Проточный флуоресцентный детектор для аминокислотного анализа Советский патент 1984 года по МПК G01N21/64 

m

,нм

260

m

ФигЛ Изобретение относится к измерите лям интенсивности флюоресценции пот ка жидкости и может найти применени в хроматографических системах разде ления и анализа аминокислот, а такж в биотехнологии, биохимии, медицине и молекулярной биологии, Известны жидкостные хроматографы, которые представляют собой систе му, состоящую из следующих основных элементов: насосов, подающих в колонку буферные растворы и анализируе мую смесь, колонки, заполненной сор бентом, который удерживает индивидуальные вещества анализируемой сме си в различное время; реактора, уст новленного на выходе колонки, в котором разделенные индивидуальные ве щества, например аминокислоты, переводятся в форму, имеющую повышенную интенсивность флюоресценции; оптичес кого детектора, регистрирующего в узкой спектральной области изменения .интенсивности флюоресценции во време ни, соответствующие последовательно му выходу с колонку индивидуальных аминокислот til. Однако известные устройства характеризуются сложностью конструкции Наиболее по технической сущности к изобретению является проточ ный флюоресцентный детектор, для аминокислотного анализа, содержащий источник света, проточную микрокювету и фотсщетектор Г21. Недостатки этого устройства заключаются, во-первых, в относительно больших габаритах оптической части прибора, обусловленных необходимость формирования возбуждающего пучка и точного его сведения на центр проточ:ной микрокюветы, во-вторых, высокой стоимости оптических деталей, поскольку использованы кварцевые линзы и фильтры, юстировка которых требует высокой квалификации. Цель изобретения - упрощение конструкции оптической схемы прибора. Поставленная цель достигается тем, что в проточном флюоресцентном детекторе для аминокислотного анализа, содержащем источник света, проточную микрокювету и фотодетектор, проточная микрокювета, расположенная на общей оптической оси с источником света и фотодетектором, выполнена с входным окном из кварца и параллельным ему выходным окном из стекла, а в качестве источника света применен радиолюминесцентный излучатель, размеры и форма светя1цейся поверхности которого равны размерам и форме входного окна проточной микрокюветы. Излучающая поверхность радиолюминесцентного источника света может непосредственно контактировать с вход ным окном проточной кюветы, а входная поверхность фотодетектора установлена на минимально возможном расстоянии от выходного окна проточной кювета. На фиг. 1 дан спектр излучения одного из типичных радиолюминесцентных источников (РЛИ); на фиг. 2 схема оптического детектора согласно изобретению. Схема включает источник света 1, кювету 2, кварцевые окна 3 и 4 кюветы, фотоэлектронный детектор 5. РЛИ, светящаяся поверхность которого имеет размеры и форму, равные таковым входного окна 3 проточной кюветы 2, наложен на это окно, изготовленное из кварца. Выходное окно кюветы изготовлено из обычного стекла, не пропускающего возбуждающий свет, максимум интенсивности которого лежит в области 330 нм, но прозрачного для света флюоресценции комплекса аминокислота-ортофталевый альдегид (максимум свечения - при 570 нм ). В непосредственной близости от выходного окна 4 кюветы 2 (зазор между этими элементами схемы определяется толщиной шторки ) находится входная поверхность фотоэлектронного умножителя, регистрирующего свет флюоресценции образца, протекающего через кювету. Устройство работает следующим образом. Свет источника 1 проходит через кварцевое окно 3 кюветы 2, возбуждая люминесцентное свечение объекта. Свет люминесценции проходит через стеклянное окно 4 кюветы, не пропускающее свет источника 1, и регистрируется фотоэлектронным детектором 5. Конструкция устройства проста и не содержит дорогих и требующих точной юстировки оптических деталей. В то же время практически все или значительная часть излучения источника (РЛИ) используется для возбуждения флюоресценции объекта, а потери света, вносимые поглощением, отражением и аберрациями линз или зеркал, также отсутствуют. Это в значительной мере компенсирует потери чувствительности регистрации, связанные со значительно меньшей,чем у дуговых ламп, интенсивностью светового потока РЛЙ.

li ПРОТОЧНЫЙ ФЛООРЕСЦЕНТНЫй ДЕТЕКТОР ДЛЯ АМИНОКИСЛОТНОГО АНАЛИЗА содержащий источник света, проточную: микрокювету и фотодетектор, отличающийся тем, что, с целью OTff упрощения детектора; проточная микрокювета, расположенная на общей оптической оси с источником света и фотодетектором, выполнена с входным окном из кварца и параллельным ему выходным окном из стекла, а в качестве источника света применен радиолюминесцентный излучатель, размеры и форма светящейся поверхности которого равна размерам и форме входного окна проточной микрокюветы. 2. Детектор по п. 1, о т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целью упрощения регулировки и настройки оптической схемы, излучающая поверхность .радиолюминесцентного источника света непосредственно контактирует с входным окном проточной кюветы, а входная поверхность фотодетектора установлена на минимально возможном расстоянии отВЫХОДНОГО окна проточной кюветы. 1.0 0.5 00