Способ получения пролактина Советский патент 1982 года по МПК A61K38/22 

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОЛАКТИНА

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения лекарственных средст из сырья животного происхождения. . Известен способ получения пролактина, включающий экстракцию гипофизов свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного рас твора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, элюирование гормона и выделение целевого продукта flj. Однако известный способ трудоемок (250 ч) и не обеспечивает получение гормона достаточно высокой активности (30 ЕД/мг). Целью изобретения является упрощё ние технологического процесса и повы шение активностИ целевого продукта. Поставленная цель достигается тем что в способе получения пролактина включающем экстракцию гипофизов свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца-гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного раствора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, элюирование гормона и выделение целевого продукта, к раствору сырца гормона добавляют уксусную кислоту до рН 5,0-5,5, образовавшийся осадок после его отделения растворяют в воде, к полученному раствору добавляют водный раствор аммиака до рН 7,0-8,0, очистку на ДЭАЭ-целлюлозе проводят из 0,25 ного раствора ацетата аммония, а элюирование осуществляют 0,5%-ным раствором ацетата аммония, в полученном элюате устанавливают рН ,5 и полученный осадок промывают спиртом. Пример. 100 г кислого аце.тонированного порошка, полученного из 3,6 кг гипофизов свиней, растворяют в

Id л 0,6%-ного раствора уксусной кислоты и к раствору добавляют около 100 мл 12 -ного водного раствора аммиака до рН . Осадку дают сформироваться в течение 2 ч при комнатной температуре, затем надосадочную жидкость декантируют, осадок отделяют центрифугированием. Надосадочн1 ю жидкость используют для получения кортикотропина (АКТГ), а осадок раство.ряют в воде при рН 9,0-9,5 (добавляя раствор аммиака), затем устанавливают рН 7,0 (добавляя уксусную кислоту)и оставляют для формирования осадка на 10-12 ч. Осадок балластных белков отделяют центрифугированием, а в растворе устанавливают рН 5,0 (прибавлением уксусной кислоты). Через 10-12 ч осадок отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуумсушильном шкафу, Выход сырца составляет 10г.2 г сырца растворяют в 0,1 л воды при рН 9,5, затем устанавливают рН 7,7 (прибавлением уксусной кислоты) и отделяют осадок балластных белков. В растворе устанавливают рН 5,0 (уксусной кислотой), выпавший осадок отделяют, растворяют в 1,0 л 0,25%-ного раствора ацетата аммония при рН 8,2. Раствор пропускают через колонку, наполненную 10 мл ДЭАЭ-целлюлозы. По окончании сорбции колонку промывают 20 мл 0,25%-ного раствора ацетата аммония (рН 8,2), а затем 70 мл 0,5%ного раствора ацетана аммония с рН 8,3. Во фракции, элюирующейся 0, раствором, доводят рН до 5,0 (уксусной кислотой) и оставляют для формирования осадка на 10 ч при 5 С. Полученный осадок промывают спиртом, ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Активность полученного пролак- тина АО ЕД/мг.

При1у|ер2. 100 г кислого ацето нированного порошка, полученного из 6,7 кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в Юл 0,6 -ного раствора уксусной кислоты и к раствору добавляют около 120 мл 2 ного водного раствора аммиака до рН 5,5. Осадку дают сформироваться в течение 2 ч при комнатной температуре, затем надосадочную жидкость декантируют,, осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость используют для получения кортикотропина, а осадок растворяют в воде при рН 9,0-9,5,

затем устанавливают рН 7,5 и оставляют для формирования осадка на 10-12 ч Осадок балластных белков отделяют центрифугированием, а в растворе устанавливают рН 5,5 (прибавлением уксусной кислоты). Через 10-12 ч осадок отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Выход сырца составляет 10 г,

2 г сырца растворяют в О,Г л воды при рН 9,5, затем устанавливают рН 7,5 и отделяют осадок балластных белков. В растворе устанавливают рН 5,5, выпавший осадок отделяют, растворяют в 1,0 л 0,25 -ного раствора ацетата аммония (рН 8,2), затем пропускают через колонку, наполненную 10 мл ДЭАЭцеллюлозы. По окончании сорбции колонку промывают 20 мл 0,25 -ного раствора ацетата аммония, а затем 70 мл 0,5 ного раствора ацетата аммония с рН 8,2. Во фракции, элюирующейся 0,5%ным раствором, доводят рН до 5,5 (уксусной кислотой) и оставляют для формирования осадка на 10 ч при . Полученный осадок промывают спиртом, ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Активность полученного пролактина составляет 37 ЕД/мг.

Предлагаемый способ позволяет упростить технологический процесс за счет исключения таких операций как гельхроматография, диализ, лиофильная сушка и сократить продолжительность процесса с 250 ч до Во ч, а также повысить в 1,5-2 раза активность препарата.

Высокая степень чистоты препарата позволяет расширить спектр его применения в медицине.

Формула изобретения

. Способ получения пролактина, включающий экстракцию гипофиза свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного раствора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЭАЗ-целлюлозе, элюирование гормона и .выделение целевого пpoдyкta, отличающийся тем что, с целью упрощения технологического процесса и повышения активности целевого продукта, к раствору сырца гормона добавляют уксусную кислоту до рН 5,0-5,5, образовавшийся осадок после его отделения растворяют в воде, к полученному раствору добавляют вод5Э7 3 2

ный раствор аммиака до рН ,О,и полученный осадок промывают спирочистку на ДЭАЭ-целлюлозе проводят изтом.

0, раствора ацетата аммония, Источникиинформации,

а элюирование осуществляют 0,5%нымпринятые во внимание при экспертизе раствором ацетата аммония, в получен- 5 1. Патент Англии М 1083855

ном элюате устанавливают рН 5,0-5,5 .кл. А 5 В, опублик. 1967 (прототип)