СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА Российский патент 2007 года по МПК G09B23/28 

Предлагаемый способ относится к области экспериментальной медицины, патофизиологии.

Известен способ моделирования ревматоидного артрита (описание изобретения к авторскому свидетельству №1748174 А1). Он осуществляется путем введения животному бычьего сывороточного альбумина и полного адъюванта Фрейнда; последующей электростимуляцией при помощи имплантированных в полости голеностопных суставов и в хвостовую вену электродов.

Недостатком данного способа является его сложность, а также отсутствие постепенного поэтапного развития системного воспаления, клиники поражения суставов, характерной для ревматоидного артрита. Формируется скоротечная тяжелая картина альтеративно-пролиферативных изменений с выраженной деструкцией суставов общей продолжительностью 2 недели.

Известен также способ моделирования ревматоидного артрита (описание изобретения к авторскому свидетельству №1098027 А), являющийся наиболее близким по своей технической сущности к изобретению.

Он осуществляется внутрикожным введением в задние лапки ПАФ (инактивированная культура БЦЖ, 0,4-0,5 мг на 0,9-1,0 мл смеси равных объемов ланолина и вазелина) при предварительном 4-дневном воздействии на организм животного грязевыми аппликациями на зону проекции надпочечников.

Одним недостатком указанного способа является трудно выполнимое внутрикожное введение ПАФ в объеме 0,9-1,0 мл в подушечки задних лап. Другой недостаток - развитие клинически выраженной картины адъювантного артрита без фазы предболезни или продромального периода.

Нами предлагается способ моделирования ревматоидного артрита путем введения 0,07-0,08 мл полного адъюванта Фрейнда (ПАФ), состоящего из инактивированной культуры БЦЖ (2 мг/мл в масляной среде: 1 ч. ланолина и 30 ч. вазелинового масла) и последующего воздействия одночасового ежедневного иммобилизационного стресса с 14-х по 28-е сутки.

Сущность предлагаемого решения состоит в том, что модель ревматоидного артрита воспроизводится под влиянием двух основных факторов: одного - специфического: введение подпороговой дозы ПАФ; второго - неспецифического: воздействие иммобилизационного стресса.

Новизна предлагаемого решения заключается в том, что для воспроизведения модели ревматоидного артрита впервые применяется воздействие иммобилизационным стрессом на организм животных, которым предварительно вводится внутрикожно ПАФ в количестве 0,07-0,08 мл (подпороговая доза). Внутрикожное одноразовое введение ПАФ позволяет получить стадию предболезни адъювантного артрита. Применение иммобилизационного стресса на 14-28-е сутки после введения ПАФ, ежедневно, в течение 1 часа приводит к воспроизведению непосредственно болезни с ярко выраженными проявлениями полиартрита.

Новизна предлагаемого нами способа свидетельствуют о творческом характере решения, т.е. говорит о соответствии решения критерию "неочевидности".

Технический результат выражается в получении двухэтапной модели ревматоидного артрита: во-первых, внутрикожным введением подпороговой дозы ПАФ; во-вторых, воздействием иммобилизационного стресса с 14-х по 28-е сутки.

Технический результат достигается путем внутрикожного введения подпороговой дозы ПАФ с последующим воздействием на организм животного иммобилизационным стрессом.

Предлагаемый способ позволяет исследовать условия и механизмы перехода предболезни в болезнь; изучить различные неспецифические патогенные факторы, вызывающие полиартрит, характер и условия их патогенного действия на организм при весьма надежной воспроизводимости.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Белым лабораторным крысам-самцам средним весом 145 г вводят 0,07-0,08 мл полного адъюванта Фрейнда (состав ПАФ представляет собой инактивированную культуру БЦЖ (2 мг/мл) в масляной среде (1 ч. ланолина и 30 ч. вазелинового масла)) внутрикожно в подушечки задних лап. В течение последующих 14-ти суток у животных 1 раз в неделю регистрировались основные показатели динамики состояния животных: диаметр окружности голеностопных суставов, ректальная и локальная температуры, СОЭ, количество лейкоцитов в периферической крови. С 14-х по 28-е сутки после введения ПАФ крыс подвергали ежедневному иммобилизационному стрессу. Стресс воспроизводили фиксацией крыс на станке в течение 1 часа. На 28-е сутки животных декапитировали. Кровь бралась для анализа ряда биохимических показателей.

Приводим примеры конкретного осуществления предлагаемого способа моделирования ревматоидного артрита.

Пример 1.

40 белых лабораторных крыс-самцов весом 135-150 г после внутрикожного введения подпороговой дозы ПАФ наблюдались в течение 28 суток. 1 раз в неделю регистрировались основные показатели динамики состояния животных: диаметр 4 окружности голеностопных суставов, ректальная и локальная температуры, СОЭ, количество лейкоцитов в периферической крови.

Результаты показали, что к концу 1-й недели применения стресса была отмечена достоверная отрицательная динамика как по местным показателям: диаметр голеностопных суставов увеличился на 70,3%, локальная температура повысилась на 8,2%, так и по общим: повышение СОЭ на 84,4%, количества лейкоцитов на 50,0%. К концу 2-й недели достоверная динамика усилилась, что было отмечено по всем изучаемым показателям воспалительного процесса: увеличение диаметра голеностопных суставов на 75,7%; общей и локальной температур на 1,1 и 10,8%, соответственно; повышение СОЭ на 177,8%, лейкоцитов на 87,2%.

Основные результаты исследований приведены в таблице 1.

Пример 2.

40 лабораторных белых крыс-самцов средним весом 145 г подвергали ежедневному иммобилизационному стрессу с 14-х по 28-е сутки со дня введения подпороговой дозы ПАФ. Декапитировали на 28-е сутки. Исследовали следующие биохимические показатели крови: общий белок, общий холестерин, АЛТ, ACT, первичные продукты перекисного окисления липидов (диеновые конъюгаты и кетодиены) в сыворотке крови. Группой сравнения служили животные с адъювантным артритом, воспроизводимым введением 0,2 мл ПАФ в подушечки задних лап.

У опытных животных к 28-м суткам были отмечены достоверные изменения следующих показателей: снижение общего белка сыворотки крови на 16,7%, общего холестерина на 15,9%, повышение АЛТ на 67,3%, ACT на 23,4%.

В группе этих животных была выявлена активация процессов перекисного окисления липидов. Зарегистрировано повышение продуктов перекисного окисления липидов: диеновых конъюгат на 69,6%, кетодиенов на 74,1%.

При сравнении опытной группы животных с группой крыс с адъювантной болезнью по диаметру голеностопных суставов не было выявлено достоверной разницы.

Основные результаты исследований приведены в таблице 2.

Способ моделирования ревматоидного артрита выполним в условиях лаборатории патофизиологического профиля.

Таблица 1.ВЛИЯНИЕ ИММОБИЗИЗАЦИОННОГО СТРЕССА НА ДИНАМИКУ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА У КРЫС С ПРЕДБОЛЕЗНЬЮ И С АДЪЮВАНТНЫМ АРТРИТОМУсловия опытаIIIIIIIVVМасса тела (I), ее прирост (II-V)Интактная157±612,1±0,814,6±0,8*23,2±0,8*29,5±0,9* Контроль (стресс)157±67,9±0,819,8±0,9*23,3±0,9*18,3+1,0* Адъювантный артрит170±4-18,9±2,0*-27,1±3,4*-31,5±2,6*-24,2+2,2* Адъюв. предб-знь160±32,0±2,210,0±1,5*15,0±2,5*20,0+2,0* Адъюв. предб-знь + стресс165±41,6±3,07,0±4,3-3,4±5,2-10,4+4,1*Диаметр суставовИнтактная6,7+0,16,7+0,16,8+0,16,8+0,16,9+0,1 Контроль (стресс)6,7+0,16,8+0,17,1+0,17,1+0,17,1+0,1 Адъювантный артрит6,7+0,110,6+0,1*12,3+0,2*13,5+0,1*13,2+0,2* Адъюв. предб-знь6,7+0,16,8+0,17,0+0,17,1+0,17,1+0,1 Адъюв. предб-знь + стресс6,7+0,16,9+0,17,4+0,412,6+0,2*13,0+0,2*Общая температураИнтактная37,4+0,137,3+0,137,5+0,237,3+0,137,3+0,1 Контроль (стресс)37,6+0,137,5+0,137,5+0,137,0+0,137,4+0,1 Адъювантный артрит37,2+0,138,6+0,1*39,2+0,2*39,5+0,1*39,4+0,1* Адъюв. предб-знь37,4+0,137,4+0,137,2+0,137,3+0,137,2+0,1 Адъюв. предб-знь + стресс37,3+0,237,6+0,137,7+0,137,6+0,138,1+0,2*Локальная температураИнтактная30,1+0,130,1+0,130,5+0,230,1+0,130,1+0,1 Контроль (стресс)30,1+0,130,0+0,130,1+0,130,2+0,130,2+0,1 Адъювантный артрит30,1+0,133,1+0,1*34,3+0,1*34,6+0,1*34,4+0,2* Адъюв. предб-знь30,1+0,130,1+0,130,3+0,130,7+0,230,8+0,1 Адъюв. предб-знь + стресс30,1+0,130,4+0,130,5+0,533,0+0,1*33,8+0,1*СОЭИнтактная3,5+0,13,4+0,14,5+0,13,5+0,23,5+0,3 Контроль (стресс)3,7+0,33,8+0,23,6+0,33,8+0,33,4+0,2 Адъювантный артрит3,8+0,711,0+0,9*13,8+0,4*14,6+0,3*13,5+0,4* Адъюв. предб-знь3,6+0,34,7+0,44,4+0,34,6+0,44,3+0,2 Адъюв. предб-знь + стресс3,2+0,24,3+0,3*4,5+1,18,3+0,4*12,5+0,3*Кол-во лейкоцитовИнтактная13,3+0,513,1+0,214,9+1,813,5+0,413,3+0,4 Контроль (стресс)13,5+0,313,6+0,313,1+0,216,0+0,117,4+0,1 Адъювантный артрит13,3+0,325,8+0,3*29,5+0,2*31,4+0,2*29,5+0,3* Адъюв. предб-знь13,0+0,313,6+0,213,9+0,314,0+0,314,1+0,2 Адъюв. предб-знь + стресс13,3+0,214,2+0,2*14,9+1,8*22,2+0,5*27,9+0,3*Примечание: I, II, III, IV, V - сроки снятия показателей - в день введения ПАФ, на 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки соответственно.Звездочка (*) - р<0,05 внутри групп по срокам, сравнительно с днем введения ПАФ.

Таблица 2.ВЛИЯНИЕ ИММОБИЗИЗАЦИОННОГО СТРЕССА НА ДИНАМИКУ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У КРЫС С ПРЕДБОЛЕЗНЬЮ И С АДЪЮВАНТНЫМ АРТРИТОМNУсловия опытаСодержание ОБ, г %Содержание OX, ммоль/лNУсловия опытаСодержание ОБ, г% Содержание ОХ, моль/л1Интактная7,0±0,176,0±1,43Адъювантный артрит5,9±0,265,3±1,52Контроль (стресс)6,4±0,167,0±1,34Адъювантная предболезнь6,4±0,173,4±1,9    5Адъюв. предболезнь + стресс6,0±0,165,6±1,2   Содержание АЛТ, ед.Содержание ACT, ед.  Содержание АЛТ, ед.Содержание ACT, ед.1Интактная20,8+1,359,0+1,83Адъювантный артрит35,9+1,582,3+1,02Контроль (стресс)26,7+1,566,9+1,24Адъювантная предболезнь32,5+1,169,3+1,9    5Адъюв.предболезнь + стресс34,8+2,072,8+2,2   Содержание ДК, на мг липидовСодержание КД, на мг липидовNУсловия опытаСодержание ДК, на мг липидовСодержание КД, на мг липидов1Интактная1,71+0,020,58+0,013Адъювантный артрит3,46+0,011,22+0,032Контроль (стресс)1,78+0,020,67+0,024Адъювантная предболезнь2,14+0,020,86+0,02    5Адъюв. предболезнь + стресс2,90+0,031,01+0,02Примечание: В каждой группе использовалось по 8 животных.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования ревматоидного артрита. Для чего вводят 0,07-0,08 мл полного адъюванта Фрейнда (ПАФ), после чего организм животного подвергают воздействию иммобилизационного стресса в течение 1 часа ежедневно в период с 14-х по 28-е сутки. Данный способ моделирования ревматоидного артрита воспроизводим в условиях экспериментальной лаборатории. Предлагаемый способ обеспечивает адекватную воспроизводимость модели, исследование условий и механизмов перехода предболезни в болезнь. 2 табл.

Способ моделирования ревматоидного артрита путем введения полного адъюванта Фрейнда (ПАФ), отличающийся тем, что введение ПАФ производят в количестве 0,07-0,08 мл (подпороговая доза), после чего организм животного подвергают воздействию иммобилизационного стресса в течение 1 ч ежедневно в период с 14-х по 28-е сутки.