Способ определения барбитуратов в биологических жидкостях Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

центрированной соляной кислотой (0,6 мл. Hct на 0,5 водной фазы). Далее добавляют сернокислый безводный натрий до полного связывания водной фазы (3-4 г и более), Содержимое пробирок энергично встряхивают в течение 1 мин. Затем проводят реэкстракцию и очистку, для чего хлороформные вытяжки отфильтровывают и берут по 6 мл в две пробирки с притертыми пробками. Туда же добавляют по 4 мл 0,1 н. раствора NaO Пробирки энергично встряхивают в те чение 1 мин, после чего проводят спектрофотометрические измерения. Для быстрого разделения слоев пробы центрифугируют при, 3000-5000 об/мин в течение 10 мин. Осторожно, не нар шая границы раздела двух слоев, пип кой отбирают по 3 мл верхнего щелоч ного слоя из каждой пробирки и пере носят в прямоугольные кварцевые кюветы с толщиной слоя 10 мм. В контрольную кювету наливают 3 мп 0,1 н. раствора NaOH.Во всех трех кюветах с опытным, стандартныгл и контрольным растворами рН был равен 13,0. Определяют величины оптической плот ности при следующих длинах волн: 22 232., 235, 240, 247, 249, 252, 260 и 270 мкм без светофильтра с водородной лампой и сурмяноцезиевым фотоэлементом против контрольного раствора. Добавляют в кюветы, включая контрольную, по 0,44 мл боратного . раствора. При этом рН становится ра ной 10,0. Сноваопределяют оптическую плотность при тех же длинах волн. Объем добавленного баратного . раствора может быть иным. Содержание барбитуратов вычисляют по разнице оптической плотности при рН 13,0 и 10,0 и п 260 мкм. Пример. На исследование были взяты пробы крови больного, отрав ленного люминалом, и донорская кровь экспериментально затравленная вероналом и нембуталом. Пробы крови цент рифугируют для получения плазмы. Затем в первую пробирку помещают по 2 мл плазмы, затравленной вероналом, во вторую - затравленной нембутсшом, в третью - плазму больного, отравленного люминалом. Для очистки плазмы от сопр вождающих веществ, мешающих определе нию, во все пробирки добавляют по 1-1,5 мл оливкового масла. Встряхиваниен в течение 1 мин проводят инкубацию плазмы с оливковым маслом Затем пробы центрифугируют в течение 1 мин при 1000 об/мин. Следующим этапом проводят изолирование веронала, нембутсша и люминала. В шесть пробирок на 10-20 мл наливают по 8 мл хлороформа, в три из них перено сят по 1мл плазмы из первой, второй и третьей пробирок. В три другие такой же объем стандартного раствора веронала, нембутала и люминала, разведенных 0,1 н. раствором МаОН до предполагаемой концентрации. Затем содержимоепробирок подкисляют концентрированной соляной кислотой. Далее добавляют сернокислый безводный натрий до полного связывания водной фазы. Содержимое пробирок энергично встряхивают в течение 1 мин. Затем проводят очистку и реэкстракцию. Хлороформные вытяжки отфильтровывают и берут по 6 мл в шесть пробирок с притертыми пробками. Туда же добавляют по 4 мл 0,1 н. раствора NaOH. Пробирки энергично встряхивают в течение 1 мин. После чего проводят спектрофотометрические измерения. Предварительно пробы центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 10 мин. Затем пипеткой отбирают по 3 мл верхнего слоя поочередно из каждой бирки и переносят в кварцевые кюветы спектрофотометра. Измерения проводят в три этапа. Первый этап исследуются пробы с вероналом, стандартным раствором веронала, второй этап - пробы с нембуталом, стандартным раствором нембутала, третий этап - пробы с люминалом, стандартным раствором люминала, в кс1нтр6льные кюветы во всех трех этапах наливают по 3 мл 0,1 н. раствора NaOH. Определяют величины оптических плотностей при длинах: 228, 232, 235, 240, 247, 249, 252, 260 и 270 мкм сначала при рН 13,0. Затем добавив по 0,44 мл боратного раствора во все кюветы, включая и контрольные, измеряют оптическук плотность при рН 10,0. После проведения исследования содержание экстрактивных веществ, мешающих спектрофотометрическим измерениям, резко снижается. Это приводит к получению кривой спектра поглощения исследуемого барбитурата к эдентичному соответствию кривой спектра поглощения чистых растворов, растворов барбитуратов в воде Предложенный способ является брлее точным, позволяет в результате однократного исследования, обеспечи-: вающего практически полное отсутствие веществ, мешакадих определению, получить классическую барбитуровую кривую, позволяющую дать качественную и количественную оценку содержания препарата в крови. Кроме того, получение классической точной, кривой спектра барблтуратов позволяет в ряде слу4аев устранить . операцию качеср венного определения при установлении принадлежн.ости неизвестного вещества к классу барбитуратов. Формула изобретения Способ определения барбитуратов биологических.жидкостях путем их

59645326

выделения, очистки и реэкстракции Источники информации, целевого продукта с последующимпринятые во внимание при экспертизе спектрофотометрированием пробы, отличающийся тем, что, с1. Кокшарова Н.В Хроматография целью повышения точности способа, био-,. в тонком слое как метод определения логическую жидкость предварительно5 барбитуратов при химико-токсикологиинкубируют с оливковым маслом в те-ческих исследованиях, м., Медицина, чение 1-1,5 мин.,1966,,с. 3.