Способ моделирования ревматоидного артрита Советский патент 1984 года по МПК G09B23/28 

X) 00

о ю Изобретение относится к медицине. а tsMeHHO к иммунологии, патофиэиолог-ии, экспериментальной терапии. Известно, что модель ревматоидног артрита у крыс, наиболее адекват-кая ревматоидному артриту у человека, воспроиэ-водится щтем введения в подушечки задник лап или в основание хвоста крыс полного адъюБанта Фрейнда. Однако различные варианты моделирования р.евматоидного зртрита щтем введения адъюванта Фрейнда (АФ) характеризуется недостаточно п(31лны д воспро111эведенкем нарушений со стороны иммунологической реактивности основного патоге етического звена резматоидного артрита и кратковременным воспроизведением патолог зческого процесса Наиболее близким по своей технической сущности и достигаемому эффекту к изобретению является способ моделирования ревматоидного артрита путем введения крысам полного адьюзанта Фрейнда, состоящего из инактивированной культуры ВЦЖ (2 мг/мп) в масляной среде (1 ч. ланолина и 30 ч, вазалинового масла). Полшлй адъювант Фрейнда вводится крысам однократно внутрикожно по 0,1 Г.ОТ в подушечки задних лап ij . . Недостатком указанного способа является наличие двух фаз рвсшции ш унной системы на введение антиге на, первая из которых до1ится 7-14 дней после введения адьгованта Фрейнд и характеризуется стшлуляцией,. а )зто рая фаза, начиная с 14 угнетением иммунапогическик реакций, в результате состояние сниженной реакции ,со стороны ли фоидной ткани воспро-изводится всего на протяжении 7-8 дней, что создает определенные огран чения для испытания в этих условияк средств, влияющих на имivIyнoлoгичeскуго реактивность. Ка.пичие в уелоВИЯХ данной зкспериментальвой модел фазы стимуляции отдаляет указанный способ воспроизведения патологии от клиники Цель изобретения - созкавке моде ли ревматоидного артрита с дл:итель ным снижением реактивности лкмфоидной ткани за счет исключения началь ной стимулирующей фазы имглункой сиcTef&io достигается тем.., что соглаа но способу моделирОЕанш;; ревматоидного артрита путем введения полного адъюванта Фрейнда перед введением адъюванта воздействуют на организм животного грязевыми аппликациями, наклалываег.1ами на поверхность спикы в области проекций надпочечников.- в течение мин„ Воспроизведение модели ревматоидного артрита осуществляется следую 4им способом. Крысам линии Вистар весом 135150 г удаляют волосяной покров с поверхности спины и на выстриженную . поверхностьоплощадью 8x8 см накладывают слой лечебной грязи толщиной 0,5-1,0 см, нагретой до 41-42°С. Сверху слой грязи накрывают обычной бумагойJ затем клеенкой и укутывают животных куском фланели или мягкой ткани. Процедуру проводят на протяжении 18-20 мин, затем грязь и все использованные материалы удаляют. Процедуру повторяют ежедневно 4 дня подряд. После последней грязевой аппликации крысам вводят в по,пушечки задних лап по 0,9-1,0 мл полного адъюванта Фрейнда, состоящего из равных объемов ланолина и вазелина и убитых микробактерий из расчета 0,40,5 мг на 0,9-1,0 мл смеси. При комбинации пелоидов с введением АФ по предлагаемому способу основные показатели, характеризующие формирование воспалительного процесса в ответ на введение АФ/СОЭ: лейкоцитарная реакция , ректальная температура и температура кожи над поверхностью пораженных суставов (состояние деструкции сое.цлнительной ткани, оксипролия), - глюкокортикоидную активность надпочечников, гистологические изменения и иммунологическую ресктивность j остаются нарушенными на протяжении всех 48-50 дней наблюдения, В условиях же контрольных исследований (известный способ) нарушения, наблюдаемые в первые дни исследования (21-28 в большинстве случаев к 48 дню нормализуются (см. пример 1. При этом степень воспроизведения патологической реакции при предлагаемом способе существенно, превышает таковую в условиях известного способа. При предлагаемом способе уровень СОЭ достоверно превышает уровень Ьтого показателя при известном на 14-й день на 33%, на 21 деньна 66%. на 28 день - на 70%, на 50 день - на 42%, Аналогичные данные каблюддаются и в отнанании температурной кривой. Начиная с 13-14 дня з сыворотке кропи при обоих способах моделирования адъювгичтного артрита появляется. субстанция, агглютинирующая эритроциты барана, подобная ревматоидному фактору у больных ревматоидным артритом,, На 20-21 день после введения АФ титры колеблются в усповиях известного способа от 1;8 до 1:28, а к 48-f4y дню рсзвматоидный фактор в сыворотке . большинства живоогных не в вляется. ., Б то же время в условиях предлагаемого способа титр указанного фактора обнаруживается во все сроки исследования: на 20-21 день - 1:32-1:256, на 26-28 день - 1:64-1:256, на 48-50 день - Г:16-1:128. В условиях предлагаемого способа содержание оксипролина, как показателя деструктивных изменений в соеди нительнотканных структурах,- превышает на 48-50 день исследования уровень такового при известном способе на 210-213%, Сочетанное применение пелоидов с введением АФ предупреждает чрезмер ное угнетение функционирования адреналовых желез в течение всего срока исследования. Уровень глюкокортикоидов в плазме крови при воспроизведении полиартрита в соответствии с предлагаемым способом превышает уровень последних в сравнении с известным на 13-14 день в 2,2 раза, ана 48-50 день в 4,7 раза. Наряду с формированием выраженной патологической реакции (как по глуби не сдвигов, так и по продолжительности сроков) предлагаемый способ позволяет удлинить период иммунодепрессии и снять фазу стимуляции иммуного ответа, имеющую место в условиях Л1звестн9го способа . (см. пример 2), При комбинации пелоидов с введением АФ существенно удлиняется период сни жения антителообразующей функции лим фоидной ткани. Так, при иммунизации крыс в условиях предлагаемого способа число АОК в селезенке на 7 и 10-й день, 14-й, 21,30 и 50 дни существенно ниже, чем в контрольных исследованиях (только иммунизация). В то же время при известном способе обнаруживается существенное увеличение количества АОК на 7-й и 10 дни после иммунизации с последующимм пе.реходом, начиная с 20-21 дня в фазу угнетения. Подобные же различия получены и в отношении динамики гема глютинирующих антител. В условиях, предлагасвмого способа моделирования артрита на всем протяжении исследова ния сохраняется сниженный по сравнению с данными контроля (иммунизация животных без артрита) титр гемагглюПоказатели по способу

СОЭ, IM. чизвестный(предлагаемый) Количество лейкоцитов

109

1

л тинирующих антител. В то время как в условиях известного способа отмечатся существенное повышение титров антител,, которые становятся максимальными на 13-14 день и сохраняются высокими и по 20-21 дни Наблюдения, т.е. в течение первых двух недель имеет место явная стимуляция процесса антителообразования. Пример. 10 крысам линии Вис.тар массой 135-150 г проводили грязевые аппликации ежедневно в течение 4 дней. Лечебную грязь температуры 41-42 С накладывали на выстриженную поверхность спины площадью 8x8 см, продолжительностью 18-20 мин. На следующий день после 4-й грязевой процедуры (через 22-24 ч) этим крысам вводили-в подушечки задних лап 0,9-1,0 мл полного адъюванта Фрейнда, состоящего из равных объемов ланолина и вазелина и убитых -микробактерий из расчета 0,4-0,5 мг на 0,9-1,0 ма смеси. В динамике с 13 по 48-50 дни после введения крысам адъюванта Фрейнда изучали характер воспалительного процесса. Основные результаты исследования приведены в табл. 1. Пример 2. 10-ти крысам линии Вистар массой 135-150 г проводили грязевые аппликации ежедневно в течение 4 дней. Лечебную грязь температуры 41-42С накладывали на выстриженную поверхность спины площадью 8x8 см, продолжительностью 18-20 мин. На следующий день после 4-й аппликации (после 22-24.ч), этим крысам вводили в подушечки задних лап по 0,91,0 мл полного адъювантаФрейнда, состоящего из равных объемов ланолина и вазелина и убитых микробактерий из расчета 0,4-0,5 мг на 0,9-1,0 мл смеси. На 7-й день после введения адъюванта Фрейнда этих крыс иммунизировали эритроцитами барана (из расчета ,-5 мл 45-50, взвеси эритроцитов барана). С 7-го по 48-50 дни после иммунизации изучали характер иммунного ответа на введение антигена. Основные результаты исследования приведены в табл. 2. Т а блица.1

Продолжение табл. 1

СПОСОБ МОДКЛИРОВАНИЯ РЕВМА-П ТОИДНОГО АРТРИТА путем введения полного гщъюванта Фрейнда, отличающийся тем, что, с целью увеличения длительности снижения реактивности лимфоидной ткани за счет исключения начсШьнсА стимулирующей фазы иммуинс системы, перед введением адъюванта воздействуют на организм животного грязевыми аппликациями, накладываемыми на поверхность спины в области проекции надпочечников, в течение 18-20 мин.

Гемагглютинирующие анти-. (тела (контроль, 2,17+0,13 иммунизация) 2,02+0,16 3,2+0,07 (известный) 3,00+0,05 ,05 р 0,01 (предлагаемый) О ,05

Продолжение табл. 2 1,24+0,17 2,20+р,141,32+0,07 0,08+0,001 1,90+0,051,23+0,05 0,07+0,0009 ,,05 ,01 1,20±0,170,99+.0,103 0,0041+0,0004 ,05f)0,05 ,Ul