Способ получения глюкозоизомеразы Советский патент 1984 года по МПК C12N9/92 

эо

О

ч1

Изобретение относится к микообиологической промышленности, в час ности к производству ферментный пр паратов, и может найти применение в микробиологической промьиштенност крахмалопаточной, пищевой для полу чения глюкозно-фруктозного сиропа гидролизатов крахмала. Известен способ получения глюко изомеразц/ предусматривающий куль вирование продукта Actinomyces vener ale 332 на питательной среде, содержа D -ксилозу, пептон, дрожжевой экс. тракт, Kg HPOij, MgSO и агар. Актив ность полученной культуральной жид кости 10-11,0 мг И-фруктозы на 1 культуральной жидкости С13. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положитель ному эффекту к предложенному являе ся способ С 21, получения высокооч щенной глюкозоизомеразы из Actinomyces olivocinereus 154 и ИЗ молоч .кислой бактерии Lactobacillus brev 74, предусматривающий культивирова ние штаммов продуцентов на питател ных средах следующего состава, г/л Lb.brevis 7 A.divocinereusКсилоза Глюкоза Пептон Экстракт солодовых ростков (20%-ная вытяжка) Дрожжевой экстракт Кукурузный экстрактНатрий хлористый Кобальт хлористый Магний сернокислыйВода в0допроводная до 1,0 л рН среды рН среды 7,0 Для А.olivocinereus 154 способ включает высушивание промытой дистиллированной водой биомассы, экстракцию буфером, фракционирование ацетоном и сульфатом аммония, гель хроматографию на сефадексе Ж-200, кристаллизацию гомогенного фермент та; для Lb.brevis 74- фракционирование бесклеточного экстракта суль фатом аммония,ионообменную хромато графию на ДЭАЭ-целлюлозе. Однако согласно известным спосо бам получения глюкозоизомеразы целевой продукт получается с недостаточно высокой активностью, а также дорогой, так как культивирование штаммов-продуцентов осуществляется на среде, содержащей дорогостоящий компонент - пептон. Целью изобретения является повышение активности целевого-продукта и снижение его себестоимости. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения глюкозоизомеразы, предусматривающему культивирование штаммовпродуцентов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, ростовые вещества, минеральные соли, в качестве источника азота используют творожную сыворотку, причем в случае применения в качестве продуцентов актиномицетов используют сыворотку с содержанием веществ 18-19,5% в количестве 810 об.%, а в случае применения в качестве продуцентов молочнокислых бактерий - нативную сыворотку, которая является основной среды. Использование в составе сред молочной сыворотки способствует созданию безотходной технологии в молочной промышленности. . Предлагаемый способ получения глюкозоизомеразы включает следующие стадии: приготовление посевной культуры, выращивание штаммов-продуцентов на видоизмененной среде,отделение биомассы и отмывки ее.от остатков среды путем центрифугирования при 2000 в течение 120 мин, высушивание биомассы или использование в сыром виде для получения целевого продукта. Пример. Препарат глюкозоизомеразы А.olivocinereus 154 получают выращиванием продуцента на питательной среде, которую готовят следующим образом: к 300 мл водопроводной воды добавляют 7 г ксилозы, 3 г глюкозы, 5 г хлористого натрия, 0,5 г сернокислого магния, 0,13 г хлористого кобальта, перемешивают до растворения, добавляют 20 мл экстракта солодовых ростков (20%-ная вытяжка) или 25 г дрожжевого экстракта, затем добавляют 100 мл упаренной сыворотки (сухих веществ , 18-19,5%), объем раствора доводят до.1 л водопроводной водой, подщелачивают 0,1-1 ч . NaOH до рН 7,0. Активность препаратов фермента, получаемых по предлагаемому способу увеличивается на 22% по сравнению с известным способрм, а биомасса на 43,8%, если использовать в составе видоизмененной среды упаренную молочную сыворотку. П р и м е р 2. Препарат глюкозоизомеразы Lb,brevis 74 получают выращиванием продуцента, на..питательной

среде, которую готовят следующим образом: к 300 мл водопроводной воды добавляют 10 г ксилозы, 15 г ксилозы 1 г глюкозы, 10 г уксуснокислого натрия, 1,0 г сернокислого марганца, 0,1 г хлористого кобальта, перемешивают до растворения, добавляют 25 мл экстракта солодовых ростков (25%-ная вытяжка) или 25 г дрожжевого экстракта, 100 мл нативной молочной сыворотки с содержанием 6,8-7,1% сухих веществ, объем раствора доводят до 1 л водопроводной водой, подщелачивают 0,1-1н . NaOH до рН 6,5, Среда может быть приготовлена на нативной молочной сыворотке вместо водопроводной воды без пептона. Активность препаратов фермента, получаемых по предлагаемому способу, увеличивается на 22% по сравнению с известным способом, а биомасса - на 30%,- если использоват в составе среды нативную сыворотку,

В таблице представлены сравнительные данные по активности и накоплению биомассы продуцентов глюкозоизомеразы, полученные по известному и предлагаемому способу.

Среда Продуцент глюкозоизомеразы С пептоном и кукурузным экстрактом контроль С нативной молочной сывороткой С упаренной молочной сывороткой Продуцент глюкозоизомеразы С пептоном и кукурузным экстрактом контроль С нативной молочной сывороткой С упаренной молочной сывороткой

Предлагаемый способ позволяет повысить активность глюкозоизомеразы на на 22% за счет введения в состав питательной среды молочной сыворотки.

Удешевление способа происходит за счет применения питательной среды с использованием отхода молочной промышленности - молочной сыворотки, которая представляет собой новый ; компонент среды для выращивания продуцентов глюкозоизомеразы, причем пептон полностью заменен новым компонентом.

Применение молочной сыворотки обеспечивает возможность получения готового продукта в зависимости от цели,актиномицентного или бактериальнрго происхождения, что расширяет ассортимент ферментов, а также позволяет создать безотходную технологию в молочной промышленности.

При использовании предлагаемого 25 способа отпадает необходимость приобретения ценного реактива за рубежом (пептона),

Активность глюкозо.Вес воздушно-сухой изомеразы, % биомассы, % актиномицета 100 77,2 143,8 молочнокислой бактерии

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОЗОИЗОМЕРАЗЫ, предусматривающий культивирование штаммов-продуцентов на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, ростовые вещества, , минерёшьные соли, отличающийся тем, что,С целью повышения активности целевого продукта и снижения его себестоимости, в качестве источника азота используют творожную сыворотку, причем в случае применения в качестве продуцентов актиномицетов используют сыворотку с содержанием сухих веществ 18-19,5% в количестве б-10 об .%,а в случае применения в качестве продуцентов молочнокислых бактерий - нативную сыворотку, которая является.основой среды.