Способ получения лактогенногогОРМОНА Советский патент 1981 года по МПК A61K38/22 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛАКТОГЕННОГО ГОРМОНА

; Изобретение относится к химико-фар мацевтичёской промышленности и касается йолучения лекарственных средств, которые могут быть применены в медицинской прак тике для стимуляции .лактадиа у рожениц страдающих гипогалактией.

Известен способ получения лактогеиного гормона путем растворения ацетонированного лорошка из гипофизов крупного рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диализом против ацетатного буфера н центрифугированием (1J.

Однако известный способ длителен (12- 14-сут), трудоемок (более 30 операций) и лбеспечивает недостаточно высокий выход .лактогенного гормона (1500-3000 ед/кг) с активностью в 10 раз ниже, чем исходиы{| гормон.

Цель изобретения - повышение активности, увеличение выхода целевого продукта и упрощение процесса.

Указанная цель достигается тем, что л а ктогенный гормон получают путем растворе ня ацетонированного порошка из гипофизов крупного рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде. Диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диализом против . ацетатного буфера н центрифугированием, при этом осадок после высаливания растворяют в воде при рН 8,0-8,2, диализуют против фосфатного буфера с рН 7,1-7,3, надосадочную жидкость фильтруют через кизельгур и затем диализуют . против ацетатн Я-о буфера с рН 5,1-5,3.

Способ осуществляют следующим образом.

ОсадЬк (высол) сырца лактогенного гормона (ЛТГ) растВсфяют в воде при рН 8,0-8,2, а нерастворимую часть отделяют центрифугированием. Раствор помещают в целлофановые мещки и диализуют против 0,4-0,7 молярного фосфатного буфера с рН 7,1-7,3 до. полного, отделення балластных веществ (ГО-40ч). Выпавший осадок отделяют центрифугированием, а надосадочnyfo жидкость фильтруют через слой кйзель-. гура (0 5-2см).

Прозрачный раствор помещают в целлофановые мешки н диалнзуют против D,05-0,2 молярного ацетатного буфера с рН 5,1-5,3 в течение 18-24 ч. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде, доводят значение рН до S и лнофилизуют. Выход лактогенного гормона J5000-20000ЕД из 1 кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота. Активность гормона 15-20ЕД/МГ. При электрофорезе в полнакриламидном геле обнаруживаются 3 основные полосы, характерные для ЛТГ. Пример I. Берут 50 г кислого ацетонированиого порошка, полученного из 4кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в 2л О, I н раствора уксусной кислоты и к раствору при перемешивании добавляют 130мл насыщенного раствора хлористого натрия. Осадку дают сформироваться в течение 2ч при 5°С, затем центрифугируют. Надосадочную жидкость используют для получения кортикотропина, а осадок растворяют в воде при рН 8,0. Полученный раствор заливают в целлофановые мешки и диализуют в течение 24 ч против Юл 0,015м фосфатного буфера, содержащего 0,5 моля хлористого натрия, рН буфера 7,3. Образовавшийся в процессе диализа осадок отделяют центрифугированием, Надосадочную жидкость фильтруют через слой кизельгура толш,иной 2см. до получения прозрачного раствора. Полученный раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против 0,1 М натрийацетатного буфера с рН 5,3 в течение 18ч при 5°С. Выпавший в гфвцееее диализа осадок ЛТГ отделяют центрифугированием, растворяют в воде рМ и л«офилизуют. Вес порошка 3,2 г пр« а«;тивностн 20,5 ЕД/мг Пример 2. Действуя анал&тчно приме| у. 1, осадок растворяют в воде при рН 8,2j а получентный раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против фосфатного буфера с рН 7,1. Образовавшийся осадок отделяют, а надосадочную жидкость фильтруют через слой кизельгура толщиной 0,5 см. Процеес фильтрации повторяют до получения прозрачного растввра. Получ й«ы« таким образам раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против ацетатного буфера с рН 5,1 в течение 24 ч при 2°С. Образовавшийся осадок ЛТГ отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу при .температуре не выше 45°С. Вес порошка 5,5 г при активности 16,0 ЕД/мг. Пример 3. 100 г кислого ацетоннрованно1-0 порошка, полученного из 5кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в 5л дистиллированной воды н 2 fi раствором соляной кислоты. рН в pacTiiope доводят до 2,8-3,0. К раствору при перемешивании добавляют 325мл на: сьиценного раствора хлористого натрия 11 отстаивают при температуре 2-8 в иие 3-4ч. Выпавший осадок отделяют центрифугированием и вновь растворяют в 2,5л воды, доводя значение рН до 2,0-2,5. Нерастворимую часть отделяют центрифугированием, а к надосадочной жидкости добавляют 160мл насышенного раствора хлористого натрия. Через 1-2ч осадок собирают центрифугированием, суспендируют в воде и значение рН доводят до 7,5-8,5. Объем полученного раствора 1 л. Его Заливают i двойные целлофановые мешки и диализуют против 8л фосфатного буфера с рН 6,4-6,8 в течение 36ч.. Выпавший после диализа осадок отделяют центрифугированием и отбрасывают, а Надосадочную жидкость помещают в двойные целлофановые мешки н диализуют против 8л ацетатного буфера с рН 5,4-5,8 в течение 36 ч. Выпавший после диализа осадок отделяют центрифугированием, суспендируют в 500 мл воды, значение рН доводят до 3,0 добавлением соляной кислоты. Туда же добавляют 33мл насышенного раствора хлористого натрия. Выпавший осадок лактогенного гормона вновь растворяют в дистиллированной воде при рН 7,5-8,5, а полученный раствор помещают в целлофановые мешки и диалнзуют против фосфатного буфера в течение 24ч. Осадо к отделяют центрифугированием, а Надосадочную жидкость йомешаЮт в целлофановые мешки и диализуюг против ацетатного буфера в течение 24 ч. Образовавшийся осадок лактогенного гормона отделяют центрифугированием, промывают ацетоном н сушат до полного удаления ацетона. Вес сухого порошка лактогенного гормона 9,2 г, а его биологическая активность 0,8 ЕД/мг. Выход, из I кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота составляет 1472 ЕД. , Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет повысить удельную активность ЛТГ с 0,5-1,0 ЕД/мг до 15- 20 ЕД/мг и качество за &чет искл.ючения примесей балластных белков, что резко повышает эффективность препарата при его медицинском применении, увеличить выход с 1500-3000 ЕД/кг до 15000-20000 ЕД/кг, а также упростить технологический процесс за счет сокращения числа операций с 30 до 15, что в 3-4 раза сокращает продолжительность процесса. Формула изобретения Способ получения лактогенного гормона путем растворения ацетонированного порошка из гипофизов крупного рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диализом против ацетатного буфера и цент-.

5 8332566

рйфугированием, отличающийСА teM, что, и затем диализуют против ацетатного

с целью повышения активности, увеличениябуфера с рН 5,1-5,3.

Bjbt&oAa целевого продукта и упрощения про-Источники информации,

цесса, осадок после высйливання раство-принятые во внимание при экспертизе

в воде при рН 8Д-8,2 диалнзуют прО. I- Справочник по производству органотнв аодтатного буфера с рН 7,1-7,3 над-5 препаратов. Под ред. Турова В. А. и др.

осадочную йсидкйсть фильт руют через кнзелиМ., «Медицина, 1970, с. 59.