Способ получения ферментного препарата нигедазы Советский патент 1984 года по МПК C12N9/18 

Изобретение относится,к ферментной промьшшенности, технологии получения растительных ферментных препаратов, в частности к получению из се мян чернушки дамасской ((NigelEa damaecena L.) растительного ферментноf-o препарата липолитического действи (нйгедаза), и может найти применение как в медицине, так и в других отрас лях (пищевая, фармацевтическая промьшшенность, сельское хозяйство, научно-исследовательские работы по био химии) . Известны способы получения фермен тов липолитического действия из сьгрь животного происхождения С Наиболее близким к предлагаемому .является способ получения ферментов препарата нигедазы из семян чернушки дамасской (Nigetia damascena L), согласно которому сухие семена измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют водным раствором аммиака (с рН 9-10), изменяют рН от щелочного до кислого значения и наоборот, удаляют баластные белки центрифугированием, .осаждают липазу сульфатом аммония, растворяют осадок, диализируют и лиофилизируют. Выход препарата липолитического действия, получен ного этим методом, составляет 7%, ли политическая активность - 55 000 ед/г (по оливковому маслу) С 23. Однако указанный способ характеризуется недостаточно высокой активностью препарата. Целью изобретения является увеличение активности препарата. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения ферментного препарата нигедазы из семян чернушки дамасской (Nigel1а damascend. L) путем измельчения сырья, обработки его ацетоном и экстракции фермента из полученного ацетонового порошка водным раствором аммиака с последующей лиофилизацией целевого про дукта, семена предварительно вьщерживают при 35-39 С в воде при соотношении 1:(2-3) в течение суток. При экстракции используют водный раствор аммиака с рН 9,5-11,5. На фиг.1 приведена зависимость липолитической активности от темпера туры активации и влажности; на фнг,2 то же, от величины рН экстрагента. Липолитическая активность конечного продукта значительно возрастает при введении в технологическую схему стадии активации, заключающейся в создании оптимальных условий температуры и влажности. Результаты исследований показали, что таковыми являются- температура 35-39С и влажность 200-300% (фиг.1). Применение экстрагирующего агента с рН 9,5-11,5, дистиллированной воды, подщелоченной аммиаком, способствует повышению липолитической активности (фиг.2). Предложенный способ позволяет увеличить липолитическую активность препарата в 2-3 раза. Нйгедаза представляет .собой порошок темно-бурого цвета, растворимый в воде, обладает выраженным липолитическим действием, которое характеризуется способностью расщеплять природные жиры и масла (кукурузное, подсолнечное. Хлопковое, абрикосовое, льняное, оливковое масло и свиной жир). При 200% влажности липолитическая активность составляет (фиг,1) 110 тыс.ед./г, что соответствует требованиям нормативно-технической документации. Повышение влажности свыше 300% нецелесообразно, так как далее липолитическая активность находится на одном уровне с липолитической активностью при влажности 300%. Экстракцию ферментного препарата можно проводить экстрагентом с pH9s,511,5,так как в интервале этих величин липолитическая активность нигедазы составляет 115-110 тыс,ед/г с оптимумом при рН 10-11 (140-150 тыс.ед/г). Пример 1. 100 г воздушно-сухих семян чернушки дамасской заливают водой в соотношении 1:2,0 (200% влаги) и оставляют на сутки в термостате при той же температуре для активизации. По истечении суток избыточную влагу удаляют, а активированные семена измельчают на вальцах. Измельченные семена обрабатывают охлажденным ацетоном в соотношении 1:3 (по объему) в течение 30 мин. Ацетон удаляют. Из измельченных семян экстрагируют нигедазу дистиллированной водой, подщелоченной аммиаком до рН 9,5 (по весу). Продолжительность активации 30 мин. Полученное извлечение, содержащее нигедазу, отделяют от шрота центрифугированием, стабилизируют сахаро

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА НИГЕДАЗЫ из семян /7ff /Sff/30А 1 ffO, {{ 90il 70. 50чернушки дамасской (NigeE a damasceena L.) путем измельчения сырья,обработки его ацетоном и экстракции фермента из полученного ацетонового порошка водным раствором аммиака с по. следующей лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности препарата, семена предварительно выдерживают при 35-39 С в воде при соотношении 1: