Способ определения поливинилового спирта в тканях на гистологическом препарате Советский патент 1985 года по МПК G01N1/28 A61B10/00 

1 Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки токсичности и качества выпускаемых образцов поливинилового спирта, предназначенного для использования в разны областях народного хозяйства. Целью изобретения является повышение точности способа. Способ осуществляют следующим об разом, Фиксируют кусочек ткани. Причем фиксацию ведут в растворе, содержаще 96-градусный этиловый спирт и форма лин в соотношении 9:1, после чего гистологический материал обезвоживают и заливают парафином. Приготавливают парафиновые срезы толщиной 5-7 р, которые затем окрашивают. При этом срезы до и после окраски помещают в 70--75-градусный этиловый спир при 33i3°C. Окраску проводят 1%-ным водным раствором конго красного. Пример 1. Кусочки ткани почек кры сы размером О,5О,5 см помещают в спиртоформол на 24 ч, после чего гистологический материал проводят - через одну порцию (обезвоживание), две порции -хлороформа и заливают парафином. Парафиновые срезы толщиной 5,6 и расправляют на 70%-ном спир те при , затем подсушивают их при комнатной температуре. Далее срезы депарафинируют, погружая их последовательно в 2 порции ксилола и 2 порции 96-градусного спирта. быстро споласкивают в воде и помещают срезы в 1%-ный водный раствор кон го красного на 3- мин, дифференцируют в 70-градусиом спирте, помещают в 2 порции 96-градусного спирта, 2 порци ксилола и заключают в канадский баль зам. В результате окрашенные капли полимера (иве) красного цвета ясно про слеживаются в извитых канальцах почек, цитоплазме дегенерирующих эпителиаль ных клеток и в просвете капилляров клубочков почек. Пример 2. Опыт проводят по примеру 1, но срезы приготовляют на 75-градусном спирте. Результат тождественен тому, кото рЬЕй показан в примере 1 . Пример 3. Опыт проводят по примеру 1, но срезы дифференцируют в 75-градусном спирте. Результат тождественен тому, который показан в примере 1. 622 Пример 4 (контрольный). Опыт проводят по примеру 1, но приготовленные срезы расправляют на 80-гра-. дусном спирте с температурой 33±3°С. В этом случае срезы мгновенно расправлялись на поверхности спирта, разрывались, а морфологические структуры повреждались, тем самым трудно было судить о наличии ПВС. Пример 5 (контрольный). Опыт проводят по примеру 1, но срезы расправляют на 60-градусном спирте с той же температурой. Расправить срезы удавалось с трудом, часть отложений ПВС вымывалась и на месте включений ПВС образовывались пустоты. Пример 6 (контрольный). Опыт проводят по примеру 1, но приготовление срезов осуществляют на 70-традусном спирте с температурой 26±3°С. В этом случае срезы не расправлялись и исследование морфологической картины под микроскопом невозможно было пр ов одит ь. Пример 7 (контрольный). Опыт проводят по,примеру 1, но срезы дифференцируют в 60 градусном спирте. В результате дифференцировки происходит окрашивание фона, что затрудняет оценку вложений ПВС. Пример 8 (контрольньш). Опыт проводят по примеру 1, но срезы дифференцируют в 80-градусном спирте.В результате дифференцировки происходит быстрое вымывание фона, что затрудняет оценку отложений ПВС. Пример 9. Приготавливают на замораживающем микротоме срезы почек толщиной 14/U, фиксацию осуществляют в фиксирующих растворах, состоящих из сульфата аммония и насыщенного раствора периодата калия в соотношении 1:1, в которые добавляют йодистый калий, последующую фиксацию проводят в 10%-ном водном растворе нитрата уранила, в который добавляют кристаллический иод. После этого срезы обрабатывают последовательно следующими растворами. Iраствор - 3 ч. абсолютного спирта + 7 ч. ксилола} IIраствор - 1 ч. абсолютного спирта + 9 ч. ксилола IIIраствор - ксилол. Смена растворов идет через 30 мин, во все растворы введен кристаллический йод. Окраска происходит во время

31

Всей фиксации гистологического материала. Затем срезы заключают в канадский бальзам,

В результате из-за толщины срезов затруднено распознавание мест отложений ЛВС в морфологических структурах,- из-за частичного вымывания полимера наблюдались пустоты в гистологическом срезе почек.

Пример 10. Крысам самцам вводили однократно внутрибрюшинно 10%-ный раствор ПВС с ММ 10000-12000 с содержанием ацетатных групп 5-15%. Окраску серийных срезов почек и селе зенки производили по методу Янксо в модификации В.П.Теодоровича и по предлагаемому способу (см.пример 1). В результате окрашивания гистологических серийных срезов по предлагаемому способу в просветах капилляров клубочков и извитых канальцев почек, а также в области красной пульпы селезенки обнаруживали капли ПВС во всех серийных срезах. При использовании метода Янксо в модификации В.П.Теодоровича были видны только отдельные капли полимера в единичных срезах. Количество выявленного ПВС по методу Янксо в модификации В.П.Теодоровича составило 20-30% от содержанич ПВС на срезах,окрашенных предлагаемым способом. Во всех срезах использован для окраски 1%-ный водньй раствор конго красного.

О непригодности 0,5 и 1,5%-ных водных растворов конго красного свидетельствуют такие примеры.

Пример 12 (контрольный). Опыт проводят по примеру 1, но срезы помещают в 0,5%-ный водный раствор конго красного на 3 мин. Концентрация раствора недостаточна для окра-

851624 .

шивания морфологических структур, содержащих ПВС, а дифференцировка обеспечивает гистологические срезы.

Пример 13 (контрольный). 5 Опыт проводят по примеру 1, но срезы помещают в 1,5%-ный водный раствор конго красного на 3 мин. Б результате опыта происходит интенсивное диффузионное окрашивание фона среза и отдифференцировать отложения ПВС оказалось невозможным.

Использованный в способе спиртоформол представляет собой смесь 9 ч. 96%-ного спирта и 1 ч. 40%-ного формалина.

Во всех примерах конкретно указаны органы животных (печень, почки), а также дано формологическое описание отложений ПВС даже в тех случаях, когда полимер откладывается в виде единичных капель.

В контрольных примерах в каждом случае указано,«к чему приводит нарушение режимов обработки гистологического материала.

Преимущества предлагаемого способа состоят в том, что благодаря минимальному контакту гистологического материала с водой в процессе проводки, фиксации и окраски ПВС не вымывается и мы обнаруживаем его полностью. Кроме того, исключается использование дефицитного, токсичного и радиоактивного нитрата уранила. Из-за химической токсичности естественного урана вдыхание урана любого изотопного состава в растворенной форме не должно превышать 2,5 в сут., а поглощение растворимого урана с пищей не должно превышать 150 мг в сутки.

Вместо четырех осевых реактивов используется один реактив - конго красный.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИВИНИЛОВОГО СПИРТА В ТКАНЯХ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ путем фиксации ткани, обезвоживания, заключения в парафин, приготовления срезов и их окрашивания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, фиксацию ведут в растворе содержащем 96-градусный этиловьй спирт и формалин в соотношении 9:1, а в качестве красителя используют 1%-ный водный раствор конго красного, при этом срезы перед окраской и после окраски помещают в 70-75-градусный этиловый спирт при 33i3°C. В