СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПОРАЖЕНИЯ СУСТАВОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Известен способ моделирования воспалительного поражения суставов в эксперименте (источник) путем инъецирования подопытным животным под кожу в области этих суставов адъюванта, например - вакцины БЦЖ, в составе вазелиново-ланолиновой эмульсии (Гринзайд Ю.М., Кривобоков Н.Г., Тер-Габриэльянц Г.Г. «Первичный профилактический эффект пелоидов при адъювантном артрите у крыс и его иммунологические механизмы. // Иммунологические концепции в курортологии: Сборник научных трудов. - Пятигорск, 1987. - С.8-14). Данный способ не достаточно адекватен основным сторонам патогенеза воспалительной суставной патологии (ВСП). В частности, не учитывается такой элемент патогенеза, как переохлаждение. Это не позволяет считать данную модель достаточно соответствующей клинической ситуации.

Предлагаемый способ лишен указанного недостатка. Сущность его заключается в том, что инициацию адъювантного артрита производят на фоне предварительного переохлаждения суставов. Вначале подопытных животных, например крыс, помещают в лоток, наполненный водой со льдом, сроком на 13-15 минут, ежедневно в течение 3 дней. Через 1-2 часа после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап. Через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить требуемые исследования.

Таким образом, технологическая последовательность способа включает предварительное охлаждение конечностей в лотке со смесью льда и воды при температуре 2-6°С в течение 13-15 минут, ежедневно в течение 3 дней. Через 1-2 часа после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап. Через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить необходимые эксперименты.

Для изучения адекватности и тяжести предлагаемой модели изучено 60 крыс-самцов линии Вистар массой тела 200-250 г, разделенные на 5 групп. Первую группу представляли 11 интактных животных. 11 крысам (группа 2) в течение 3 дней производили охлаждение конечностей при температуре 2-6°С и экспозиции 13-15 минут. 12 крысам третьей группы инициировался адъювантный артрит по способу прототипа. 12 крыс 4 группы подвергались разовому однодневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии, после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. 14 крыс 5 группы подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. На 35 день производилось исследование прижизненных лабораторных тестов, после чего животные иммунизировались внутрибрюшинно 2,5 мл 10% взвеси эритроцитов барана, на 40-вой день забивались с исследованием внутренних органов. Данные исследований приведены в таблице.

ТаблицаВлияние охлаждения в комбинации с адъювантным артритом на реакции иммунокомпетентных органовПоказательNгруппаnMм Р Масса тимуса Мг1Интактная11314,722,41-2>0,22-3>0,24-5>0,423 охл11271,229,81-3<0,012-4>0,2-3БЦЖ12225,222,11-4<0,012-5>0,05-41 охл + БЦЖ12228,119,31-5<0,0013-4>0,9-53 охл + БЦЖ14206,317,8-3-5>0,5-К селезенки *10⁶ л/100 мг1Интактная118548,891-2<0,012-3>0,54-50,0523 охл1149,25,961-3<0,052-4>0,05-3БЦЖ1255,18,051-4>0,72-5>0,8-41 охл + БЦЖ1278,615,31-5<0,0013-4>0,1-53 охл + БЦЖ1447,25,18-3-5>0,4-ФИЛ Ед.1Интактная112,000,121-2<0,0012-3 1,04-5>0,623 охл111,110,041-3<0,0012-4>0,1 3БЦЖ121,110,101-4<0,0012-5<0,05 41 охл + БЦЖ121,230,061-5<0,0013-4>0,3 53 охл + БЦЖ141,270,07 3-5>0,1 

Примечание:

3 охл - 3 сеанса охлаждения

1 охл - 1 сеанс охлаждения

БЦЖ - инициация адъювантной болезни

3 охл + БЦЖ - 3 сеанса охлаждения с последующей инициацией адъюванта

1 охл + БЦЖ - 1 сеанс охлаждения с последующей инициацией адъюванта

Для адекватной оценки полученных моделей изучены параметры - масса тимуса, клеточность селезенки и фагоцитарный индекс лейкоцитов. Именно эти параметры свидетельствовали как о генеральной реакции имунокомпетентных органов на воспаление, так и о фагоцитарном эффекте.

Полученные результаты свидетельствуют о четкой общеорганизменной реакции как на повреждающие факторы - переохлаждение и воспалительный процесс в суставах, так и о взаимно потенцирующем патогенетическом действии указанных факторов.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

1. Интактная крыса-самец линии Вистар №32, масса тела - 222 г. Дополнительных воздействий не получала. Исследование животного осуществлено одновременно с животными опытной группы (на 39-40 день после инициации адъювантного артрита). Масса тимуса - 300 мг, клеточность селезенки - 107,4·10⁶ л/100 мг, ФИЛ - 2,16 бед.

2. Крыса-самец линии Вистар №2, масса тела - 220 г подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. Исследование животного осуществлено на 39-40 день после инициации адъювантного артрита. Масса тимуса - 189 мг, клеточность селезенки - 61,0·10⁶ л/100 мг, ФИЛ - 1,02 ед.

3. Крыса-самец линии Вистар №5, масса тела - 190 г подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. Исследование животного осуществлено на 39-40 день после инициации адъювантного артрита. Масса тимуса - 181 мг, клеточность селезенки - 44,0·10⁶ л/100 мг, ФИЛ - 1,36 ед.

4. Крыса-самец линии Вистар №1, масса тела - 170 г подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. Исследование животного осуществлено но 39-40 день после инициации адъювантного артрита. Масса тимуса - 256 мг, клеточность селезенки - 93,0·10⁶ л/100 мг, ФИЛ - 1,02 ед.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной ревматологии, и может быть использовано для моделирования воспалительного поражения суставов. Для этого вначале осуществляют предварительное охлаждение конечностей в лотке со смесью льда и воды при температуре 2-6°С в течение 13-15 минут ежедневно в течение 1-3 дней. Затем через 1-2 часа после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап. Через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить необходимые эксперименты. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели. 1 табл.

Способ моделирования воспалительного поражения суставов в эксперименте путем подкожного введения в область суставов нижних конечностей адъюванта, отличающийся тем, что вначале осуществляют предварительное охлаждение конечностей в лотке со смесью льда и воды при температуре 2-6°С в течение 13-15 мин, ежедневно в течение 1-3 дней, затем через 1-2 ч после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап, а через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить необходимые эксперименты.