Способ испытания семян на заражаемость плесневыми грибами Советский патент 1985 года по МПК A01C1/00 

О 05

Изобретение относится к области семеноведения и может быть использовано в селекции, семеноводстве, а также в микробиологии.

Цель изобретения - выявление плесневых грибов, способных распространяться на семенах, и определения скорости их распространения.

Способ осуществляют последовательным выполнением следующих операций: стерилизация семян, инфицирование их грибами и выдерживание в условиях, оптимальных для роста плесневых грибов, причем инфицируемые семена располагают последовательно в ряд, а инфицированию подвергают первое семя в ряду.

В условиях высокой влажности споры грибов прорастают, образуют мецилий и он распространяется по ряду семян с разной скоростью в зависимости от вида гриба. Выдерживание семян при разных уровнях влажности воздуха (95, 85, 75%) и температурах дает возможность определить способность грибов к распространению в этих условиях и оценить скорость их распространения. Использование в качестве инфицирующего материала нестерильного семени с естественной микрофлорой позволяет полнее оценить первоначальную зараженность семян разными видами плесеней хранения.

Пример. Семена томата (2 г ) и огурца (5 г ) стерилизируют с поверхности гипохлоритом натрия. Для этого их помещают в колбу, ополаскивают раствором спирта в воде (96%, разбавленный 1:1) в течение 1 мин и обрабатывают 2%-ным водным раствором гипохлорита натрия в течение 2 мин (семена томата) и 3 мин (семена огурца), после этого семена ополаскивают стерильной дистиллированной водой и выдерживают 2 мин в водном растворе стрептомицин сульфата (1:500), затем четыре раза промывают стерильной дистиллированной водой. Простерилизованные семена выкладывают на 6-7-слойную стерильную фильтровальную бумагу в чашках Петри и подсушивают в стерильной камере, слегка открывая чашки. После обработки проверяют всхожесть семян методом проращивания на увлажненной фильтровальной бумаге и эффективность стерилизации. Для этого семена раскладывают (по 25 шт в 4 чашки Петри) на поверхность твердых агаризованных сред (сусло-агар, мясо-пептонный агар) и помещают в пробирки (50 шт) с жидкими средами (мясо-пептонный и картофельный бульон). В опыте используют семена, не снижающие посевных качеств в процессе обработки и не имеющие на поверхности микроорганизмов. Сухие семена раскладывают в ряд (по 15 щт семян томата и 6-7 щт семян огурца) на стерильные чашки Петри (в четырех повторностях) В начале каждого ряда помещают зараженное семя. В зависимости от задач исследований семя может

быть заражено суспензией спор гриба или в качестве инфицирующего материала можно использовать нестерильное семя с естественной микрофлорой на поверхности. Четыре чашки Петри аккуратно помещают в эксикатор, где растворами солей поддерживают относительную влажность воздуха 95, 85, 75% и выдерживают при 26-28°С разное время (в зависимости от характера опыта). После окончания опыта чащки вынимают и семена раскладывают на поверхность питательных сред (Чапека +6% NaCl или МП А 1:10) в той же последовательности. Учитывают вид гриба, заражающий семя, число зараженных и проросших семян. Предлагаемым способом была выявлена

способность некоторых видов грибов распространяться по ряду семян при 28°С и относительной влажности воздуха 95%. Заражение было проведено суспензией спор гриба. Оказалось, что грибы рода Aspergillus

0 A.glaucus, A.candidus, A.versicolor, A.Sydowii способны распространяться ,по ряду семян в этих условиях, тогда как такие виды как Alternaria sp. U. Mucorsp не продвигались по ряду семян за 24 дня проведения опыта. Грибы рода Aspergillus достигали кон5 ца ряда семян за 20 дней.

При заряжении ряда семян томата и огурца нестерильным семенем с него переходили и распространялись по ряду стерильных семян разнообразные грибы, в основном рода Aspergillus, в меньшей степени рода Ре nicillium. На семенах томата отмечено распространение следующих видов грибов: А. sydowii, А. glaucus, А. repens, А. ochraceus, на семенах огурца: А versicolor, А. glaucus, А. sydowii, А. Candidas, Peni- .

cillium sp.

Другие виды грибов, которые присутствовали на нестерильном семени - Arternaria sp., Mucor sp. некоторые виды Penicillium слабо продвигались по семенам (на 1-2 семени) .

Таким образом, по ряду семян распространяются грибы, относящиеся к плесеням хранения, т. е. те, которые заражают семена при хранении. Другие грибы (Alternaria sp.j Mucor sp.) не распространяются по семенам

в данных условия. В то же время при раскладке нестерильных семян на поверхность агара они интенсивно зарастали грибами рода Mucor, что мешало выявлению аспергиллов на семенах. Вышеописанным споQ собом можно выявить аспергиллы и некоторые пенициллы на семенах при интенсивном заражении их другими видами грибов. Скорость распространения грибов рода Aspergillus на семенах томата при 28°С и относительной влажности воздуха 95% приведена в табл. 1, а способность грибов распространяться по семенам при других значениях относительной влажности воздуха и температуры приведена в табл. 2.

Разные виды грибов имеют иеодинаковую скорость роста. Наибольшими ее значениями обладает гриб А. glaucus, наименьшим - А. versicolor.

Оценка распространил плесеней хранения по семенам при разных уровнях относительной влажности воздуха имеет экологическое значение при изучении способности грибов выживать в экстремальных условиях и практическое - для выявления оптимальных значений влажности при хранении.

Из табл. 2 видно, что грибы А. sydowii, А. versicolor А. candidus не развивались на семенах в течение 90 дней при относительной влажности воздуха 75%, а скорость роста их при относительной влажности воздуха 85% очень мала. Снижение темпера-туры уменьшает скорость роста и увеличивает период от начала опыта до прорастания грибов.

Предлагаемый способ может быть применен для выявления плесеней хранения в период заготовки и закладки семян на хранение, особенно коллекционных образцов, ког да известные способы неприемлемы или когда плесени хранения трудно выявляются в силу количественного преобладания других грибов. Кроме того, способ можно использовать как экспресс-метод для выявления скорости распространения грибов по семенам при контроле качества семян в период хранения.

Таблица 1

Таблица 2

СПОСОБ ИСПЫТАНИЯ СЕМЯН НА ЗАРАЖАЕМОСТЬ ПЛЕСНЕВЫМИ ГРИБАМИ, включающий стерилизацию семян, последующее инфицирование их грибами и выдерживание в условиях, оптимальных для роста плесневых грибов, отличающийся тем, что, с целью выявления плесневых грибов, способных распространяться по семенам, и определения скорости их распространения, семена располагают последовательно в ряд, а инфицированию подвергают первое семя в ряду.