Способ получения антисыворотки против антигенной детерминанты 1-J @ рецептора Т-супрессоров Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Способ относится к экспериментальной биологии и медицине. Он может быть использован в исследовании механизмов регуляции иммунитета Т-суп--, рессорами in vivo и in virto путем высокоспецифического воздействия на эти клетки.

Целью, изобретения является повышение активности антисыворотки против Т-супрессоров, позволяющее при- . менять ее в более высоких разведениях.

Пример. Гибриды-реципиенты (ДВА/2ХЗК)Г , получают, скрещивая, самца ДВА/2 с тремя самками 3R. Для иммунизации используют гибридов F, обоего пола в возрасте 3 месяца.

Мьш5ам-донорам линии 5R, отличающимся от линии 3R только по аллелю

;,

субобласти I-J (мыши 5R несут аллель , мьааи 3R - I-J) , вводят внут- рибрюшинно 6-10 эритроцитов барана.

Через 1 неделю после введения зритроцитов барана мышей 5R забива- ют, готовят суспензию клеток селе- зенк;{ н эту суспензию вводят внутри- брюшинно реципиентам (ДВА/2 3К)Г, в дозе 10-10 клеток на цышь. Такую процедуру повторяют 7 раз с недельным интервалом. Через 10 дней после 7 иммунизации- у реципиентов берут кровь из ретроорбитального синуса в стерильных условиях, отстаивают 4 ч при 4 С до образования сгустка, центрифугируют сыворотку при 400 g 15 мин на холоде и получают антисыворотку.

4 -4

СЛ

СО

Для удаления антиидиотнпических И аутоантител полученную антнсыворот- Ку анти- I н j подвергали абсорбции. Абсорбцию проводили в течеиие 45 мин при 4 С на смеси клеток селезенки, Пимфоузлов и тимуса мышей-реципиеи- гов (ДВА/2ХЗЮР , предварительно за I иеделю до абсорбции получивших 1виутрибрюшинно 6 10 эритроцитов ба- jpaHa, т.е. прошедших TJ же обработку, то и мыши-доноры 5R при получении штисыБоротки. Для абсорбции 1 мл ,1нтисыворотки использовали 0,15 мл гпотного осадка (400 g, 20 мин) клеток реципиента при периодическом перемешивании. После проведения абсорбции аллоантисьюоротку освобождали от :орбирующих клеток (400 gp , 5 мин), разливали аликвотами по jiOO М1СЛ и хранили при -70 С до ис- Ьользования.

Во всех исследованных тест-систе- ах антисыворотка анти I-J , получен- ая предлагаемым методом, отменяла суспензию иммунного ответа, действуя

высокоспецифично, была активна в чрезвычайно малых дозах, а ее рабочее разведение в 5-10 раз превосходило имеющийся коммерческий препарат.

Формула изобретения

Способ получения антисыноротки

против антигеннгй детерминанты I-J рецептора Т-супрессоров путем иммунизации мышей-реципиентов клетками селезенки мышей линии .5R с последующим вьщелением сьшоротки крови,

отличающийся тем, что, с целью повышения активности антисы- вороткй, в качестве реципиентов используют гибриды мьш1ей СЦВА/2кЗК)Р, , а иммунизацию осуществляют клетками

селезенки тех же мьшей, предварительно стимулированных внутрибрюшин- ным введением иммуностимулируняцей дозы зритроцитов барана, далее после выделения сыворотки ее абсорбиру-,

ют теми же клетками селезенки сти- мулированных мышей линии 5R.

Изобретение относится к экспери- мент;1льной биологии и медицине. Целью изобретения является повьппение активности антисыворотки против Т- супрессоров. Гибрида 1-реципиентам (ДВА/2ХЗК)Р вводили клетки селезенки мьшей линии 5R, предварительно стимулированных внутрибрюшинным введением иммуностимулирующей дозы эритроцитов барана. Такую процедуру повторяют 6 раз с недельным интервалом. Через 10 дней после последней иммунизации берут кровь, вьщеляют сыворотку и адсорбируют ее теми же клетками селезенки мышей линии 5R. ПредложенньаЧ способ позволяет получить антисыворотку с резко усилен- .ной акти}зностью и иммуномодулирукЛди- ми свойствами для изучения механизмов регуля1 ,ии иммунного ответа субпо- пул.чции иммунокомпетентных клеток супрессорного ряда. Полученная антисыворотка активна в чрезвычайно малых дозах, а ее рабочее разведение в 5-10 раз превосходит имеющийся коммерческ1Ш препарат. с 9 (Л