Способ получения средства,обладающего антидиуретическим действием Советский патент 1984 года по МПК A61K35/30 

Ь

1 1

Изобретение относится к технологии гфоизводства медицинских препаратов, обладающих антидиуретическим свойством и может быть использорано на предприятиях медицинской и мясомолочной промышленности при производстве лекарственных средств из животного сырья, а получаемое в результате применения изобретения лекарственное средство может быть использовано в лечебно-профилактических учреждениях.

Извесгсн способ получения средства, обладающего актидиуретическим действием, включающий обезЬоживание ацетоном замороженных задних долей гипофиза, экстракцик раствором уксусной кислоты, депротеинизирование экстракта обработкой раствором коллоидного железа и двууглекислого натрия, отстаивание экстракта, фильтрование и установление рН 3,5 добавлением 2н, раствора соляной кислоты, после чего экстракт упаривают с установлением в нем рН 6,5 с помощью 10%-ного раствора едкого натра.

Биологическая активность полученного средства 0,25 МЕД jf 0,1 в 1 мг П.

К недостаткам известного способа получения препарата адиурекрина относятся плохая растворимость порошка адиуреюрина наличие в порош.ке большого количества балластных веществ трудность дозирования и применения препарата в медицинской практике.

Кроме того, при использовании порошка адиурекрина имеют место раздражение слизистой носа и другие нежелательные реакции. Выход конечного продукта адиурекрина сопровождается низкой биологической активностью.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем что согласно способу получения средства, обладающего антидиуретическим действием, включающему обезжиривание задних долей гипофиза, экстракцию сырья, последующее осаждение балластных веществ с помощью раствора коллоидного железа и вьщеление целевого продукта, после лиофилизации экстракцию сырья осуществляют смесью этилового спирта и4М ацетатного буфера при их соотношении 3:1 и

1262

рН 5,3, а при осаждении в экстракт дополнительно вводят раствор аммиака, полученную жидкую фазу отделяют фильтрованием, а осадок заливают

5 раствором соляной кислоты, нагревают и после охлаждения в суспензию вновь добавляют раствор аммиака, выпавший осадок отделяют, а надосадочную жидкость присоединяют к первоначаль0 ному фильтрату.

Пример. 1 кг лиофильно высушенных задних долей гипофиза заливают смесью этилового спирта (2,А л) и 4 М раствором ацетатного

5 буфера рН 5,3 (0,8 л). Соотношение спирта и ацетатного буфера 3:1, Полученную массу пропускают через волчок. В реактор предварительно вносят 15 л этилового спирта и 5 л 4 М аце0 татного буфера. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 25°С. Полученную суспензию обрабатывают на сепараторе, отделяя жмых от прозрачного экстракта.

5 Осаждение. К 2 л полученного экстракта при перемешивании добавляют 40 л этилового спирта. Перемешивание продолжают 15 мин и оставляют на 2 ч . Прозрачную надосадочную

0 жидкость декантируют, а нижний слой центрифугируют либо пропускают через сепаратор. Полученный осадок .промывают на нуч-фильтре, а затем сушат ацетоном и спиртом.

Последующая сушка осуществляется в вакуум-сушильном шкафу при 40 С в течение 30 мин. Вькод сырца составляет 500 г из 1 кг сублимированных гипофизов с биологической

активностью 12 МЕ/мг.

0,5 кг сырца с биологической активностью 12 ME растворяют в 12 л 0,1%-ного растворе уксусной кислоты, перемешивая его при подогревании до . Такую температуру поддерживают в течение 1 ч. Далее температуру снижают до 20°С. Для освобождения экстракта от белка к охлажденному раствору добавляют 37 л воды и 15 л 10%-ного раствора коллоидного железа и доводят рН раствора до 6,6 12%-ным раствором аммиака. Вы павший осадок отделяют с пс(ощью бумажного фильтра, а раствор со5 бирают в емкость. Отделенный осадок коллоидного железа вместе с фильтратом переносят в экстракторный аппарат и заливают 30 л 0,1 н. 3 раствора соляной кислоты при одновременном подогревании до в течение 16 мин, а.затем охлаждают до 30 С (15 мин), В суспензии устанавливают рН 6,5 путем добавления 12%-ного раствора аммиака.. После установления н -жного рН в суспензии осадок отделяют, а надосадочную жидкость присоединяют к первоначальному фильтрату. Полученный осадок повторно помещают в емкость и дважды обрабатывают, как описано (2,5ч) после чего образуется высококонцентрированный раствор. Фильтраты объединяют и доводят рН до 3,5. Биологическая активность такого концентрированного раствора составляет ME/мл. Данный раствор разбавляют дистиллированной водой, консервируют нипагином, фильтруют и разливают в полиэтиленовые флаконы емкостью 1,5 мл с биологической активностью 20 и 40 ME/мл. Биологическую активность конечного продукта определяют двумя методами: методом определения биологической активности по вазопрессорному эффекту на белых беспородных крысах массой 250-300 г. основанным на способности вазопрессина, содержащегося в препарате, повышать уровень артериального давления (испытания приведены в сопоставлении с Международным стандартом ВОЗ); методом определения биологической активности по способности препарата задерживать диурез у белых крыс с водной нагрузкой по сравнению с контрольной группой животных, которым не вводился испытуемый препарат. Результаты исследований антидиуре тической активности средств, получен ных известными предлагае ым способами проведенных через 5 ч после водной нагрузки (10 мл физиологического раствора в/бр.) представлены в таб264лице (в 1 мл 20 Ед, животным вводят по 0,02 Ед/100 г массы тела). Предлагаемый способ получения антидиуретического препарата дает Возможность использовать конечный продукт в более удобной лекарственной форме, в виде носовых капель, а не в виде понюшек. Примером практической реализации предлагаемого способа является новая технология получения лекарственного препарата, которая предусматривает экстрагирование биологически активных веществ (нейропептццов) в раствор, который стандартизируется и может использоваться в.медицинской практике в виде носовых капель по следующей прописи: концентрированный раствор стандартизованного целевого продукта 35 мл (2000 НЕ); нипагин (консервант) 100 мг; дистиллированная вода до 100 мл. Полученный раствор разливают во флаконы до 1 мл с 20 НЕ или АО МЕ/мп. При приготовлении раствора с 40 НЕ/мл целевой продукт в данной прописи удваивается. Предлагаемый способ обеспечивает получе1 ие антидиуретического средства с большим выходом. Практическое внедрение предлагаемого способа в производство способствует получению эффективного лекарственного средства для медицинской практики. Эффективность предлагаемой технологии выражается в удешевлении технологического процесса получения препарата за счет увеличения выпуска готового лекар- ственного средства более чем в 1,5 раза по сравнению с адиурекрином. Удешевление технологического процесса составляет 60% от прототипа и исключает необходимость в выпуске трудноиспользуемого и малоэффективного лекарственного препарата адиурекрина в порошке. Адиурекрин Контроль7,5 Опытная6,8 Контроль8,1 Опытная6,3 Контроль8,3 Опытная6,5 Средство, полученное предп Контроль7 Опытная4 Контроль8 Опытная4,8 Контроль8,1 Опытная4,5 бом 70 40 80 48 81 45

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИДИУРЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, включающий обезжиривание задних долей гипофиза, экстракцию сырья, последующее осаждение балластных веществ с помощью раствора коллоидного железа и выделение целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, после лиофилизации экстракцию сырья осуществляют смесью этилового спирта и 4 М ацетатного буфера при их соотношении 3:1 и рИ 5,3, а при осаждении в экстракт дополнительно вводят раствор аммиака, полученную жидкую фазу отделяют фильтрованием, а осадок заливают раствором соляной кислоты, нагревают и поспе охлаждения в суспензию вновь добавляют раствор аммиака, выпавший осадок отделяют, а надосадочную жидё кость присоединяют к первоначальному фильтрату. (Л