ВОДНЫЙ РАСТВОР, ОБЛАДАЮЩИЙ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1998 года по МПК A61K31/195 A61K9/08 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к средству, которое может быть использовано для лечения заболеваний печени.

В настоящее время в связи с ухудшением экологических показателей окружающей среды и с экономическим факторами, особенно, актуальна проблема защиты основного органа, осуществляющего детоксикацию организма - печени.

В качестве гепатопротекторных средств в медицинской практике применяют производные оротовой кислоты (препарат "Гепатофальк"), производные силибинина (препарат "Легалон") и др. [1].

В ряде патентов предлагаются препараты гепатопротекторного действия, активным началом которых являются различные аминокислоты или их производные.

В патенте [2] описаны препараты аминокислот, снижающие частоту и остроту приступов печеночной энцефалопатии.

В патенте [3] описана лекарственная смесь на основе L-аспарагиновой кислоты и L-аргинина, используемая в терапии как защитное средство для печени.

В патенте [4] описаны растворы для лечения энцефалопатии, содержащие L-валин, сахара и/или спирты, и электролиты.

Ближайшим аналогом изобретения может служить патент [5], в котором описаны водные растворы аминокислот для парентерального введения. Растворы содержат 0,06-0,4 мас. %/об. N-ацил-L-триптофана и/или N-ацил-L-пролина и 3-12 мас. %/об. сахара, например, мальтозы или фруктозы. Раствор может содержать другие аминокислоты.

Задача изобретения - расширение арсенала эффективных гепатопротекторных средств.

Эта задача решена созданием водного раствора, содержащего в качестве активного начала эффективное количество соли N-ацетил-L-глутаминовой кислоты с 2-(диметиламино)этанолом и целевые добавки. Концентрация указанной соли предпочтительно находится в диапазоне 15-20 мас.%.

В качестве целевых добавок раствор может содержать смесь метилового и пропилового эфиров 4-оксибензойной кислоты (Нипагин М и Нипагин H - известные в фармации консерванты) [6]. Предпочтительно, чтобы концентрация этой смеси составляла 0,03-0,1 мас.%. Предлагаемый раствор может дополнительно содержать сорбит и/или ксилит в концентрации 1-15 мас.%, а также аминокислоты, для которых известно гепатозащитное действие.

Активное начало нового средства - соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты с 2-(диметиламино)этанолом является основой известных ноотропных препаратов (клерегил, деманол), обладающих психогармонизирующим действием. Препараты применяют для лечения астенических и дисперсивных состояний, для улучшения умственной и физической работоспособности [7].

Гепатопротекторные свойства указанной соли установлены впервые.

Раствор по изобретению может быть получен простым смешением составляющих его компонентов. Вместо соли - активного начала, для приготовления раствора могут быть использованы составляющие ее компоненты, т.е. N-ацетил-L-глутаминовая кислота и 2-(диметиламино)этанол.

Пример 1, г:
Соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты с 2-(диметиламино)этанолом - 20,0
Метиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин М) - 0,033
Пропиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин П) - 0,017
Сорбит - 1,0
Вода - до 100 мл
Пример 2, г:
Соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты с 2-(диметиламино)этанолом - 19,0
L-валин - 1,0
Сорбит - 10,0
Вода - до 100 мл
Пример 3, г:
Соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты с 2-(диметиламино)этанолом - 1,0
Метиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин М) - 0,003
Пропиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин П) - 0,0017
Ксилит - 0,1
Вода - До 100 мл
Испытания заявленного раствора осуществлялись in vivo на модели хронического гепатита. Для создания модели крысам вводили четыреххлористый углерод (CCl₄), подкожно, в виде 50%-ного раствора в вазелиновом масле в дозе 0,4 мл на 100 г массы тела животного. Введение четыреххлористого углерода осуществляли в течение 4 сут.

Для испытания было отобрано 4 группы животных по 6 животных в каждой группе. Первой группе одновременно с введением четыреххлористого углерода 1 раз в сут внутрижелудочно вводили испытуемый раствор и изучали дозовую зависимость гепатозащитной активности раствора в интервале доз активного вещества 0,2-500 мг/кг. После 4 сут прекращали введение четыреххлористого углерода, а введение испытуемого раствора продолжали еще в течение 5 сут. Спустя 24 ч после последнего введения (на 10 сут) животных забивали и определяли активность органоспецифических ферментов аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) в плазме крови. Указанные ферменты синтезируются в печени и в случае повреждения ее уровень их в крови повышается, т. е. они являются маркерами синдрома цитолиза. Кроме того, осуществляется морфометрический анализ печени, по которому оценивалась степень повреждения печени в виде величины индекса повреждения печени (ИПп). ИПп оценивался по двухбалльной системе, где 0 - отсутствие повреждений, 2 - максимум повреждения.

Вторая группа животных исследовалась аналогичным образом, но вместо испытуемого раствора животным вводили внутрижелудочно известное гепатопротекторное средство - Эссенциале, в дозе 50 мг/кг.

Третья группа животных представляла модель хронического гепатита и не получала никаких препаратов.

Четвертая группа была контрольной. Животным вводилась крахмальная слизь.

Результаты испытаний представлены в таблице.

Результаты исследований показали, что после 4-х кратного введения крысам CCl₄ на 10 сут наблюдений в модели повысился уровень трансаминаз, маркеров синдрома цитолиза, в сыворотке крови (таблица). Так, уровень аспартатаминотрансферазы (АсАТ) возрос на 73%, а аланинаминотрансферазы (АлАТ) на 160% по сравнению с контрольной группой животных. При этом, морфометрический индекс поражения печени (ИПп) был равен 1,20±0,25 усл. ед.

В печени опытных крыс при патоморфологическом анализе в эти сроки развития экспериментального гепатита наблюдали картину выраженного токсического гепатита с явлениями нарушения микроциркуляции паренхимы. Мелкокапельная и крупнокапельная жировая дистрофия гепатоцитов занимала центральные участки долек, иногда доходя до 2/3 площади печеночных долек. Отмечался лизис гепатоцитов и некроз в отдельных участках долек. Отмечалась мелкозернистая диффузная белковая дистрофия. По периферии долек возросла инфильтрация клеток РЭС. Синусоиды и центральные вены были расширены, наблюдалось повреждение эндотелия сосудов. Иногда отмечалось нарушение балочной структуры печеночных долек. Признаки повреждения паренхимы носили мозаичный характер. Некоторые печеночные дольки были повреждены в меньшей степени.

Таким образом, данные биохимического и патоморфологического исследования свидетельствовали о наличии токсического гепатита с явлениями цитолиза, что соответствовало данным литературы [8, 9].

Введение ЭССЕНЦИАЛЕ, препарата сравнения, в дозе 50 мг/кг на фоне CCl₄-гепатита сопровождалось 2-х кратным снижением уровня аспартатаминотрансферазы и возрастанием на 15% уровня аланинаминотрансферазы по сравнению с моделью. При этом, морфологический индекс поражения печени снизился по сравнению с моделью на 33%. Патоморфологические наблюдения свидетельствовали о снижении жировой и белковой дистрофии, однако эти эффекты были невелики. Что касается цитолиза, то Эссенциале, снизив уровень аспартатаминотрансферазы, повысил уровень аланинаминотрансферазы. Последний фермент в большей степени связывают с функциональным состоянием мембран гепатоцитов. Ряд авторов [10, 11] большое значение придают показателю коэффициента де Ритиса, считая, что коэффициент де Ритиса в большей степени отражает картину мембранной патологии гепатоцитов. В наших исследованиях коэффициент де Ритиса на модели CCl₄-гепатита снизился по сравнению с контрольными животными на 35%, а при введении Эссенциале - на 70%.

Таким образом, в целом, эффект фармакотерапии Эссенциале в проведенных исследований были слабо выражены.

Исследования животных первой группы, которой вводился испытуемый раствор, показали, что доза 500 мг/кг достоверно снижала уровень аспартатаминотрансферазы и на 25% уровень аланинаминотрансферазы. При этом, коэффициент де Ритиса составлял 0,54, индекс поражения печени 0,93±0,3.

Сходные результаты фармакотерапии испытуемым раствором были в дозе 250 мг/кг. Несмотря на то, что уровень аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы был ниже, чем в модели CCl₄-гепатита, однако, коэффициент де Ритиса был по-прежнему в 2 раза ниже, чем у контрольных животных. Патоморфологическая картина практически не отличалась от дозы 500 мг/кг.

Доза 25 мг/кг вызывала более заметный фармакотерапевтический эффект. Так, уровень аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы был ниже, чем в модели, на 50 и 35% соответственно. По сравнению с эффектом доз 500 и 250 мг/кг возрос коэффициент де Ритиса до 0,64, хотя он по-прежнему был низким. Индекс поражения печени снизился по сравнению с моделью XCCl₄-гепатита до 0,70±0,2. И хотя по средним показателям морфометрии не было достоверного отличия от модели, но визуальная патоморфологическая картина позволяла заключить, что степень жировой и белковой дистрофии снизилась. Балочная структура печени была сохранной. Снизилась инфильтрация РЭС.

Доза 5 мг/кг снижала на 50% уровень аспартатаминотрансферазы и на 55% - уровень аланинаминотрансферазы. При этом, коэффициент де Ритиса повысился по сравнению с моделью CCl₄-гепатита на 10%. Индекс поражения печени снизился по сравнению с моделью до 0,52±0,1, что составляло 41% от уровня модели. Патоморфологические исследования печени свидетельствовали о снижении токсического эффекта CCl₄. Более заметно снизилась белковая и жировая дистрофия гепатоцитов и инфильтрация РЭС. Отсутствовали лизисы и некрозы гепатоцитов. Эндотелий центральных и периферических сосудов был в норме. Микроциркуляторные нарушения сохранялись в отдельных дольках. Балочная структура долек была четкой.

Дозы 1 и 0,2 мг/кг в меньшей степени, чем доза 5 мг/кг, препятствовали развитию цитолиза. И хотя коэффициент де Ритиса был выше, а индекс поражения печени был ниже, чем при дозах 500 и 250 мг/кг, дозы испытуемого раствора ниже 5 мг/кг оказывали более слабый фармакотерапевтический эффект, чем доза 5 мг/кг.

Таким образом, изучение дозовой зависимости гепатозащитного эффекта испытуемого раствора на модели CCl₄-гепатита показало, что гепатозащитный эффект испытуемого раствора проявляется в диапазоне доз от 1 до 25 мг/кг, причем, наибольший антицитолитический и гепатозащитный эффект отмечен в дозе 5 мг/кг.

Следует отметить, что диапазоны активных доз гепатозащитного эффекта испытуемого раствора на модели CCl₄-гепатита в 100 раз ниже эффективной ноотропной дозы известных препаратов клерегила и деманола с тем же активным началом (250-500 мг/кг).

На таблице видно, что процент эффективности по морфометрическому индексу поражения печени наиболее высокий в диапазоне 25 - 5 - 1 мг/кг с максимумом в 5 мг/кг.

Использование: в медицине для лечения заболеваний печени. Сущность изобретения: водный раствор гепатопротекторного действия содержит соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты с 2-(диметиламино)этанолом. Концентрация соли предпочтительно 1 - 20 мас.%. Раствор может содержать смесь метилового и пропилового эфиров 4-оксибензойной кислоты в концентрации 0,003 - 0,1 мас.%. Раствор может дополнительно содержать сорбит и/или ксилит в концентрации 0,1 - 15 мас.%. Может содержаться одна или несколько аминокислот гепатопротекторного действия. 4 з.п.ф-лы, 1 табл.

1. Водный раствор, обладающий гепатопротекторным действием, включающий в качестве активного начала производное аминокислоты и фармацевтически приемлемые целевые добавки, отличающийся тем, что в качестве производного аминокислоты он содержит эффективное количество соли N-ацетил-L-глутаминовой кислоты с 2-(диметиламино)этанолом. 2. Раствор по п.1, отличающийся тем, что концентрация соли N-ацетил-L-глутаминовой кислоты составляет 1 - 20 мас.%. 3. Раствор по п.1, отличающийся тем, что в качестве целевых добавок он содержит смесь метилового и пропилового эфиров 4-оксибензойной кислоты при концентрации смеси 0,003 - 0,1 мас.%. 4. Раствор по пп. 1 и 3, отличающийся тем, что он дополнительно содержит сорбид и/или ксилит в концентрации 0,1 - 15 мас.%. 5. Раствор по пп.1 - 4, отличающийся тем, что он дополнительно содержит одну или несколько аминокислот гепатопротекторного действия.