Способ определения активности нейронов головного мозга на электронно-микроскопических препаратах Советский патент 1986 года по МПК G01N1/30 A61B10/00 H01J37/20 

Изобретение относится к медицине, в частности к нейропатоморфологии.

Целью изобретения является повышение точности способа путем морфо- метрии синапсов.

Способ осуществляют следующим образом.

Мелкие кусочки мозга (коры, серых узлов) обрабатывают общепринятым методом электронно-микроскопического исследования (осмиевая фиксация, заключение в аралдит.и т.д.). При фотографировании желательно заснять все виды (аксосоматические, аксодендри- тические и аксоаксональные) синапсов. Электронограммы делают размером 18- 24 см путем измерения (в миллиметрах) длины гиперосмированных зон и всей синаптической поверхности линий контактов пре- и постсинаптических мембран. На электро ограммах измеряют линии сечения, которые условно можно считать диаметром кр угообраз- ной площади гиперосмированных зон и поверхности синапса. В действительности эти поверхности почти никогда не являются геометрическим кругом и диаметр в одних случаях в зависимости от среза будет меньше, а в других - больше истинного диаметра той фигуры, которая образуется в области контакта пре- и постсинаптических мембран. Однако при подсчете нескольких десятков случаев по закону больших чисел ошибка настолько минимальна, что это отклонение не будет иметь практического значения. Активные зоны на электронограм- мах принято, определять по гиперо- смиофилии мембран и синаптической щели, которые легко выявляют на сравнительно прозрачном фоне.

Активность нейронов каждого сиDisнапса вычисляют по формуле ПА

i ПС

X 100%, где ПА - показатель активнос- ти, процент ; DO.-, - диаметр (длина сечения) активной зоны; ,- диаметр поверхности синапса (контакта).

Соотношение площйдей кругов равно соотношению-их диаметров или длины .сечений йа электронограммах в квадрате.

-.0, .а rm §1. Ж5:1 --2 « -1- в 51OTRi

ЗГ(2)

tek.

4

Ч

или

Di«JL DVb

0

5

Увеличение на электронограммах не играет роли, так как соотношение длины активных и неактивных зон при этом не меняется. В связи с тем, что линия сечения синаптической поверхности ка фотографиях, как правило, не прямолинейная (а дуго- и/или зигзагообразная) , ее можно измерять обычным легкодоступным курвиметром. При этом для реальной точности вычисляют площади гиперосмированных зон не квадратом суммы диаметров отдельных активных зон (когда их несколько) , а суммой квадратов диамет- 5 ров отдельных активных зон (суммой квадратов диаметров), т.е. общая площадь активных зон (в числителе) составляет сумму D, + D +...+D,, а не (D.+ Da+.. .+D)2 .

Полученные цифровые данные (показатели отдельных синапсов в процентах) обрабатывают методом вариационной статистики. Вычисляют средний показатель активности данного очага или популяции всех нейронов..

Пример. Больной 48 лет, клинический диагкоз: опухоль лобно-те- менной области с фокальной эпилепсией. На одном аксодендритическом синапсе нейроцита эпилептического определены гиперосмированных зон диаметром 22 и 19 мм и длина се- синаптической поверхности, (контакта) 62 мм. Показатель активности нейронов данного синапса равен: ПА 21,т.

Цифровые данные (показатели в процентах) обрабатывают методом ва-j рационной статистики. Вычисляют сред- 0 НИИ показатель активности нейронов г, данного очага или популяции нейроиов. В зав1гсимости от цели иследования (Результаты подсчетов следует сгруппировать и выявить средние показа- 5 Iтели для каждой группы аксодендри- тические аксосоматические и аксона льных сигналов.

Визуальное исследование не дае1г; возможность определить степень структурной перестройки нейрона и их синапсов при различных состояниях ЦНС.

Активацию синапсов следует считать единственным морфологическим критерием определения морфофункщю- нального состояния популяции нейронов при состояниях организма, хара- ктеризукнцихся повьппенной реакцией (эпиприпадки, судорожные состояния).

0

5

0

55