ГЕПАТОПРОТЕКТОР Российский патент 2008 года по МПК A61K31/4418 C07D213/04 A61P1/16 

Изобретение предназначено для использования в медицине и касается гепатопротекторных средств, относящихся к группе синтетических антигипоксантов и антиоксидантов.

Из истинных антиоксидантов в терапии заболеваний печени препаратами-лидерами являются лекарственные средства биофлавоноидной природы. К числу наиболее изученных гепатопротекторов относятся эссенциальные фосфолипиды (Бунятян Н.Д., Герасимова О.А., Сахарова Т.С., Яковлева Л.В. Природные антиоксиданты как гепатопротекторы // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1999. - Т.62, №2. - С.64-67; Ушкалова Е.А. Место эссенциальных фосфолипидов в современной медицине // Фарматека. - 2003. - №10. - С.40-47).

Однако эффективность этих препаратов при поражениях печени различной этиологии недостаточно высока, а успешная фармакотерапия поражений печени до сих пор остается трудной задачей (Ушкалова Е.А. Проблемы применения гепатопротекторов // Фарматека. - 2004. - №4. - С.45-55).

Задачей изобретения является повышение эффективности терапии при поражениях печени токсической этиологии. Она решается применением в качестве гепатопротектора 2,6-диметил-3-оксипиридина адамантанкарбоксилата формулы

Соединение впервые синтезировано в Институте биохимической физики РАН доктором химических наук, профессором Л.Д.Смирновым в качестве перспективного антиоксиданта-антигипоксанта. Исследования, проведенные в течение ряда лет, подтвердили его выраженное антиоксидантное действие (Катунина Н.П. Изучение антигипоксической активности новых производных 3-оксипиридина, бензимидазола, оксиникотиновой кислоты и меркаптобензимидазола. Автореферат дис.... канд. биол. наук. - Смоленск, 2002; Кулагин К.Н., Новиков В.Е. Влияние производных 3-оксипиридина на динамику процессов липидной пероксидации в крови и гомогенате мозга при черепно-мозговой травме // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Матер. 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2003. - С.321-323).

При экспериментальных исследованиях токсического гепатита было впервые выявлено его гепатопротекторное действие.

Пример. У крысы ♂ массой 150 г вызывали токсическое повреждение печени ежедневным подкожным введением тетрахлорида углерода в виде 50% раствора в подсолнечном масле в дозе 0,6 мл 1 раз в день на протяжении 4-х первых дней опыта. Параллельно с тетрахлоридом углерода за один час до его введения вводили исследуемое соединение 1 раз в сутки первые 4 дня, затем еще три дня в дозе 10 мг/кг/сут внутрибрюшинно. На 8-е сутки от начала затравки животное было декапитировано с учетом требований этического комитета. В результате был произведен забор крови для получения сыворотки, в которой определяли активность печеночных трансаминаз (АлАТ, АсАТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), а также активность перекисного окисления липидов (ПОЛ). Была забрана также ткань печени для гистологического исследования и для получения гомогената, в котором также определяли активность ПОЛ.

В результате биохимического исследования сыворотки крови было определено содержание АлАТ - 90 ед/л, что приближалось к показателям интактных животных (67,11 ед/л), тогда как у животных с CCLt-интоксикацией среднее значение АлАТ было 599,91 ед/л. Показатель АсАТ у этой крысы равнялся 240 ед/л, что тоже близко к среднему значению интактных животных, (195,44 ед/л), тогда как у крыс с CCl₄-интоксикацией среднее значение АсАТ было 623,36 ед/л. Значение ЛДГ у данной крысы 952 ед/л, что даже ниже среднего показателя интактных животных (см. табл.1).

В результате исследования активности перекисного окисления липидов светосумма в гомогенате печени данной крысы 16603,7, что приближается к среднему значению интактных животных и значительно ниже среднего показателя животных с CCl₄-интоксикацией (см. табл.2). Значение величины светосуммы в сыворотке крови у опытного животного определено на уровне 90806,5, что также значительно ниже средней величины животных с CCl₄-интоксикацией и ближе к среднему значению интактных животных.

В результате гистологического исследования срезов ткани печени опытной крысы было выявлено значительное уменьшение выраженности жирового гепатоза по сравнению с животными с CCl₄-гинтоксикацией (см. фигуры 2, 3).

В ходе экспериментального исследования было установлено, что соединение оказывает гепатопротекторное действие, эффективно снижая активность печеночных трансаминаз, уменьшая активность процессов перекисного окисления липидов, а также выраженность жирового гепатоза.

Эксперименты выполнены на 60 белых беспородных крысах-самцах массой 150-220 г в осенне-зимний период. Все животные были разделены на контрольную (интактные крысы) и 2 опытные группы (CCl₄-интоксикация + вода очищенная; CCl₄-интоксикация + лекарственное вещество).

Количество животных в каждой серии составляло не менее 10 особей. Все экспериментальные животные содержались в обычных условиях вивария в соответствии с нормами кормления и содержания лабораторных животных.

Соединение предварительно измельчали и готовили суспензию. В соответствии с объемами и кратностью введения активного вещества опытной группе в группе контроля внутрибрюшинно вводили воду очищенную в тех же объемах и с той же кратностью.

В качестве модели гепатита был выбран экспериментальный токсический гепатит, вызываемый введением раствора четыреххлористого углерода.

Опытным крысам ежедневно подкожно вводили тетрахлорида углерод в виде 50% раствора в подсолнечном масле в дозе 0,4 мл на каждые 100 г массы животного 1 раз в день на протяжении 4-х первых дней опыта. Эта схема и доза считаются достаточными для создания полноценной биохимической картины острого токсического поражения паренхимы печени крыс (Левшин Б.И. Экспериментальная фармакология препаратами селена и тиазолидина токсического поражения печени: Автореферат дис.... д-ра мед. наук. Харьков, 1973). На 8-е сутки от начала затравки животные подвергались одномоментной декапитации с учетом требований этического комитета.

Биохимическому исследованию подвергалась сыворотка, отделяемая путем центрифугирования в течение 15 минут при 3000 об/мин цельной крови, собираемой в момент декапитации животных. В ней определяли активность ферментов: аспарагиновой (АсАТ) и аланиновой аминотрансфераз (АлАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ).

Для определения активности аспарагиновой и аланиновой трансфераз использовался IFCC метод (по рекомендации международного комитета по клинической химии).

Так, 7-дневная интоксикация крыс тетрахлоридом углерода вызывала значительное повышение активности печеночных трансаминаз в сыворотке крови, являющихся, как известно, маркерами печеночного цитолиза. По результатам лабораторных исследований, соединение в условиях токсического поражения печени тетрахлорметаном вызывало снижение активности АлАТ на 77,4%, АсАТ - на 53,5%, ЛДГ - на 28,6%. Влияние соединения на биохимические показатели сыворотки крови при экспериментальном токсическом поражении печени отражено в таблице 1.

Оценку показателей свободнорадикального окисления (СРО) проводили методом хемилюминесценции в сыворотке крови и супернатанте гомогената ткани печени.

В качестве оценочного показателя использовалась величина светосуммы, отражающая интенсивность образования свободных радикалов и участие в процессе СРО антиоксидантных систем.

CCl₄-интоксикация крыс приводила к выраженному повышению активности процессов перекисного окисления липидов как в печени, так и в сыворотке крови экспериментальных животных (см. табл.2, 3). Соединение эффективно снижает процессы ПОЛ в печени крыс на фоне интоксикации животных тетрахлоридом углерода. На фоне коррекции CCl₄-индуцированного поражения печени соединением величина светосуммы превышала показатели интактных животных всего лишь на 8,3% (см. табл.2).

Применение соединения приводит также к снижению активности ПОЛ в сыворотке крови относительно животных с CCl₄-индуцированным поражением печени без лечения (см. табл.3).

Преимущества от использования предлагаемого соединения.

1. Соединение снижает активность ферментов-маркеров печеночного цитолиза.

2. Соединение значительно уменьшает активность ПОЛ.

3. Соединение уменьшает выраженность жировой дистрофии печени.

Табл.1

Группы животныхАлТ (ед/л)АсТ (ед/л)ЛДГ(ед/л)1234Интактные животные (контроль)67,11±7,95195,44±13,631601,33±206,54CCl₄-интоксикация (без лечения)599,91±153,14
р<0,01623,36±40,25
р<0,012781,18±194,47
р<0,01CCl₄-интоксикация + соединение135,8±17,85
р<0,01
p₁<0,01289,7±26,49
р<0,01
p₁<0,011985,4±313,7
р>0,05
p₁<0,05

Табл.2

Группы животныхПоказатель светосуммы% к интакту123Интактные животные (контроль)12847,2±1028,7100%CCl₄-интоксикация без лечения28558,6±1620,1
р<0,01222,3%CCl₄-интоксикация + соединение13908,9±2850,2
р>0,05
p₁<0,01108,3%

Табл.3

Группы животныхПоказатель светосуммы% к интакту123Интактные животные (контроль)79086,1±2113,9100%CCl₄-интоксикация без лечения154404,5±5419,1
р<0,01195,2%CCl₄-интоксикация + соединение (1)95735,3±7865,9
р<0,05
p₁<0,01121%

Изобретение относится к области медицины и касается применения 2,6-диметил-3-оксипиридина адамантилкарбоксилата в качестве гепатопротектора с высокой эффективностью. 3 ил., 3 табл.

Применение 2,6-диметил-3-оксипиридина адамантанкарбоксилата формулы

в качестве гепатопротектора.