Способ дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей Советский патент 1985 года по МПК A61B10/00 

Ivd 01

Изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может быть использовано для установления наличия крови плодов, новорожденных и детей до пяти недель в пятнах на вещественнырс доказательствах.

Особенности молекулярной структуры гемоглобина взрослого человека (НвА) и фетального гемоглобина (НвР) были положены в основу ряда способов, Ю позволяющих определять наличие НвА и HBF как в свежей жидкой крови, так и в пятнах крови на различных предметах: электрофорез в различных средах иммунологический анализ, цитологи- ческий способ, реакция щелочной денатурации и др. Известен способ дифференциации пя тен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей, заключакшщйся в том, что изучению подвергают одновременно две вытяжки: из пятна крови новорожденного и из пятна крови взрослого человека, которые наносят ва предметные стекла, высушивают, фиксируют и помещают в цитратно-фосфатный буфер. При этом кровь взрослого человека полностью элюриует в раствор, а кровь новорожденного остается на предметном стекле 1 3« Наиболее близким к предложенному по технической сущности является спо соб дифференциации пятен крови плодов, и детей до пяти недель от взрослых людей, основанный на обработке вытякки крови щелочью и процентном подсчете фетального гемоглобина с по мощью фотоэлектроколориметра 121. Однако известные способы определения можно использовать лишь при анализе свежей (негемолизироваиной) жидкой крови. Целью, ияобоетения является обеспе чение возможности исследования пятен крови различного срока давности Поставленная цель достигается тем что согласно способу дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей путем растворения пятен крови в дистиллиро ванной воде и последуюцего фотоэлект роколориметрирования, определяют содержание гемоглобина А в растворе ли монной кислоты и при содержании его от 0,1 до 75% диагностируют кровь взрослого, а при содержании от 80 до 100Z диагностируют кровь плода.

новорожденного или ребенка до пяти недель.

Способ осуществляется следукицим образом.

Из исследуемого пятна, а также из заведомо известных пятен крови новорожденного (плода или ребенка до пяти недель) и взрослого человека вы- резают по два кусочка с одинаковым весом сухого вещества крови (по 25 мг|. По одному кусочку из каждого объекта помещают в отдельные пробирки с 5мп дистиллированной воды и оценивают степень растворимости пятен по интенсивности окраски растворов, используя фотоэлектроколориметр ФЭК-М (светофильтр синий, кювета 5 мм ), При условии получения коэффициента свето пропускания растворов от О до 50% исследуемые пятна берутся в работу. Аналогичные навески фиксируют 80-ным этиловым спиртом в течение I ч, высушивают и помещают в пробирки с 5 мл раствора лимонной кислоты (рН 2,8), Через несколько часов раствор кислоты с навеской крови взрослого человека окрашивается в краснобурый цвет, раствор кислоты с навеской новорожденного остается прозрачным или окрашивается слабо. Количественная оценка результатов проводится через 24 ч на фотоэлектроколориметре путем определения коэффициента светопропускания растворов: изменение окраски растворов в пределах 0,1-75% свидетельствует о наличии в пятне крови взрослого человека, в пределах 80-100% - крови плода, новорожденного или ребенка до пяти недель. I П р и м е ,р 1. Обнаружен труп но-ворожденного ребенка. При осмотре места происшествия произведены смывы пятен, похожих на кровь, на ватные тампоны. Пятна на тампонах исследованы судебно-медицинским экспертом и установлена кровь человека О dft группы. Для сравнительного исследования представлены высушенные на марле образцы крови Пятаевой Т.Н. и ее новорожденного реберка. Вырезали по два кусочка из пятен крови с каждого ватного тампона (объекты 1 и 2), а также из образцов крови новорожденного и Пятаевой, которые брались в качестве контроля (вес сухого вещества крови по 25 мг ). По одной навеске с каждого объекта помещали в пробирки с 5 МП дистиллированной воды, анало гичные навески фиксировали этанолом в течение 1 ч, подсушивали на воздухе и помещали каждый кусоче отдельно в 5 мл раствора лимонной кислоты (рН 2,8). Через 4 ч раствор кислоты с образцом крови Пятаевой приобрел интенсивный красно-бурый цвет, растворы кислоты с кусочками пятен из объектов 1 и 2 и образцом крови новорожденного остались практически бесцветными. Результаты KO-J личественной оценки и определение коэффициента светопропускания растворов приведены в табл.1. Таким образом, в пятнах на двух ватных тампонах обнаружена кровь, к торая принадлежит плоду, новорожденному или ребенку до пяти недель и не может принадлежать взрослому человеку. В табл.2 приведены значения коэф фициента светопропускания растворов в пятнах крови новорожденных и взро лых различной давности в дистиллиро ванной воде и в растворе лимонной кислоты (рЯ 2,8). Исследовали одно пятно крови на марле давностью 1 мес. В качестве, контроля использовались пятна заве- доно известной крови новорожденного (пуповинная ) и взрослого человека такой же давности. Вырезали по две навески (содержащих по 25 мг сухого вещества крови) из каждого пятна. Одна навеска помещалась в пробирку с 5 мл дистиллированной воды, друга Л аналогичная ) фиксировалась этиловым спиртом, высушивалась и помещалась в пробирку с 5 мл раство ра лимонной кислоты (рН 2,8 ). Количественная оценка результато проводилась через 24 ч от момента начала реакции на фотозлектроколориметре марки ФЭК-М. В табл. 3 представлены значения КСР общего гемоглобина в дистиллиро ванной воде и гемоглобина А в раств ре лимонной кислоты. I Таким образом, в исследуемом пят не содержится взрослого человека. Приме р 3. Исследовали одно пятно крови на марле давностью один год. В качестве контроля использовались пятна заведомо известной крови новорожденного (пуповинна и взрослого человека той же давност Техника исполнения аналогична описанной. В табл. 4 представлены значения КС общего Нв в дистиллированнЬй воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты. Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь взрослого человека. П р и м е р 4. Исследовали одно пятно крови на марле давностью I мес. В качестве контроля использовались пятна заведомо известной крови новорожденного ( пуповинная ) и взрослого человека такой же давности. Техника исполнения аналогична описанной. В табл.5 представлены значения КСР общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты . Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь плода или ребенка до пяти недель. П р и м е р 5. Исследовали одно пятно крови давностью один год. В качестве контроля использовали пятна заведомо известной крови новорожденного (пуповинная) и взрослого человека такой же давности. Техника исполнения аналогична описанной. В табл. 6 представлены значения КСР общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты. Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь плода или новорожденного ребенка в возрасте до пяти недель. .Примере. Исследовали два пятна крови (новорожденного и взросого) с плохой растворимостью в истиллированной воде (КСР свьппе 50%. ехника исполнения аналогична описанной . В табл.7 представлены значения КСР общего Нв в дистиллированной вое и гемоглобина А в растворе лимоной кислоты. Таким образом, плохо растворимые брать в работу (исследовать в растворе лимонной кислоты) нельзя. В этом случае пятно крови взрослого ает такие же показания КСР НвА в имоиной кислоте ( по которым высказывается суждение о принадложности крови новорожденному или взроопому человеку), как и пятно кроки новорож5И

денного, т.е. дифференцирование пятен невозможно,

Б пределах растворимости в дистиллированной воде от О,1 до 50% пятна крови новорожденных и взросльпс могут дать одинаковые значения КСР, НвА в пределах от 76 до 79%.

П р и м. е р 7. Исследовали два пятна крови: новорожденного давностью 1 мес. и взрослого давностью 6 мес. Техника исполнения аналогична описанной.

В табл.8 представлены значения КСР общего Нв в дистиллированной во

381256

де и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.

Таким образом, пятно могло произойти как за счет крови новорожденного (плода), так и за счет крови взрослого человека. Это объясняется тем, что полученные значения (77%) входят в группу сомнительных значений (КСР 76-79%).

Предлагаемый способ позволяет определить возможность исследования, пятен крови различного срока давности.

Таблица 1

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПЯТЕН КРОВИ ПЛОДОВ И ДЕТЕЙ ДО ПЯТИ НЕДЕЛЬ ОТ КРОВИ ВЗРОСЛЫХ ЛЮДЕЙ пууем растворения пятен крови в дистиллированной воде и последующего фотоэлектро-ч колориметрирования, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности исследования пятен крови различного срока давности, определяют содержание гемоглобина А в растворе лимонной кислоты и при содержании его от 0,1 до 75% диагностируют кровь взрослогоj при содержании от 80 до 100% диагностируют кровь плода или ребенка до пяти недель. (Л с

1 день -Змее,

3 мес. день

6 мес.

6 мес. 1 день 9 мес,

9 мес. день 12 мес.

Свьние года до

5 лет.

Таблица 2

100,1-25 0,1-25 80-950,1-50

3-35

10-50

15-50

15-50

Таблица 3

Таблица 4

таблица 5

Исследуемое пятно крови новорояденного

Исследуемое пятно крови взрослого

Исследуемое пятно крови новорожденного

Исследуемое пятно крови взрослого

Таблица 7

98

70 70

98

Таблица 8

77 77

20 20