Способ дифференциальной диагностики туберкулеза Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

CFd 00

ю сд

1 Изобретение относится к медицине в частност.; иммунологической диагно тике туберкулеза. Целью изобретения является повышение точности способа. Способ осуществляют следующим образом. В две силиконированные пробирки, содержащие по 0,1 мл гепарина (20 ед/мл), добавляют 0,1 мл крови. В контрольную пробирку (спонтанная реакция) вносят 0,1 мл физиологичес кого раствора, в опытную (стимулированная реакция) 0,1 мл предварите но разведенной физиологическим раст вором (1000 мкг/мл) вакцины БЦЖ. Обе пробирки выдерживают 3 мин при комнатной температуре, затем в каждую из них добавляют 0,1 мл 0,075%ного раствора нитросинего тетразолия. В течение 10 мин обе пробирки инкубируют на водяной бане при 37°С. По истечении времени инкубации постфиксируют инкубированную смесь в течение 3 мин, добавляя в нее 0,2 мл 50%-ного раствора формалина, разведенного в 0,9%-ном раств ре хлористого натрия. После этого добавляют 3,0 мл дистиллированной воды на 20 с, чтобы лизировать эритроциты. Для восстановления изотони в обе пробирки вносят по 1,0 мл 3,4%-ного раствора хлористого натри После отстаивания при комнатной тем 7 пературе в течение 10 мин центрифугируют 5 мин при 750 об/мин. После удаления недостаточной жидкости пастеровской пипеткой из осадка готовят мазки и высушивают их. Затем мазки фиксируют 30 с в спирт-формалине 9:1). Ядра докрашивают в 0,1%-ном растворе нейтрального красного, приготовленного на 0,5%-ном растворе хлористого натрия. Результаты оценивают путем изучения мазков под иммерсионной системой микроскопа. Подсчитывают 150-200 нейтрофипов и вычисляют процент НСТ-положительных клеток. К НСТ-положительным относят нейтрофилы с ясно определяемым отложением формазана в виде гранул и глыбок темно-синего цвета. Реакцию считают положительной при повышении процента реагирующих клеток в опытной группе в 1,5-2 раза и более по сравнению с контрольной. У больных туберкулезом в условиях стимуляции вакциной БЦЖ показатели НСТ-теста повьштаются и достоверно отличаются от показателей спонтанного теста. У здоровых и у больных с заболеваниями легких нетуберкулезной этиологии ответная реакция нейтрофилов на стимуляцию вакциной БЦЖ отсутствует, и показатели стимулированного НСТ-теста не отличаются от показателей спонтанного.

СПОСОБ Д1«4«РЕНЦИАЛЬНОЙ даь АГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА и неспецифических заболеван|Ш лёгких путем постановки реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-теста), о т личающийся тем, что, с целью повьшения точности способа, дополнительно ставят реакцию НСТтеста в присутствии БЦЖ и по повышению количества НСТ-положительнык нейтрофилов в 2 раза и более диагностируют туберкулез.