Способ определения супрессорной активности лимфоцитов,подавляющих образование реагинов Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

О

00 1ч9

сл

& 1116 Изобретение относится к медицинер в частности иммунологии. Целью изобретения является ускорение и упрощение способа. Пример. Мышей линии СВА иммунизируют внутрибрюпшнным введением 0,2 мл аллергена пьтьцы амброзии, содержащего 10 000 РШ/мл. Через 4872 ч животных забивают для получения клеток, селезенку или брыжеечные ли фоузлы дисперхируют с помощью препаровальных игл, фильтруют через нейлоновый фильтр, клетки селезенки освобождают от примеси эритроцитов путем щокирования дистиллированной водой, дважды отмывают средой 199 и ресуспендируют в ней клетки, доводя конечную концентрацию до 410 в 1 мл Аналогичным образом получают клетки тимуса йнтактных животных (конечная концентрация тимоцитов 8x10 клеток в 1 мл), Супрессорную активность индуцируют путем инкубации тимоцитов с неполипептидным диализабельным фактором тимуса в течение 1 ч при 37°С. После двукратного отмывания 4x10 тимоцитов в объеме 0,05 мл и 2x10 клеток-продуцентов Igf -антител в том же объеме среды 199 смешивают в одном шприце и вводят внутрикожно интактным крысам ( или мышам) - реципиентам. Метод, включающий внутрикожное введе.ние клеток продуцентов, позволяет выявить только клетки, образующие антитела, поскольку только иммуноглобулийы этого класса способны длительно сенсибилизировать кожу. В качестве .контроля вводят аналогичное количество клеток-продуцентов, смесь клеток6продуцентов и нормальных необработс-я| ньсс тимоцитов и клетки селезенки или лимфоузлов неиммунизированных мышей. Учет реакции проводят через 24 ч, сопоставляя участки посинения на внутренней поверхности кожи реципиентов в месте введения клеток через 40 мин после внутривенной инъекции смеси, состоящей из 0,5 мл 3%-ной синьки Эванса и 0,5 мл пьшьцевого аллергена амброзии, содержащего 20 000 PNU/мл. Диаметр посинения в месте введения клеток-продуцентов (2x10 ) 5,3+0,7 мм, в месте введения интактнык тимоцитов и клеток-продуцентов 6,1+0,4 мм, в месте введения продуцентов IgE -антител и клеток-супрессоров - не более 1 мм, такое же посинение отмечено и в месте введения клеток неиммуыйзированных животных. Таким образом, предложенный способ позволяет уже в течение 3-4 дней тестировать супрессорную активность лимфоцитов, подавляющих образование реагинов. При этом на одном и том же животном, используя одни и те же клетки-мишени (в данном случае тимоциты), можно тестировать супрессорную активность, индуцированную различными исследуемыми веществами, что позволяет использовать метод не только для изучения механизмов образования IgF -антител в эксперименте, но и использовать его в клинике для отбора препаратов, подавляющих образование Ig -антител, обусловливающих развитие аллергии немедленного типа.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУПРЕССОРНОЙ АКТИВНОСТИ ЛШФОЦИТОВ, ГОДАВЛЯЩИХ ОБРАЗОВАНИЕ РЕАГИНОВ, включающий совместное введение животнымреципиентам клеток-супрессоров с клетками-продуцентами, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, интактному реципиенту внутрикожно вводят при соотношении 2:1 клетки-супрессоры и 210 клеток-продуцентов, полученных через 48-72 ч после внутр1йр ошинного введения 0,2 мл аллергена пыльцы амброзии, и через 24 ч определяют содержание реагинов в месте введения клеток.