Способ получения ферментных препаратов Советский патент 1984 года по МПК A61K38/46 

Изобретение относится к производ ству лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике, и касается способа получения препаратов из животного сырья. Известен способ получения ферме та лидазы из семенников крупного рогатого скота путем автолиза ткани семенников, обработки лизата ацетон растворения осадка в воде и пригото ления лекарственной формы препарата .1 . Известен также способ получения фермента ронидазы из семенников убойных животных путем экстракции сырья 0,1 н. водным раствором уксусной кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жмыха и последующего высушивания 2 . По известным способам получения ферментов лидазы и ронидазы в качест ве исходного сырья берут семенники крупного рогатого скота, а остающийс после экстракции жмых, являющийся действующим началом препарата ронидаза, не используют, а утилизируют. Известен также способ получения лидазы из семенников убойных животных, включающий измельчение семенников, экстракцию уксусной кислотой, отделение жмыха от экстракта с последующим выделением лидазы из экстракта путем осаждения ацетоном, филь рации, растворения осадка, вторичной фильтрации, переосаждения в ацетон, промывки и сушки ацетоном, растворе.ния и приготовления лекарственной формы препарата sj . Однако жмых, остающийся после экстракции семенников и содержапщй действующее начало препарата ронидаз утилизируют, а не используют. Кроме того, указанный способ получения лидазы длителен (до 72 ч). Целью изобретения являются более полное использование сырья и рас ширение ассортимента получаемых ферментных препаратов, а также инте сификация процесса. Указанная цель,достигается тем, что согласно способу получения ферментных препаратов, из семенников убойных животных, включающему измельчение семенников, экстракцию и отделение жмыха с последующим выделением целевого продукта, экстракцию проводят дистиллированной водой, из полученного экстракта выделяют фермент лидазу путем подкисления до рН 4,05 - 4,12 и термообработки при 4043 С с последующим выделением ферментг та хроматографией на ионообменнике, а из жмыха, полученного после экстракции, вьщеляют фермент ронидазу. Выделение ронидазы из жмыха осущеставляют повторным экстрагированием раствором уксусной-кислоты при рН 4,8-5 .с последующим отделением экстракта, его концентрированием, стерильной фильтрацией и сушкой. При хроматографическом выделении лидазы сорбцию обычна проводят на катионите КУ-30-IOO М при рН 4,124,2, а десорбцию при рН 7,2-7,3. Способ позволяет одновременно извлечь два фермента из одной порции сырья, ревшть проблему создания безотходной технологии, тем самым интенсифицировав процесс за счет рационального использования сырья, сокращения и упрощения процесса выделения лидазы - одного из получаемых продуктов, ускорить процесс в целом.i Технологическая схема предлагаемого способа получения ферментных препаратов из семенников убойных ивотных может быть представлена в ледующем виде: Семенники крупного и мелкого рогатого скота (замороженные при ( -18 )- (-20°С) Измельчение на дробилке Измельчение на куттере Экстракция (рН 6,8-7,2, жидкостньй коэффициент 1:1, время 28-32 мин при постоянном перемешивании, экстрагентг дистиллированная вода) Отделение жмыха Экстракт Подкисление экстракта уксусной кислоты до рН 4,05 - 4,.12 Прогрев экстракта до 40-43°С не более 25 мИн при постоянном перемешиванииОхлаждение с последующим отделением осадка Сорбция осветленного экстракта на ионообменной смоле (рН 4,12-4,2) Отделение балластных веществ промыв кой смолы ацетоном и ацетатньм буфе ным раствором Отделение фермента лидазы промывкой подщелоченным раствором (рН 7,27,3) дистиллированной воды Приготовление лекарственной формы препарата лидаза Экстракция (раствором уксусной кислоты рН 4,8-5,0, жидкостный коэффициент 1:0,3, время 2-2,5 ч) Отделение мезги Концентрирование Стериальная фильтрация Сушка Приготовление лекарственной формы препарата ронидаза

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРЪЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ из семенников убойных животных, включающий измельчение семенников, экстракцию и отделение жмыха с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а-ю щ и и с я тем, что, с целью более полного использования сырья и расширения- ассортимента получаемых ферментных препаратов, а также интенсификации процесса, экстракцию проводят дистиллированной водой, из по- . лученного экстракта выделяют фермент лидазу путем подкислеиия до рН 4,05 -4,12 и термообработки при 40-43 С с последующим выделением фермента хроматографией на ионообменникё, а из жмыха, полученного после экстракции, выделяют фермент ронидазу. . , 2, Способ по п.I , отличающийся тем, что выделение ронидазы из жмыха осуществляют повторным экстрагированием раствором уксусной кислоты при рН 4,8 - 5 с последующим отделением экстракта, его центрированием, стерильной фильтра(Л цией и сушкой. cz 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при хромато1графическом выделении лидазы сорбцию осуществляют на катионите КУ-30100 М при рН 4,12 - 4,2, а десорбцию о при рН 7,2-7,3.. X) о 4;

Длительность этого процесса 36 ч. Пример 1. 100 кг замороженных семенников срупного/и мелкого рогатого скота измельчают на дробилке (куски размером до 50 мм) и затем на куттере (размер частиц не более 1 мм )в холодильной камере при температуре не выше - , переносят сырье в реактор (емкостью 250 л, открытого типа, с рубашкой для подогрева, нижним спуском, мешалкой якорного типа со скоростью вращения 60-70 об/мин) , заливают 100 л дистиллированной воды, смесь прогревают и перемешивают для равномерного распределения частиц сырья в экстрагенте (5 - 10 мин) , отмечают начало экстракции и регистрируют температуру смеси (0-2°С), через 28 мин выключают мешалку и прдают смесь на сепаратор типа Vestphalea или W Laval, после отделения жмыха экстракт переносят в емкост(на 250 л, открытого типа, с рубашкой для быстрого подогрева и охлаждения, с нижним спуском) , добавляют 800 мл уксусной кислоты и подогревают при постоянном перемешиванииi температуру доводят до 40 С не более 25 мин и сразу охлаждают до 8-10. С в течение 1,5-2 ч, а затем экстракт фильтруют на воронках с бумажными фильтрами и подают на колонку, заполненную смолой КУ- 30-100 М в течение 1ч, после чего колонку промывают 350 л ацетона (1,5 ч) и 40 л-ацетатного буфера (0,2 н. раствор) в течение 0,5 ч (водный раствор ацетона подают на регенерацию), а фермент лидазу отделяют промывкой смолы 50 л дистиллированной воды, подщелоченной водным раствором аммиака до рН 7,2, в течение 1,5 ч, полученный раствор фермента (элюат) передают на стерильную фильтрацию, разливают во флаконы (количество раствора фермента во флаконе определяется после выявления специфической активности элюата), осуществляют сублимационную сушку, укупоривают и маркируют флаконы. При этом на выход лидазы 310-320 флаконов из 1 кг сырья с активностью .64 усл.ед. в I флаконе. Оставшийся после экстракции лидазы жмых (количество 33-34 кг) переносят в реактор емкостью 150 л, открытого типа, с якорной мешалкой (120-130 об/мин) и нижним спуском, заливают 100 л раствора уксусной кислоты (450 мл CHjCOOH на 100 л воды), рН смеси при этом должно составлять 4,8 (корректировку рН производят уксусной кислотой или водным раствором аммиака) , экстракцию проводят при непрерывном перемешивании и 18-20 с, через 2 ч смесь сепарируют (сепаратор Vest