Способ получения липосом Советский патент 1985 года по МПК C11B1/10 

а

СП

Ы Изобретение относится к химической технологии высокомолекулярных соединений, конкретно к способу полу чения липосом, и может быть использовано в химической промышленности и медвдине, а также в научно-исследовательских и учебных лабораториях для получения в аналитических и препаративных целях липосом из липидов растительного и животного происхожде ния. Целью изобретения является повышение устойчивости липосом к действию физико-химических факторов, П р им е р 1, Липосомы приготовили следуйщим образом. р,5 мл 10%ного спиртового раствсфа лецитюта яичного желтка подвергли вакуумной сушке, суспендировали в 5 мл дистиллированной воды. Полученную суспензио обработали озоном концентрации 50 в течение 20 мин и провели экстракцию хлороформом в отношении 1:1. Затем хлороформрастворим по фрак цию подвергли вакуумной сушке, перевели в водную фазу рН 6,0 и обработали ультразвуком мощностью 3. Вт/см в течение 5 мш1 в режиме .стоячих волн. Образование липосом контролировали с помощью методов светорассеяния и электронной микроскопии. Данный метод пригоден для приготовления устойчивых липосом из липидов как растительного, так и животного происхождения. Пример 2, На флуориметре измеряли интенсивность люминесценции при нм липосом, полученных по примеру 1, и липосом, получен ных известным способом, в зависимости от сроков хранения при естественном освещении в комнатных условиях. В табл. ,1 представлен сравнительный анализ изменения интенсивности флуоресценции ( нм) липосом, полу 1ениых предлагаемым (1) и известным (1ц) способами.в процессе хранения при комнатрюй температуре (А), при действии температуры (Б при действии УФ-излучения .(В), при действии перекиси водорода (Г). Из табл. 1 (А) видно,, что интенсив ность люминесценции липосом, получен ных известным способом (.контрольные липосомьО, растет со временем хранения, что свидетельствуют об увеличении концентрации продуктов окисления липидов в данных липосомах и, следовательно, об увеличении степени окисленности самих липосом. В то же время интенсивность люминесценции липосом, полученных предлагаемым способом, остается практически постоянной, т.е. липиДы в них окисляются в течение длительного срока хранения, следовательно, сами липосомы более устойчивы к длительному хранению. Приме р 3. Последовательность операций такая же, как в примере «2. Концентрация озона 50 мг/м, время озонирования 20 мин. Измеряли интенсивность флуоресценции липосом при |Температурах суспензий 20, 40, . Полученные результаты представлены в табл. 1 (Б), откуда следует, что при повьппении температуры интенсивность флоуресценции контрольных липосом растет, что свидетельствует об увеличении степени окисления липидов в липосомах, следовательно, и самих липосом. Для липосом, полученных пpeдлaгae П)UУI способом, интенсивность флуоресценции практически не изменяется при повьшении температуры и сохраняется устойчивость даже на 30 сутки хранения при 60°С, в то время как контрольные липосомы практически полностью разрушены. П р и м е р 4. Последовательность операций, такая же, как в примере 1. Концентрация озона 5 мг/м, время озонирования 30 мин. .Липосомы подвергли действию УФ-изл:учения от лампы ДКСШ-1000 в течение 10 мин, а затем измеряли интенсивность флуоресценции через 0ч, 1 ч, 1 сут,.10 сут, 30 сут после действия УФ-излучения. Полученные результаты представлены в табл. 1 (В). Из сравнения результатов видно, что интенсивность флуоресценции липосом, полученных предлагаемых способом и подвергшихся действию УФ-излучения, практически не меняется В течение 30 сут, в то время как степень окисленности контрольных липосом значительно увеличивается со временем хранения. Таким образом, липосомы, полученные предлагаемым способом, являются более устойчивыми к воздействию УФ-излучения. П р и м е р 5. Последовательность операций осуществляли, как в примере 1. При получении липосом озонирование осуществляли в течение 5 мин с концентрацией озона 100 мг/м. К липосомам добавляли перекись водорода (концентрация перекиси водорода в суспензии липосом 0,5%). Измеряли интенсивность флуоресценции через О ч, 1 ч, 1 сут, 10 сут, 30 сут после добавления перекиси водорода. Полученные результаты представлены в табл. 1 (Г). Из сравнения результатов следует, что липосоМ), полученные предлагаемым способом более устойчивы к перекисному окислению. Интенсивность флуоресценции липосом при нм характеризует устой чивость к внешним воздействиям химического состава соединений, в ти липидов, образующих липосомы. Наличие и устойчивость липосомы как целого характеризует интенсивность светопропускания при А и потенциал электрического пробоя. П р и м е р 6. Для измерения инте сивности светопропускания при Л 6327 А на нефелометре был осуществлен последовательно ряд экспериментов, аналогичных примерам 2-5. В табл. 2 представлен сравнитель-я ный анализ измерения интенси |ности светопропускания при А липосом, полученных предлагаемым (1«) и известным (1) Способами, в процес се хранений при комнатной темпёратуре (А) ,- при действии температуры (В) при действии УФ-излучения (Б), при действии перекиси водорода (Г). Из табл. 2 следует, что липосомы, полученные известным способом, при нагревании до сохраняют свою устойчивость не более 10 дней, в т6 время как липосомы, полученные преД лагаемым способом, сохраняют свою устойчивость 30 сут и болер. При УФ-воздействии на 30 сутки сохраняют устойчивость 55% липосом, полученных известным способом, и 95% способом. Аналогичная тенденция со-храняется и при воздействии перекиси водорода.. 1 9 Из этого следует, что липосомы, последует. лученные предлагаемым способом, являются более устойчивыми, чем контрольные липосомы. П р и м е р 7. Для оценки устойчивости к прикладываемому электрическому напряжению измерен потенциал пробоя фрагментов липосом, полученных известным и предлагаемым способами при длительном хранении. В табл. 3 представлен сравнительный анализ изменения потенциала прибоя фрагментов липосом, полученных предлагаемым (U) и известным (U,) способами в процессе хранения, откуда следует, что потенци.ал Пробоя, а следовательно, и устойчивость липосом , полученных предлагаемым способом втрое выше липосом, полученных известным способом. Приме р 8. На практике часто возникает необходимость использования липосом для упаковки (включения внутрь липосомы) легкоразрушаемых биологически активных веществ (микрокапсулирование) с целью длительного хранения. Невысокая устойчивость лиПОСОМ, получаемых известными способами, не позволяет защищать от окисления биологически активные вещества более чем на 100 мин. Липосомы, полученные предлагаешм способом, эащицают от окисления биологически активтечение 600 мин и боные вещества в В табл. 4 приведены значения оптических плотностей поглощения полиенового антибиотика айфотерицина В (гептаен) при нм, заключенного в липосомы, полз ченные предлагаемым DO и известным D способами. Значительное снижение оптической плотности гептаена в липосомах, полученных известным способом,свидетельствует о значительной степени окисленности этого вещества, что обусловлено низкой устойчивостью указанных липосом по сравнению с липосомами, получен1{ыми предлагаемым способом.

ТаблицаЗ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ путем обработки липидбв ynijTpasByKOM от л и ч. а ю щ и и с я тем, что,, с целью повышения устойчивости липо-. сом к действие физико-химических факторов, дипиды озонируют 5-30 мин при концентрации озона 10-100 мг/м.

Таблица4