обрабатывать озоновоздушной смесью до достижения концентрации озона в ней 0,01-1,5 мг/л с последующим выдерживанием суспензии в течение 20-30 мин. Способ, осуществляют следующим образом. Культуру микроорганизмов, например бактерий, петлей переносят с косяка (плотная питательная среда, на которой хранится культура) в буфер, физраствор ИЛИ же в жидкую питательную среду;содержащую минеральные соли, микроэлементы и источники углерода, и ресуспендируют. Приготовленную таким образом суспензию обрабатывают путем барботажа озоиовоздушной смесью. После этого производят ввдержку суспензии в течение 20-30 мин при оптимальной для данного штамма микроорганизма температуре. Посевной материал после этого можно использовать для дальнейшего культивирования. Данная обработка увеличивает концентрацию клеток в посевном материале эа счет того, что, видимо, озон резко стимулирует деление клеток микроорганизмов в суспензии посевного материала что благотворно сказывается также и на их активности при дальнейшем культивировании. Пример 1. Культуру Pseudomonas Seryngal переносят с косяка петлей в 10 мл физраствора и ресуспендируют. Приготовленную суспензию обрабатывают путем барботажа озоновоздушной смесью до тех пор, пока концентрация озона в ней не достигнет 0,01 мг/л. После этого суспензию помещают на 30 мин в термостат с температурой 28°С. Увеличение количества клетбк в посевнсж материале регистрируют путем высева на полноценную плотную питательную среду (МПА) и подсчета колоний. Пример 2. Выполняют аналогично предащущему, только бактериальную культуру ресуспендируют в мясопептонном бульоне (МПБ), конечная концентрация озона в смеси при обработке составляет 0,2 мг/л и время выдержки составляет 20 мин. Параметры и метод учета количества клеток в суспензии идентичны примеру 1. Результаты влияния параметров обработки посевного материгша на выход микроорганизмов приведены в таблице. Примечание: Исходное количество 95-10.

Таким образом, реализация предлагаемого способа по сравнению с известным позволяет увеличить количество клеток в посевном материале без подращивания на В0% за короткий промежуток времени, в то время как реализация общепринятого способа требует затрат питательной среды и в 3-4 раза большего времени, кроме того, необходимо специальное оборудование для подращивания (качалка-инокулятор). клеток в суспензии до обработки

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БАКТЕРИЙ, предусматривающий получение исходной суспензии микробных клеток о т л и ч а ю щ и и с я .тем, что, с целью упрсяцения, а также ускорения процесса, и сходную микробную суспензию обрабатывают озоновоздушной смесью до доснижения концентрации озона в ней 0,01-1,5 мг/л с последующим выдерживанием суспензии в течение 20-30 мин.