Способ определения концентрации сердечных гликозидов в крови больного Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 G01N33/15 

Изобретение относится к медицине в частности к кардиологии, и может быть использовано в клинической лабораторной диагностике.

Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа.

Пример. У больного берут 2м крови в пробирку с ЭДТА, затем кров центрифугируют. Процесс экстракции сердечнык гликоэидов в плазме донора со стандартными концентрациями сердечного гликозида и в плазме больного производят путем воздействия на плазму дихлорметаном в соотношении 1:3.Содержимое пробирок смешивают миксером и центрифугируют 5:5,5 мин на 1000 . Затем 0,4 мл нижнего слоя смеси из пробирок переносят в пробирки 70x10 мм и выпаривают на водяной бане при 50-62 0 в течение 15 мин. После этого добавляют 0,1 мл суспензии донорских эритроцитов5 отмытых в физиологическом растворе, осторожно смешивают и инкубируют в термостате при 37 С в течение 40 мин. По окончании инкубации субстрат охлаждают при 4-6 С в течение 5 мин, а затем вновь повышают до 24-25 с. Отдельно в полистиреновые пробирки берут 0,4 мл стандартного раствора АТФ в трисЭДТА буфере (0,1 М, рН 7,75), при этом получают раствор АТФ, разбавленный в 4 раза с концентрацией 10 моль/л и добавляют 0,2 мп АТР Monitorig Reagent (люциферин - люциферазная система). Проводят контрольное измерение АТФ на люминомет.ре-1250 (1KB Wallac), а затем вводят эту смесь в пробирки с донорскими эритроцитами, прошедшими инкубацию со стандартами сердечного гликозида и с пробой больного. Через 15 мин после смешивания реакцию останавливают путем центрифугирования на 1000 в течение 3 мин. Проводят измерение на люминометре-1250. При использовании указанного люминометра 1 мВ потока света соответствует О,1 нмоль АТФ, Рассчитывают скорость распада АТФ по формуле

К - К V 30 нмоль/мин,

где V - скорость распада АТФ в

нмоль/мин,

К - количество АТФ в начале реакции,

К - количество АТФ в конце реакции.

t - время реакции. По значениям скорости распада АТФ в зависимости от стандартной концентрации сердечных гликозидов строя калибровочный график и определяют концентрацию сердечных гликозидов.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ В КРОВИ БОЛЬНОГО путем экстракции сердечных гликоэидов из плазмы крови дихлорметаном с последующим добавлением к экстракту суспензии донорских эритроцитов и инкубации, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повьшения точности способа, инкубацию проводят в течение 40 мин, после чего добавляют стандартный раствор АТФ с люциферин - люциферазной системой в соотношении 1:3, рассчитывают скорость распада АТФ по формуле V г где V - скорость распада АТФ в ё НМОЛЬ/МИН, К - количество АТФ в начале ре(Л акции; К,, - количество АТФ в конце реакс ции; t - время реакции и графически определяют концентрацию сердечных гликозидов в зависимости от скорости распада АТФ. 00 --1