СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОГО ШОКА Российский патент 2002 года по МПК A61K31/66 A61K9/127 A61P3/00 

Изобретение относится к области медицины и касается способа коррекции геморрагического шока с помощью липосом.

Массивная потеря крови, сопровождающаяся геморрагическим шоком, является причиной летальности ряда заболеваний в результате профузных кровотечений (язвенной болезни, рака желудка, геморрагического эрозивного гастрита), при послеродовых кровотечениях, разрыве аневризмы крупных артерий и др. При травме геморрагический шок развивается в тех случаях, когда несмотря на выраженное механическое повреждение мягких тканей и костей в развитии шока преобладает фактор массивной потери крови из-за повреждения крупных магистральных артериальных сосудов (например, при остром повреждении длинных трубчатых костей; черепно-мозговой травме, сопровождающейся внечерепными повреждениями, характеризующимися обильной острой кровопотерей, что встречается главным образом при военно-полевых ранениях, и др.). В настоящее время летальность от геморрагического шока достигает 15-30%, и существенной тенденции к ее снижению не наблюдается. Особенную важность проблема массивной потери крови, сопровождающейся геморрагическим шоком, приобретает в военно-полевой хирургии, учитывая, что большинство раненых поступает в позднем периоде шока, когда общепринятые методы лечения, в том числе и массивная трансфузионно-инфузионная терапия, часто оказываются неэффективными.

Известен способ профилактики тяжелых местных и общих постишемических расстройств и связанных с ними осложнений при возобновлении кровотока в длительно ишемизированных тканях после длительной компрессии с помощью озвученных липосом, содержащих в качестве липидных компонентов фосфатидилхолин (ФХ) и холестерин, которые применяют в дозе 25 мг/кг массы тела пострадавшего (Рудаев В. И. и соавт. Способ профилактики местных и общих постишемических осложнений при длительной компрессионной травме конечности. - Патент Российской Федерации N 2142271, кл. А 61 К 9/127, опублик. 10.12.99). Указанный способ мы принимаем за прототип.

В отличие от указанного способа заявляемый способ коррекции геморрагического шока осуществляется с помощью многослойных липосом, скорость выведения которых из кровяного русла значительно превышает таковую озвученных липосом, что обеспечивает срочность воздействия на организм. Отсутствие холестерина в липосомах вносит вклад в увеличение скорости выведения липосом из кровотока. Таким образом, заявляемый способ позволяет осуществить коррекцию последствий нарушений кровообращения в более короткий срок. Отличием заявляемого способа является также использование низких доз ФХ (0,5 мг/кг массы тела), что допускает использование липосом при оказании первой медицинской помощи.

Выбор ФХ в качестве материала для приготовления липосом обусловлено тем, что ФХ клеточных мембран, составляющий основную массу их фосфолипидного бислоя, истощается в процессе развития геморрагического шока в таких жизненно важных органах как головной мозг и печень. Встраивание ФХ-липосом в клеточные мембраны органов-мишеней позволяет защитить их от повреждения при геморрагическом шоке.

Установлено:
1. Липосомы являются эффективным средством коррекции геморрагического шока, действующим на субклеточном, органном и системном уровнях.

2. Применение липосом в позднем периоде геморрагического шока облегчает его течение и значительно увеличивает продолжительность жизни животных.

3. В отличие от незащищенных липосом стабилизированные липосомы в течение длительного времени хранения не теряют выраженного противошокового эффекта.

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример 1. Коррекция перекисного окисления липидов в печени
В условиях экспериментального геморрагического шока оценивали эффективность применения липосом для коррекции перекисного окисления липидов в печени. Геморрагический шок моделировали на кошках массой 2,5-3,5 кг в течение 1,5 ч (артериальное давление снижали до 40 мм рт. ст. в течение 30-40 мин и поддерживали его на этом уровне в течение 1 ч, после чего прекращали кровопускание). Кровопотеря у кошек, произведенная в течение 1,5 ч, составила 3,6±0,1% к массе тела. Липосомы в дозе 1 мл/кг вводили внутривенно через 30 мин от начала кровопотери.

Липосомы готовили следующим методом: соевый ФХ (Sigma, США) в концентрации 0,5 мг/мл встряхивали в дистиллированной воде до образования суспензии липосом. Получали свежеприготовленные "пустые" фосфатидилхолиновые липосомы (ФХ-липосомы).

Определение содержания продуктов перекисного окисления в печени проводили спектрофотометрическим методом с помощью 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК).

Как видно из представленных на фиг.1 результатов, инъекция ФХ-липосом снижает уровень продуктов перекисного окисления липидов в печени у животных, подвергнутых геморрагическому шоку, в 1,8 раза (р<0,01), приближая его к контрольному, что свидетельствует о подавлении повреждающих свободнорадикальных процессов в ткани.

Пример 2. Коррекция фосфолипидного состава плазматических мембран гепатоцитов.

Моделирование геморрагического шока, приготовление и введение животным липосом проводили как описано в примере 1. После выделения плазматических мембран клеток печени методом дифференциального ультрацентрифугирования и экстрагирования из них общих липидов с помощью полярных растворителей фосфолипиды разделяли на фракции при тонкослойной хроматографии. Проявленные хроматограммы регистрировали на денситометре "Chromoscan-201" (Англия), а денситограммы анализировали на полуавтоматическом анализаторе "Leitz-ASM" (Германия).

Как видно из представленных на фиг.1 результатов, инъекция ФХ-липосом восстанавливает уровень ФХ и фосфатидилинозитола в составе плазматических мембран клеток печени до контрольных значений, что свидетельствует о коррекции содержания фосфолипидов, обмен которых наиболее уязвим к шокогенному воздействию.

Пример 3. Коррекция фосфолипидного состава мембранных фракций митохондрий продолговатого мозга
Моделирование геморрагического шока, приготовление и введение животным липосом проводили как описано в примере 1. После получения мембран митохондрий методом дифференциального ультрацентрифугирования экстракцию липидов, разделение фосфолипидов на фракции и количественное определение состава фосфолипидов в мембранах осуществляли как в примере 2.

Как видно из представленных на фиг.2 результатов, инъекция ФХ-липосом в значительной степени нормализует фосфолипидный состав мембран митохондрий продолговатого мозга. Во внешних мембранах митохондрий уровень ФХ повышается по сравнению с нелечеными животными на 43,7% (р<0,05). Во внутренних мембранах митохондрий у леченых животных наблюдали полное восстановление уровня ФХ. Кроме того, во внутренних мембранах митохондрий нормализовалось содержание фосфатидной кислоты. Контрольным показателям соответствовал также уровень лизофосфолипидов.

Пример 4. Коррекция фосфолипидного состава мембранных фракций митохондрий лобных долей больших полушарий головного мозга
Исследования проводили, как описано в примере 3. Как видно из представленных на фиг. 3 результатов, инъекция ФХ-липосом у животных, подвергнутых геморрагическому шоку, приводит к восстановлению содержания фосфатидилинозитола, фосфатидилэтаноламина, а также лизофосфолипидов в мембранах митохондрий больших полушарий головного мозга.

Пример 5. Воздействие на системное артериальное давление и продолжительность жизни
Геморрагический шок моделировали в течение 2 ч, после чего липосомы в дозе 1 мл/кг вводили внутривенно через 2 ч от начала кровопотери. Использовали три вида липосом: два вида свежеприготовленных липосом [из очищенного соевого лецитина (Sigma, США) (ФХ-липосомы) и из этого же лецитина, но окисленного в результате хранения в течение одного года при -18^oС (ОФХ-липосомы)] и стабилизированные липосомы (СТ-липосомы).

ФХ- и ОФХ-липосомы готовили, как описано в примере 1.

Метод приготовления СТ-липосом отличается от такового для свежеприготовленных липосом тем, что лецитин встряхивают в дистиллированой воде, содержащей лактозу в концентрации 0,5 мг/мл. Полученный раствор подвергают стерилизации, разливу во флаконы и лиофильному высушиванию, после чего осуществляют закупорку и герметизацию флаконов. Флаконы с лиофилизованными липосомами хранят до использования в течение одного года при -18^oС. Затем липосомы растворяют в концентрации 0,5 мг лецитина на 1 мл дистиллированной воды, оставляют при комнатной температуре на 1 ч до готовности.

Результаты исследований приведены в табл.1 и 2. Как видно из представленных результатов, инъекция ФХ-липосом в позднем периоде геморрагического шока облегчает его течение и значительно увеличивает продолжительность жизни животных. При инъекции свежеприготовленных ФХ-липосом через 2 ч от начала кровопотери артериальное давление повышается в течение 20-30 мин в среднем до 70 мм рт. ст. (табл. 1). Далее имеет место стабилизация артериального давления около субнормального уровня в течение 4 ч наблюдений. Продолжительность жизни таких животных составляет в среднем 8 ч. У нелеченых животных, также перенесших 2-часовую гипотензию, наблюдали прогрессивное снижение артериального давления, и они погибали в среднем через 70 мин.

Применение липосом, приготовленных из окисленного ФХ, не оказало воздействия на течение геморрагического шока у кошек. Динамика артериального давления у животных с геморрагическим шоком, которым вводили ОФХ-липосомы, была сходной с таковой нелеченых животных, а средняя продолжительность жизни составила 80 мин.

Характер воздействия СТ-липосом на течение геморрагического шока в его поздней стадии сходен с таковым свежеприготовленных липосом (табл. 2). Динамика артериального давления у животных с геморрагическим шоком, которым вводили СТ-липосомы, была сходной с таковой нелеченых животных, а средняя продолжительность жизни составила в среднем 8,5 ч.

Таким образом, "пустые" ФХ-липосомы обладают значительным преимуществом по сравнению с другими известными корректорами геморрагического шока, что проявляется, в первую очередь, в их мембрано-стабилизирующем действии, сочетающемся с увеличением артериального давления до субнормального уровня и длительной его устойчивостью. Стабилизированные липосомы обладают эффективностью, равной свежеприготовленным липосомам, но в отличие от незащищенных липосом СТ-липосомы в течение длительного времени хранения оказывают лечебное действие, что позволяет решить трудности практического использования липосом.

В настоящее время нет средства для коррекции геморрагического шока столь же высоко эффективного и надежного, как предлагаемое. Липосомы в перспективе могут быть применены для профилактики геморрагического шока при массивной кровопотере, для оказания первой медицинской помощи на ранних и поздних стадиях геморрагического шока, а также в комплексной терапии геморрагического шока. Липосомы готовятся из дешевого природного сырья и их препарат может храниться минимум 12 месяцев.

Изобретение относится к области медицины и касается способа коррекции геморрагического шока. Для этого в организм вводят внутривенно в дозе 1,0 мл/кг массы тела препарат многослойных липосом, взятого в концентрации 0,5 мг/мл дистиллированной воды. Способ обеспечивает восстановление уровня перекисного окисления липидов в печени, фосфолипидного состава плазматических мембран гепатоцитов, а также мембранных фракций митохондрий продолговатого мозга и лобных долей больших полушарий головного мозга. 3 ил., 2 табл.

Способ коррекции геморрагического шока, отличающийся тем, что в организм внутривенно вводят в дозе 1,0 мл/кг препарат многослойных липосом, приготовленных из фосфатидилхолина, взятого в концентрации 0,5 мг/мл дистиллированной воды.