Штамм @ @ - @ @ -2464 @ -продуцент рибонуклеаз Советский патент 1984 года по МПК C12N9/22 C12R1/80 

со о со

. Изобретение относится.к микробиологической промышленности и представляет собой штамм, который может быть использован для получения ферментов рибунёклеаэ.

Нуклеазы являются реагентами, необходимыми для расшифровки структуры нуклеиновых кислот, Гуанилспецифическая щелочная рибонуклеаза используется для получения различных нуклеотидов, а также в исследованиях по изучению взаимосвязи свойств ферментой и их структуры. Неспецифическая кислая рибонуклеаза используется при ферментативном синтезе олигонуклеотидов. Возможно также ее применение в медицине в качестве противовирусного препарата.

Известно,- что грибы вида Penicillium brevi-compactura выделяют в питательную среду неспецифическую кислую (преобладающий компонент) и гуанилспецифическую щелочную (минорный компонент) рибонуклеазы 1J,

Известен также штамм Penicillium brevi-compactum F-399 22.

.Этот штамм является низкопродуктивным. Достигаемая с помощью этого штамма ферментная активность составляет 30 ед/мл гуанилспецифической и 5 ед/мл неспецифической рибонуклеаз.

Цель изобретения - повышение активности рибонуклеаз.

Указанная цель достигается получением нового штамма Penicillium brevicompactum BKIVI F-2464D, обладающего более высокой продуцирующей активностью.

: Новый штамм получен в результате многократных моноспоровых рассевов культуры Penicillium brevi-compactum

F-399 с последующим отбором.наи более активных вариантов. Предлагаемый штамм продуцирует как гуанилспецифическую, так и неспецифическую рибонуклеазы в количестве до 70 ед/м каждой.

Культуральная и морфологическая характеристики штамма.

Penicillium brevi-compactum ВКМ F 2464.

Культуральные признаки.

Среда 1. Среда Чапека, (г/л): сахароза 30,0; NaNOj 2,0; KHjPO 1/0; MgSO 7Нг.О ; 0,5; КСе 0,5; feSO -THjO 0,1; агар-агар 20,0.

На 9-е сутки колонии при диаметром 3-4 см. Бархатистые, до почти войлочных, рыхлые с краевой зоной сранительно тонкой, слегка радйально бороздчатые. Вначале белые, быстро приобретают тускло-зеленую окраску, олизкую к светло-серым или желтоватосеро-зеленьим тонам,в конидиальной зоне приближающимся к серовато-оливковым при старении. На обратной стороне тускло-оливково-зеленые до темно-кори невых. Иногда образуют бесцветную зону (1-2 см/. Эксудат обильный, бесцветный или кремовый,.

Среда 2: Сусло-агар ( нейтральный

Рост культуры на сусло-агаре очен хороший.. Отличается от роста на сред Чапека отсутствием эксудата. Колонии окрашены в серо-зеленый цвет, плоские. Обратная сторона цвета среды.

Среда 3, Среда Чапека-Докса, г/л: глюкоза 20,0; КМО 2,0; КН2РО4 1,0; M( 7H,jO 0,5; KCt 0,5; Fe 50 0,01; агар-агар 20,0,

Рост очень скудный, колония растет концентрическими кругами. Цвет зеро-зеленый. Обратная ctopoHa неокрашенная.

Среда 4, Среда Ваксмана, (г/л)Ь KHjPQy 1,0; fA SO -lH2O 0,5f глюкоза 10,0; пептон 5,0; агар-агар 20,0,

Колония серо-зеленая, рост скудны концентрическими кругами. Обратная сторона желтого цвета.

Среда 5. Глюкоз о-, картофельный агар.

Рост очень скудный. Цвет серо-зеленый. Центр колонии приподнят в месте укола. Обратная сторона неокрашена.

Морфологические признаки.

Среда 1. Гифы толстые до 3-4,5 мкм гранулированные. Конидиеносцы большей частью 300-500x4-5 мкм, гладкие с 1-2 веточками, плотно прижатыми вверху. Веточки 10-15x3-4,5 мкм, Метули по 3-6 , обычно расширенные вверху,клиновидные. Канодии почти шаровидные 3-5 мкм.

Среда 2, Гифы, как и на среде 1, густогранулированные. Спороношение более интенсивное по сравнению с ростом на среде Чапека, Конидии шаровидные размером 2-3 мкм.

Пример. Культуру Penicillium brevi-compactum ВКМ F 2464, хранящуюся на скошенном агаре на среде ; {Чапека с сахарозой, выращивают на среде, содержащей, г/л соевая мука 0,5; глюкоз1а 5,0; пептон 1,0;

0,2; ..7Н.О 0,05; СаСе ЗНгО о,02 (рН до стерилизации 6,1-6,4), в течение суток при 24°С в колбах емкостью 750 мл с объемом указанной среды 100 мл на качалке при 200 об/мин. Посевной материал в количестве 10% добавляют в среду указанного состава и культивируют при тех же УСЛОВИЯХ в течение 3 сут, .

Активность рибонуклеаз определяют при рН 5,0 (киблой/ и рН 7,8 (щелочной) с использованием в качестве субстрата дрожжевой РНК- Na (НПО Биохимреактив) и выражают в спектрофотометрических единицах () в пересчете на 1 мл исследуемой жидкости.

Активность кислой рибонуклеазы 70,0 ед/мл, мелочной - 64,7 ед/мл.

П р и м е р 2. Подготовку посевного материала проводят аналогично примеру 1.

Полученную -культуру в количестве 10% используют для засева ферментерй - инокулятора ёмкость ферментера 30 л, объем среды 20 л. Выращивание инокулюма проводят при.24±1е, перемешивании 300 об/мин и аэрации ,0,6 объема, воздуха на 1 объем среды в минуту на среде, указанной в примеое 1. Чеоез СУТКИ выоосший инокулюм в количестве 10% от объема среды передают в ферментер емкостью 100 л, содержащий 70 л указанной среды. Культивируют 72 ч при 24j-l c, перемешивании 350 об/мин, поддерживают значение рН на уровне , содержание растворенного кислорода не ниже ,20-30. К 72-м часам ферментации ак;тивность культуральной жидкости составляет по кислой рибонуклеазе 57,5 ед/мл, щелочной - 44,0 ед/мп.

Таким образом, предлагаемый штамм обладает более высокой продуцирующей способностью, чем известные штаммыпродуценты рибонуклеаз.

Штамм Penicilllum brevi-compactum BKM.F-2464D (Всесоюзная коллекция микроорганизмов, коллекционный номер ВКМ F 2464 D) - продуцент рибонуклеаз . сл