Способ получения антитоксической сыворотки Советский патент 1984 года по МПК A61K39/02 A61K39/40 

ел

оо

I ; ;о|кте1111е относится к медицине и K;I;;i(4cii iipon:u«xuTna антитоксической сыI.opoTKii, 11)имеияс и)й для лечения и про(;)И. laixTTiKit aiiavpooHiJx ин((секций.

1 l.ii-iocicii способ получения антитокснЧССКПП С: |н;:пп: hii путем ИММуНИЗаЦИИ ,10iiiauni ).: :г-| 101) с гк)следук)1ипм выде. UMiiJCM г,:;:;, Ml крогш 1 .

Одпам- ь-.licCTiibiii способ не дает поз.мо/киосii гоЧЮ судить об иммунологичеcK(;ii 11|1Иг()Д11ости животных для 11ол чеиия иысокоактиниой аитпгокснческой CIJIBOротки.

Ue,u изобретения и()ын1еиие активнос ги iie.ieiioio продукта.

Указанная цель достигается гем, что cor.iacHO способу ио.|учеп:.-1я антитоксической с1Л15оротки путем иммунизации .тошадей-иродуцентов и взятия крови е иос;|едуощим 151лде,1еиием сывороТчИ крови, в крови :1родуцеитов оиреде,1Я1О сочсржание аутоаитите. к . изату )итроии1ов и иммунизации иодверга.ют лои1адей-ирод -центов, у ко торых отсутствуют аугоантите.К) или степень иоложите.1ьиой )еакц|-и1 и кроирецинитации ио анье составляет 1 2 балла.

Способ осуиачТБЛятся следующим образом.

Ма местах заготовок у ло иадей перед грунди.ммуиизацией определяют содержание в крови аутоантител ио отио1иеиию к .ш зату аутоэритроцитов и ирогиозируют в ирод цеиты тех животных, у которых иеследуемые а тоант1 тела отсутст1 уют, а в случае ыявлеиия уровень их не иревьппаег .чвух баллов li реакции микроирецииитации по Уаиье в модификации Н. Н. Клемиарекой.

Пример 1. Прогиозироваиие продуцеитов аититоксичеекой сыворотки, например, лошадей осушеств.чяют в два этапа.

На первом этапе на месте загото15ки у .тошади, отобранной ио иоказателя.м (j.ui.inологической иолноцениоети, берут 5 мл крови, добавляют 1 мл 5 /о-иого )аетвора иитрата натрия. Полученную смесь ти1ате,ть. но иереме1иивают и иентри(|п при 1000 об/мин в течение 40 мин. Плазму отсас1 1вак)т в отдельную пробирку и испо.тьзуют для определения в ней аутоантител, а эрнтроциты, остав1лиеся в пробирке юс,ie отсасывания илаз.мы, трижды промывают изотои.и.ески.м раствором иоваренноГ со.чи. Ilc.ie каждого иромываш1я еусиензию эритроцитов центрифугируют при 1000 об/мин в тече1П1е 15 мин. К иромыт1)1м эритроцитам .юбаи.чякуг дисти,1лироваир1ую воду де) исходно D обчл.ма крови и центрифугируют 1.5 мин при 3000 об/мии, надосадочную жидкосч ь О сасывак)т и исио.тьзуют в качестве аптшспа.

Па втором этане оеушеетв.чяют BI Iявление аутоаитите,л в плазме. /1ля этого бефут 1,7 м,1 п.чазмы крови исследуемого живг)Т101о и 1,7 м,1 дистиллированной воды ;к()пт|голЫ, .чохкмцают в кюветы прибора

Ф К11-- о7 и измеряют цер1«)иача.чьцук) (ь.ютиять Затем в кюветы с и,чазм(п1 виосяч i) I мл аити1еиа (лизат ау гс эритрюгиггов), ;:ач|;пая е разведения I:l536(i с пос, 1едуюцим разведеиием в 2 раза, 1:е;)) стеклянной палочко и через 1,5-2 .мип после каждого разведения оиредс.чнюч вс.;ичину отч1ческой плотности. Пз по.чхчсм)иых ци(})ровых даииых стр(;ят график, па кочором изображаечся ход измеиепии оитичсекой п,чотпос1ч; з : ависи.мос1 и оч содержания в п,ча:5мс ау|оа1ггител, оиреде.чеи.чое со()тно1ление которьгх вызьшает образование микропреципитата, ио котором}, и прогноз ИРУ к)ч- и по логическую реактивность „чошади как п|11}д Ч1ента.

Оценку рс:;ульга103 реакции осччцеств,1ян)т по чеч 1)1рехба,ч.чы1ои системе (г

г, реакции мик||опре1и1пптации по Уанье в л1;).чификации: П. П. К.чемиарской

Пример 2. Для оценки иммунологиче ;кой реактивиоети животиых по показате/1ям реакции ц-1крои|)ецицитаич1и были (.Г)|нуть1 из чеиик) 105 ,чо1падей - будущих до110)01 п Ю1Ч1вост(),чбнячпой сыворотки. Па основании показателей содержания аутоагтиче.ч в кроги: ;io отноп еиию в лизату ауч-оэ|)итроцитов 50 живсгтых были раепреде,чеиы на две г униы.

К иервой {о1п 1тной) группе отнесены лошади в к()лич(стве 33 голов, у кочорых исследуем 1з1с аутоантитела отсутствуют, а в случае выявления уровень их не превышает двух бал,чов в реакции микроирецииитации ио Уанье в модификации П. М, Кле п1арекой. Средний уровень аутоантите;1ообразования в дангЮЙ 0,5 ба,ч,ча. Остальные животные (17 голов), у которых индив11,чуальиые ноказатели содержания аучоантител ио отношению к лизату ауэтоэричроцитов оцениваются в 3- 4 ба.ч.ча и средний иоказатель реакции .микропрецииитации по Уанье 3,9 ба,тла, включены в нервую контрольную группу.

Вторую к()1ггрол1)Пую гругшу с;;стаз,чяют 55 ло1надей, отобранны.х для ае.чсч производства 1фочч1восто;|бнячной )о ;к;| n.:i местах заготовки по их физио.чогическои 1К)лнои.енпосчч1 с(Л,часно чребова1-П:я : |Нгламента без определения палич1;я а то;;пт;;тел.

Всесчоронний анализ мате|);1;-.Ч1)Н1л ;;: рат и выхода продукции при Гач.1ичнь1х с;;особах отба}К , в 1:род ча-пты пр(.тивостолбнячной сыворотки .aer, что на непроиз ;одительный Г1ери:;д с(/ле::/ь;;:ния по гре.чллгаел:( i; n::i;cc4но.му способам затрачиваечся 1:1.()лич:.к(;н()е количество времерш. Паил епь:Ц1е i-:i,ii:4cc:во неироизводите,чьпого BIJC. затр,-: ;вается при отборе .чошадей i; (Н)ч ч:с;;лч но предла1аемому сиособ oiocpa Hi ди, Ю известному способу времени ii;i Чсч оговку лошадей в иродуце1 ЧЧ)1 зать::11;ваетс большев средием 12) .ч;:.

Сравнпр.пч 11:5учение иммунологической «Г1родукти1и1(1п и лошадей, отобраипы.х но способам в продуценты иротивостолбиячиой сыворотки, установлено явное нреимунюство предлагаемого снособа но сравнению с известным.

Сравнительная характеристика сиособов отбора .ло1надей в нродуценты нротивостолбнячно сыворотки приведсна в таблице.

По заверн1ени1О подготовительного цикла гинериммунизации из состава опытной грунны (животные ио предлагаемому способу отобраны по низкому показателю аутоантителообразования) переведено в продуценты 32 лошади, что составляет 96%. Вместе с тем в первой контрольной группе вы.ход в продуценты составляет всего 41% (7 лошадей) и среди животных (вторая контрольная группа), отобранных в хозяйствах по известному способу, этот показатель составляет 76%.

Использование предлагаемого способа отбора лошадей для целей сывороточного производства показывает, что гипериммупизация в подготовительном периоде резко стимулирует антитоксинобразование у лошадей с минимальным содержанием в крови аутоантител. Так, средний титр столбнячного антитоксина по предлагаемому способу 952 МЕ/мл. В контрольных группах (первой и второй) накопление специфических антител протекает менее интенсивно и составляет соответственно 394 и 594 МЕ/мл.

При рассмотрении динамики накопления титра столбнячного антитоксина в период последукмцей гипериммунизации по предлагаемому и известному способам отбора лошадей в продуценты его показатели характеризуются все улучшающимся качеством полученных сывороток - до 1059 МЕ/мл по предлагаемому способу на

десятом цикле. Титр антитоксина в группе ,к), отобранных но известному снособу, в течение десяти циклов находился на уровне 594-762 МЕ/мл.

В последуюн их нроизводственных циклах гипериммунизации также отмечается более высокое содержание столбнячного антитоксина в группе лошадей, отобранных в продуценты по низкому уровню аутоантителообразования по сравнению с животными, которые поставлены в нродуценты но известному снособу.

Таким образом, иммунологическую реактивность или перспективность лошадей (как будущих продуцентов противостолбнячной сыворотки) можно оценивать по количественному содержанию аутоантител в крови на местах их заготовки и к перспективным продуцентам относить тех животных, у которых аутоантитела по отношению к лизату аутоэритроцптов отсутствуют или их содержание не превышает двух баллов в реакции микроиреципитации по Уанье в модификации И. Н. Клемиарской.

Предложенный снособ, разработанный на лошадях-продуцентах прот 1востолбнячHofi ciiiHOpoTKn, бы,-1 примепеп и на .юшадеи, предназначепп1 1 для пммунпзаЦНИ бОТуЛПНО1и)1М ТОКСННОМ rniU: 1..

Таким образом. п)ел. ;п ;КчыГ ciidcoo мо жст быть iicno.ih.iOHHii I ); :(:;-г;к1на1;1 И

продуцентов .НЛО ; и. l Ч1:чС1;Ч(Ч-КМ

C)i вороток.

1 IcilO.lb Olilih-:; Г1. (;j ClU4)n,-.

ПО сравпспик) г |;;1чт; ii,: |)Гнч-111ЧН1 ;1С| уве.;нч1.ч1по ИИ 2} .ь , Hi.i( . :о11;; дс|| is

ПрОДуШМГП-:.

П) vViU; .-(.;i;;i . di i-; ;: li ii;,ie Ipil.ialae iы OIXH-UOCM, ;ii) .: jpi:iennK) нодготор.ительного uitK.ia I, i-.a.uiH имеют средliiiii тигр auTii ()(:1 ,54 .1. вмест.ч 520 ME/M.r

66

33 )

33

17

2. Регламентный

55

(вторая контрольнаягруппа)

96

952

32

111

394

120

41

76

594

42

120

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТОКСИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ путем иммунизации лошадей-продуцентов и взятия крови с последующим выделением сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, в крови продуцентов определяют содержание аутоантител к лизату эритроцитов и иммунизации подвергают лошадейпродуцентов, у которых отсутствуют ауто-антитела или степень положительной реакции микропреципитации по Уанье составляет 1-2 балла.