ВОДОРАСТВОРИМЫЕ СОЛИ 2,4-ДИ -( α -МЕТОКСИЭТИЛ)ДЕЙТЕРОПОРФИРИНА-IX, ОБЛАДАЮЩИЕ СПОСОБНОСТЬЮ ЛОКАЛИЗОВАТЬСЯ В РАКОВЫХ ТКАНЯХ Советский патент 1996 года по МПК C07D487/22 A61K31/40 

Предлагаются новые химические соединения порфиринового ряда, а именно водорастворимые соли 2,4-ди-(α-меток- сиэтил)дейтеропорфирина-IX общей формулы
где R-Na, K или остаток N-метилглюкамина, которые обладают избирательной способностью локализоваться в раковых тканях и могут найти применение в медицине для диагностики и лечения злокачественных новообразований.

Известен гематопорфирин-IX, который проявляет способность избирательно накапливатьcя в опухолях и может быть использован в целях диагностики новообразований.

Целью изобретения является изыскание в ряду порфирина новых соединений, обладающих повышенной способностью избирательно накапливаться в раковых тканях.

Поставленная цель достигается описываемыми водорастворимыми солями 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX ука- занной общей формулы, которые могут быть получены путем кислого гидролиза в соляной кислоте диэтилового эфира 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX с последующим растворением 2,4-ди-(α-метоксиметил)дейтеропорфирина-IX в метаноле в присутствии эквимолярных количеств соответствующего основания (метилата натрия или калия или N-метилглюкамина) и выделением соли удалением растворителя в вакууме.

П р и м е р 1. Выдерживают при комнатной температуре 1 г диметилового эфира 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина- IX в 100 мм 25%-ного раствора соляной кислоты, через 12 ч нейтрализуют насыщенным раствором ацетата натрия, выпавший осадок отфильтровывают, многократно промывают горячей дистиллированной водой и сушат при 40-50^оС. Сухой остаток растворяют в смеси хлороформ-метанола (5:1), фильтруют, добавляют гексан до полноты осаждения, осадок отфильтровывают, сушат на воздухе и получают 0,82 г (85%) 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX.

Электронный спектр в метаноле, λ_макс (Е · 10^-3), нм: 396 (166,2), 498 (12,5), 531 (7,7), 568 (5,6), 621 (3,6).

Найдено, C 68,76; H 6,56; N 8,82.

C₃₆H₄₂N₄O₆
Вычислено, C 63,99; H 6,75; N 8,94.

П р и м е р 2. Динатриевая соль 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX (Ia).

К раствору 1,0 г (1,6 ммоль) порфирина в смеси метанола и хлороформа (40 мл, 1:9) прибавляют 73,6 мг (3,2 ммоль) металлического натрия в 10 мл метанола. Через 30 мин растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в минимальном количестве метанола (20 мл) и высаживают при постепенном добавлении смеси гексан-эфир (1:1), осадок отфильтровывают, сушат в вакуум-эксикаторе над NaOH и получают 0,9 г (84%) порфирина Ia.

Электронный спектр в метаноле, λ_макс (Е · 10^-3) нм: 396 (168,9), 498 (12,3), 531 (7,9), 568 (5,6), 621 (3,5); дикатион, в метаноле + 1% HCl: 404 (290,3), 561 (13,5), 592 (4,5).

П р и м е р 3. Дикалиевая соль 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX (Iб).

К раствору 1,0 г (1,6 ммоль) порфирина в 50 мл смеси метанол-хлороформ (1:9) прибавляют раствор 125 мг (3,2 ммоль) металлического калия в 15 мл метанола. Через 30 мин растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в 20 мл метанола, фильтруют и высаживают смесью гексан-эфир (1:1). Осадок отфильтровывают, сушат в вакуум-эксикаторе и получают 0,945 г (84%) соли Iб.

Электронный спектр в метаноле, λ_макс (Е · 10^-3) нм: 396 (185,7), 498 (12,6), 531 (8,2), 568 (6,0), 621 (3,8).

П р и м е р 4. N-Метилглюкаминовая соль 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX (Iв).

К раствору 1,0 г (1,6 ммоль) порфирина в смеси метанол-хлороформ (50 мл, 1: 9) прибавляют раствор 0,615 г (3,2 ммоль) N-метилглюкамина в 50 мл метанола. Через 30 мин растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в 20 мл метанола и высаживают смесью гексан-эфир (1:1), осадок отфильтровывают, сушат в вакуум-эксикаторе над NaOH и получают 1,35 г (83,6%) соли Ia.

Электронный спектp в метаноле, λ_макс (Е · 10^-3) нм: 396 (169,5), 498 (12,6), 531 (8,0), 568 (5,7), 621 (3,5); в метаноле +1% HCl: 404 (252,6), 552 (14,0), 592 (4,4).

Найдено, С 69,25; Н 7,36, N 8,18.

C₅₀H₇₂N₆O₁₆
Вычислено, C 59,27; H 7,16; N 8,30.

Тропность к опухоли соединений указанной общей формулы исследовали на мышах линии С₅₇BL с метилхолантреновой асцитной и солидной опухолями. Масса мышей около 25 г во всех экспериментах.

Препараты вводили в хвостовую вену в физиологическом растворе (0,9%-ный водный раствор хлористого натрия) в концентрациях 0,07 или 0,15% в количествах соответственно 7 или 15 мг/кг массы мыши, в обоих случаях троекратно ежесуточно.

Эффект накопления порфиринов в тканях оценивали по отношению их содержания в опухолях к содержанию в тканях методом флуоресценции спектрометрии. Навески тканей от трех мышей, 300 мг сырой массы, гомогенизировали в 0,15 М уксусной кислоте. Далее центрифугировали, отбирали супернатант. Осадок снова гомогенизировали в серном эфире, свободном от перекисей. После повторного центрифугирования эфирную фазу отбирали, а осадок вновь гомогенизировали в смеси равных количеств 0,15М уксусной кислоты и серного эфира. Далее опять центрифугировали и объединенные супернатанты от трех гомогенатов исследовали на содержание порфиринов. Эта ступенчатая процедура позволяла разрушить клетки тканей и тем самым полностью извлечь порфирин из навески. После добавления к смеси супернатантов дополнительного количества серного эфира порфирин, содержащийся в уксусной кислоте, переводили в эфир путем добавления в делительной воронке определенного количества 3%-ного ацетата натрия, меняя тем самым рН водной фазы. Из эфира порфирин экстрагировали I н.соляной кислотой. Пробы (растворы порфирина в I н.соляной кислоте) исследовали на содержание в них порфирина путем измерения спектра флуоресценции порфирина в длинноволновой области спектра при возбуждении в полосе Соре. По калибровочной кривой методом интерполяции находили абсолютные количества порфирина в тканевых навесках. Вся методика выполнялась за три дня. Ошибка метода составляла ± 10% Эндогенное содержание исследуемых порфиринов не превышало фоновых накоплений. Асцитные клетки и клетки костного мозга подсчитывали методом разведения в физиологическом растворе с несколькими каплями гепарина. Возраст асцитной опухоли 5 дней, солидной 11 дней. Содержание порфиринов в сыворотке определяли посредством прямого разведения 0,3 мл сыворотки в I н. HCl. Спектральный анализ растворов порфиринов в соляной кислоте показал, что концентрационное тушение флуоресценции отсутствует, так как оптическая плотность всех проб не превышала 0,1. Полученные соли 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX изучали одновременно в параллельных опытах с известным соединением гематопорфирином-IX при дозах препаратов, равных 7 или 15 мг/кг массы. Изучение распределения порфиринов в тканях проводили через 12 и 16 ч после третьей внутривенной инъекции, т.е. в период оптимального накопления порфиринов в опухолях соединительной ткани. Критической окружающей опухоль тканью являлись мышцы. Данные испытаний представлены в таблице.

Как видно из таблицы, соединения Ia-Iв превосходят гематопорфирин-IX по тесту тропности к опухолям.

Таким образом, соли 2,4-ди-(α-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX обладают свойством избирательно накапливаться в раковых опухолях в количествах, существенно больших по сравнению с окружающими тканями, превосходя по этому показателю гематопорфирин-IX.

Водорастворимые соли, 2,4-ди-(a-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX общей формулы

где R - Na, K или остаток N-метилглюкамина,
обладающие способностью локализоваться в раковых тканях.

Водорастворимые соли, 2,4-ди-(a-метоксиэтил)дейтеропорфирина-IX общей формулы

где R - Na, K или остаток N-метилглюкамина,
обладающие способностью локализоваться в раковых тканях.