4-(3-Метилпиразолил-4)-2,6-диметил-3,5-диэтоксикарбонил-1,4-дигидропиридин ,об ладающий гепатопротекторной активностью Советский патент 1986 года по МПК C07D211/90 A61K31/4422 A61K31/4427 A61P1/16 C07D401/02 

Изобретение относится к новым химическим соединениям, конкретно к 4-(з -метилпиразолил-4)-2,6-ди метшт-З,5-диэтоксикарбонил-1,4дигидропиридину формулы Г Н5С200Сч,х% СООСгН5 обладающему гепатопротекторной ак тивностью. Указанное свойство позволяет предполагать возможность применения его в медицине. .Известен 2,6-диметил-3,5-диэтоксшсарбонил-1,4-дигидропиридин .(этидин), обладающий гепатопротек ной активностью. Наиболее близкими по структуре К предлагаемому соединению являют 4-имидазолил и 4-тиазолил-3,5-диал коксикарбонил-,4-дигидропиридины обладают кардиоваскулярной активйостью. Цель изобретения - изыскание в ряду 1,4-дигидропиридинов новых веществ, обладающих высокой гепато лротекторной активностью. Цель достигается описываемым 4-(3-метилпиразолил-4)-2,6-диметил-3,5-дизто ссикарбонил-1 ,4дигвдропиридином приведенной форму лы 1, обладающим гепатопротекторно активностью. Указанное соединение получают по известной методике конденсацией этилового эфира ацето уксусной кислоты с З-метил-4-формиппиразолом и аммиаком в подходящем органическом растворителе при повьш1енной температуре. Исходный З-метил-4-формилпиразо получают из семикарбазона ацетона Пример. 4-(3 -Метилпиразолил-4 )-2,6-диметил-3,5-диэтоксикарбонил-1,4-дигидропиридин (1). 3 г (0,03 моль) З-метил-4-форми пиразола, 7,8 г ( моль) этилового эфира ацетоуксусной кислоть и 7,5 г (0,225 моль) 25%-ного водн го аммиака растворяют в 20 мл эта57 . нола и кипятят 5 ч. Охлаждают, фильтруют, осадок промывают эфиром и кристаллизуют из.50% этанола. Получают 2,25 г (25%) бесцветных кристаллов соединения I с т.пл. 214-215 С. Найдено,%: С 60,9, Н 6,9,N 12,9. Вычислено,%: С 61,2, Н 7,0, N 12,6. C,H,,N,04. УФ-спектр (в ) ,/ „pjy , нм (igE): 245 (4,25), 270 (3,98), 357 (3,90). ИК-спектр (в нуйоле), (% поглощения): 3355 (84), 3260 (72), 1698 (91), 1680 (91), 1630 (83). Спектр ПМР (в (СН}) SO-dg), S, м.д.: 1,15 (6 Н, т, pCHjCHj), 2,13 (6 Н, с, 2,6-СН), 2,22 (3 Н, с, З-CHj), 4,00 (4Н, KB, осилен 3), 4,68 (1 Н, с, 4-Н), 7,04 (1 Н, с, 5-Н), 7,71 (1 Н, с, NH пиридина), 12,0 (1 Н, с, NH пиразола) . Гепатопротекторная активность соединения 1 изучена в опытах in vitro и in vivo на модели поражения печени крыс, вызванного четыреххлористым углеродом. В качестве npe.f паратов сравнения в опытах in vitro использовали глутатион, витамин Е, цистеамин и этидии, в опытах in vivo - витамин Е и зтидин. Опыты проводили на белых беспородных крысах - самцах массой 180-220 г. В опытах in vitro гомогенизировали печень крыс, полученный гомогенат центрифугировали и супернатаит в количестве, содержащем 3,0 мг белка, вносили в инкубационные сосуды. Во все пробы добавляли 6,2 мкМ НАДФН. В отдельные пробы вносили ССЦ (Ю мкм) и одно из исследуемых веществ.: .глутатион - 0,4 мкМ, витамин Е, цистеамин, этидин и соединение 1 10 мкМ. Пробы инкубировали при 37 с в течение 40 мин при перемешивании. Оценку перекисного окисления липидов (пол) проводили путем определения малоиового диальдегида (МДЛ). При добавлении в инкубационную среду ССЦ наблюдалось резкое усиление процессов ПОЛ - количество МДА увеличивалось в 3 раза. Внесение в инкубационную среду, сГодержащую СС1 , исследуемых соединений предотвращало усиление ПОЛ (табл.1). В скобках указано число экспери ментов.

3

в опытах in vivo CCl инъецировали внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл/к в виде 10% раствора в оливковом масле. Исследуемые соединения вводили перорально в виде водной суспензии с добавлением твина-80 в дозе 200 мг/кг дважды - за 1 и 24 ч до .инъекции ССЦ-. Контрольным животнбм вводили 4,5 мл/кг оливкового масла водный раствор твина- 80. Животных забивали декапитацией через 24 ч после введения СС1 .

Через 24 ч после введения ССЦ в сьшоротке крови наблюдается резкое усиление активности апанинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) (табл.2), что указывает на серьезные повреждения печени, связанные с деградацией мембран гепатоцитов. Значительно уменьшается величина коэффициента де Ритиса, отражающего соотношения активности АсАТ и АлАТ, В печени наблюдается уменьшение количества белка и цитохрома Р-450 (табл.З).

./ Применение витамина Е, этидина

/ соединения 1 предотвращает существенное изменение биохимических показателей сыворотки крови. Соединегг:

Действие исследуемых соединений на про оксидантный эффект четыреххлористого углерода в опытах, in vitrot;

Схема эксперимента

25957

ние 1 достоверно снижает уровень активности АлАТ и АсАТ, улучшает коэффициент де Ритиса, а также достоверно препятствует снижению коли5 чества цитохрома Р-450 в печени.

Соединение 1 улучшает большинство

.-..,

биохимических показателей сьш.оротки крови и печени при поражении четыреххлористым углеродом в боль0 шей степени, чем витамин Ей этидин.

Острая токсичность исследована при внутрибрюшинном введении белым мьш1ам-самцам. для соединения I составляет 1350 (1000-1822) мг/кг.

5 Таким образом, выявлено положительное действие соединения I на структурно-функциональные нарушения в печени, вызванные., четыреххлориотым углеродом. По гепатопротектор0 ному действию Соединение I значительно превосходит этидин-соединение того же химического класса.

Низкая токсичность и высокая ге патопротекторная активность 4- (з 5 метилциразолил-4 ) -2,б-диметил3,5-диэтоксикарбошш-1 ,4-дигидропиридина указьгоают на возможность его практического применения в медицине для лечения и профилактики заболеваний печени.

Т а б л и ц а 1

ВДА

М + (Г), нМ/мг белка«мин I

4-

х) Достоверно по отношению к контролю. XX Достоверно по отношению к ССЦ.

В скобках указано число экспериментов,

Активность .сывороточных anakirn- и аспартатвминотраясфераэы через 24 ч после, введения СС1 и предварительного введения нсследзгенлс соединений

я) Достоверно оо отвошйншо к контролю, т) Достоверно по отноагени к CCli .

Содержание белка и цитохрома Р-450 в печени через 24 ч после введения СС14 и предварительного введения исследуемых соединений

Таблиц«2

Таблица 3