Способ очистки сыворотки крови от липидов Советский патент 1984 года по МПК A61K35/16 

i

СПОСОБ ОЧИСТКИ СЫВОРОТКИ КРОВИ ОТ ЛИПИДОВ путем центрифугирования гетерогенной системы, содержащей сыворотку и органический растворитель с меньшим удельным весом, чем сыворотка, отличающийся тем, что, с целью сохранения нативности белков сыворотки, в гетерогенную систему дополнительно вводят хлоро- форм и проводят центрифугирование системы при соотношении верхней фазы, сыворотки и нижней фазы 10:15:10 по объему.

д Э

сл 1 Изобретение относится к медицинской биохимии, -а именно к способам очистки белковых растворов с сохранением нативных свойств белков, и может быть использовано в биохимичес ких анализах при колориметрическом определении веществ, имеющих максиму поглощения в той же области спектра что и липиды, а также в производстве белковых препаратов крови с целью очистки от балластных липидов присутствие которых оказьшает значительное влияние как на физико-химические свойства препаратов, особенно при хранении, так и обусловливает ряд побочных явлений при введении. Известен способ полного освобожде ния плазмы или сыворотки крови от ли пидов путем добавления к ней двойног объема смеси бутанол: диизопропилопый эфир (40:60) и встряхивания при комнатной температуре в течение 30 мин с последующим разделением фаз центрифугированием Л . Однако известный способ не обеспе чивает сохранения нятивйости белков сыворотки и не является универсальным (очистка некоторых образцов невозможна). Целью изобретения является сохранекие нативности белков сыворотки при очистке ее от липидов. Указанная цель дocтигaetcя тем, что согласно способу очистки сыворотки крови от липидов путем центрифугирования гетерогенной системы, содержащей сыворотку и органический растворитель с меньшим удельным весом, чем сыворотка, в гетерогенную систему дополнительно вводят хлороформ и проводят центрифугирование системы при соотношении верхне фазы, сыворотки и нижней фазы 10:15:10 по объему.

362,72+49,956

. ,

140,094+ 181,362+

10,860 11,946 7,819

61,3

67,6 5J Пример. В центрифужные полиэтиленовые пробирки диаметром 28 мм на слой хлороформа (10 мл) наслаивают слой прозрачной сыворотки, лищенной хиломикронов: промьпиленной (допускаемой МРТУ-42 № 84-56 для производства белкового препарата гамма-глобулина) или донорской (15мл). Сверху на слой сыворотки наслаивают слой диэтилового эфира (10 мл), пробирки накрывают крышкой. Центрифугируют в течение 30 мин при скорости 50000 д при охлаждении ротора центрифуги до О - +4 С. Сыворотку После центрифугирования отделяют вакуумом. Содержание липидов в контрольных и опытньк образцах сыворотки определяют методом К.И.Хуэрго. Результаты представлены в табл. 1. Испытание на нативность обезжиренных по предлагаемому и известному способам сывороток крови проводилось по изучению степени коагуляции белка (табл.2), сохранения электрофоретической подвижности фракции (табл.3), сохранения фракционного состава сыворотки (табл.4) и сохранения татра антител во фракции гамма-глобулина (табл.5). В таблицах показатели выражены в средних арифметических величинах из 5 сывороточных образцов. (сыворотки, взятые для эксперимента, до извлечения липидов были прозрачны и слегка опалесцировали). ПредлаГаемьй способ освобождает белковые образцы от липидов с сохранением нативных физико-химических свойств белковых образцов, а также в отличие от известного способа, непригодного для очистки от липидов промышленных плацентарных и абортных сывороток нследствйе их коагуляции, является универсальным. IТ а б л и ц а 1

т

Сыворотка крови

Способ.

Абортная

Известный

Предлагаемый

Плацентарная

Известный

Предлагаемый

Известный

Донорская промышленная

Предлагаемый

Извествьй способ

т3,03

1,37

Определить, невозможно

Плацен2,72

1,36 тарная

Таблица 2

Степень коагуляции

При очистке сильная коагуляция, образование желеобразного геля

После очистки коагуляции и гелеобразования нет, сыворотка прозрачна, опалесценции нет

После очистки сильная коагуляция, образование желеобраного геля

После очистки коагуляции и гелеобразования нет, сыворотка прозрачна, опалесцен.ции не т

После очистки коагуляция составила 6,2%, гелеобразования нет, сильная опалесценция

После очистки коагуляции и гелеобразования нет, сыворотка прозрачна, опалесценции нет

Таблица 3

9,04

- 5,63,

7,39

ОпОпреОпреределить

деденелить

лить

невознеможвозвозможно

можно

но

8

Продолжение табл.4