Способ приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований Советский патент 1986 года по МПК G01N1/30 A61B10/00 

t

О)

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к гистологии, эмбриологии, патанатомии, и может быть использовано для выявления стру турных компонентов органов, тканей. Цель изобретения - одновременное окрашивание всех структурных элементов среза, включая нервы. Способ осуществляется следующим образом. Берут исследуемый материал, помещают в 10-12%-ный нейтральный формалий на 1-3 сут и более, так как срок хранения в фиксаторе не ограничен. Промывают биоптат в проточной воде комнатйой температуры 1-6 ч, споласкивают в. дистиллированной воде. На замораживающем микротоме готовят срезы толщиной 10-50 мкм и помещают в чашку со свежей дистиллированной водой. Когда все срезы подготовлены и собраны в чашке с водой, их перенос в свежеприготовленный водно-спиртовой раствор красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении комп нентов, мас.%: 96 градусный этиловый спирт0,4-0,8 Краситель Гимза- Романовского4-11 ВодаОстальное Причем, и спирт, и краситель Гим за-Романовского вводят выводу капля ми. Помещенные срезы оставляют в кра сителе на 1-72 ч в зависимости от п ставленной цели и характера объекта например при окраске плотных срезов их помещают на 48-72 ч. Затем срезы извлекают, промывают в водопроводной вод-е до исчезновени синего окрашивания воды, споласкива в дистиллированной воде,, помещают н .предметное стекло, расправляют, обсушивают бумажным фильтром и заключают в глицерин или другую среду традиционным способом. При исследовании окрашенного гистологического препарата отчетливо выявляются попе речно-полосатые мышечные волокна,. сосуды, клеточные и неклеточные элементы тканей и нервы. Пример 1. Проводится гистологический анализ фрагмента органа., подлежащего оперативному вмешательст ву. Биоптат фиксируют в 10-12%-ном нейтральном формалине 1 сут, промывают в водопроводной воде 4 ч, споласкивают в дистиллированной воде, готовят срезы толщиной 10-50 мкм на замораживающем микротоме, переносят срезы в чашку со свежей дистиллированной водой на время подготовкивсех срезов, подлежащих окраске. Готовят водно-спиртовой раствор красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.%:96 градусный этиловый спирт0,4 Краситель ГимзаРомановского4Вода Остальное В приготовленный раствор помещают срезы на 48 ч. Затем срезы промывают водопроводной водой до исчезновения синего окрашивания воды, споласкирают дистиллированной водой, .помещают срез на предметное стекло, обсушивают бумажным фильтром, заключают в глицерин. Заключение: данный фрагмент органа неудачно выбран для оперативного вмешательства в связи с тем, что здесь проходят крупные нервы, окрашенные в фиолетовый цвет, артерии, встречается множество сосудов микроциркуляторного русла, стенки которых чрезвычайно тонки, эритроциты окрашены в желтоватый или розовый цвет; цвет межклеточного вещества изменяется от голубого до синего. I Необходимо изменить зону оперативного вмешательства. Пример 2. Окраску подготовленных ранее (см. пример 1) срезов ведут в водно-спиртовом растворе красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.%: 96-градусный этиловый спирт0 4 . Краситель ГимзаРомановского1 . Вода Остальное В приготовленный раствор помещают срезы на j1 -48 ч, а затем их промывают до исчезновения синего окрашивания промывочной воды и проводят все подготовительные операции для заключения окрашенных срезов в глицерин или другую среду. Заключение: данный фрагмент органа неудачно выбран для оперативного вмешательства в связи с тем, что видны артерия и ветвящийся нерв. Базапьная мембрана артерии голубоватая, мьтшечные клетки ее стенки голубые с синим ядром. Тучные кле связанные с артерией и нервом, ок шены в фиолетовый цвет. Межклеточ вещество серо-синее или розовое. Гистологический анализ подтверж ет: необходимо изменить зону опер тивного вмешательства. Пример 3. Окраску подгото ленных ранее (с.м. пример 1) срезо ведут в водно-спиртовом растворе к сителя Гимза-Романовского, при сле ющем составе компонентов мае.: , 96-градусный этиловый спирт0,8 Краситель ГимзаРомановского7Вода , В приготовленный водно-спиртово раствор красителя помещают срезы н 1-48 ч, затем их промывают до исчезновения синего окрашивания пром ночной воды. Далее ведут все подго вительные операции для заключения окрашенных срезов в глицерин или a гую среду. При микроскопировании срезов от четливо видны нервы, окрашенные в фиолетовый цвет, сосуды, клеточные и неклеточные элементы тканей. Пример 4. При вскрытии кош ки через 40 мин после воздействия лазерным излучением или электрическим, током берут образец (язык, кожа подкожные мьш1цы и т.д.) фиксируют в 10-12%-ном нейтральном формалине 3 сут, промывают образцы 3 ч в проточной воде, споласкивают в дистиллированной воде. Готовят на замораживающем микротоме срезы толщиной 15-50 мкм и переносят 50-70 срезов в чашку Петри с чистой дистиллировйнной водой, а затем - на 42 ч в сосуд со свежеприготовленным водноспиртовым раствором красителя Гиыза Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.%: 96-градусный этиловый спирт0,79 Краситель ГимзаРомановского11Вода Остальное Далее окрашенные срезы промывают в водопроводной воде до исчезновения синего окрашивания промывочной воды и споласкивают в дистиллированной воде. Помещают окрашенный срез на предметное стекло, расправляют, обсушив его бумажным фильтром, заключают в глицерин или другую среду. При микроскопическом изучении срезов установлены реактивные изменения нервов, сосудов и соединительных элементов. Заключение: используемые параметры воздействия вызывают адаптационно-, трофические изменения в составе тканей и органа. При окраске в течение 24 ч видны нервы без признаков деструктивных изменений, окрашенные в темно-фиолетовый цвет; сосуд (артериола) , клетки мьш ечной оболочки Голубоватые со светло-синим ядром; активные клетки с признаками дегрануляции. Их цитоплазма интенсивно окрашена в фиолетовый и темно-красный цвет. Межклеточное вещество голубоватосерое. При окраске в течение 72 ч виден нерв; полнокровная венула и форменные элементы крови в ней; артериола с уплотненной базальной мембраной, тучные клетки с прийн.аками дегрануляции; межклеточное зещество с извитыми коллагеновыми волокнами.Нерв окрашен в фиолетовый цвет. Базальные мембраны сосудов темнофиолетовые или синие. Тучные клетки имеют разные оттенки и цвета в зависимости от их использования. Встречаются темно-фиолетовые, сиреневые, те№но-красные.- Эритроциты крови розовые или желтоватые, ядра лейкоцитов голубые, зернистость специфическая. Гладкомьш1ечные клетки артериолы голубые со светлым синим ядром. Ядра соединительных клеток голубые. Межклеточное вещество от бледно-голубого до интенсивного синего, встречаются участки межклеточного вещества, окрашенного в розовый цвет. Использование предлагаемого спосо-. а приготовления гистологических репаратов для микроскопи 4еских иследований позволяет обеспечить 00Z-Hoe выявление нервов по сравнеию со всеми известными способами риготовления гистологических препаатов для микроскопических исследоаний с выявлением всех структурных лементов ткани.

Формула изобретения

Способ приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований путем фиксации ткани р. формалине, изготовления замороженных срезов с последующим их окрашиванием и промывкой, отличающийся TeMj что, с целью одновременного окрашивания всех структурных элементов

ткани, включая нервы, окраску проводят в течение 1-72 ч в растворе,содержащем этиловый спирт, краситель Гимза-Романовского, воду при следующем соотношении компонентов, мас.%: 96-градусный этиловый спирт0,4-0,8

Краситель ГимзаРомановского4-11Вода Остальное

Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения - одновременное окрашивание всех структурных элементов среза, включая нервы. Ис- следуемьй материал помещают в формалин. Промывают биоптат в проточной воде, споласкивают в дистиллированной воде. Затем готовят срезы и помещают их в чашку сосвежей дистиллированной водой. Готовят раствор красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов (мас.%): этиловый спирт 0,4-0,8, краситель Гимза-Ромйновского 4-11, вода остальное . Спирт и краситель Гимза-Романовского вводят в воду каплями. В этот раствор помещают срезы на 1-72 ч. После этого срезы промывают водопровод- Q S ной водой, споласкивают. Помещают (Л срез на предметное стекло, обсушивают и заключают в глицерин.