Способ фиксации ткани миокарда Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и может быть использовано для изучения ультраструктуры миокарда и при проведении биохимических исследований. Цель изобретения - предотвращение артефициального катаболизма макроэргических фосфатов в ткани миокарда путем перфузирования фиксирующего охлажденного раствора в полос левого желудочка в области верхушки сердца до полной его остановки. Способ осуществляют следующим образом. После введения животного в нарко быстро вскрывают грудную клетку. В полость левого желудочка в области верхушки сердца животного через иглу с диаметром канала 1-3 мм, одету на шприц, вводят охлажденный до (-2)-0С. фиксирующий раствор в объе ме, 70-75% полного объема полости )левого желудочка сердца в каждую се , кунду в течение 5-7 с до полной оста новки сердца. Пример. Кролика весом 2,5 кг вводят в наркоз, быстро вскрывают грудную клетку по передней поверхности. Извлекают из холодильника шприц, содержащий 20 мл охлажденного до (-2)-0С 4%-ного раствора параформальдегида на 0,1-0,2 М фосфатном буфере, содержащем 1-1,5% сахарозы (рН 7,2-7,4), одевают на него иглу с диаметром канала 1,5 мм и вводят ее в полость левого желудочка в области верхушки сердца. Через эту иглу раст вор охлажденного параформальдегида подается в полость левого желудочка в количестве 70-75% его полного объе ма в секунду. Продолжительность такой перфузии сердца 5 с. Через 5 с сердце остановилось и перфузирование прекращают. Затем сердце извлекают из грудной клетки, ножницами расчленяют его на две части и выполняют комплекс манипуляций, требующихся для проведения соответствующих морфологических и биохимических исследо ваний, пользуясь соответствующими методиками. Для морфологического исследования ультраструктуры кардиомиоцитов мелкие кусочки ткани (2-1 мм ) дофиксируют в 1%-ном забуференном растворе глютаральдегида, обезвоживают и заключают в эпон или аралдит по общепринятой методике с последующим стереологическим анализом электроннограмм, полученных при фотографировании ультратонких срезов в электронном микроскопе. Для определения креатин-фосфата вторую часть сердца весом 300 мг замораживают в лшдком азоте, затем растирают в металлической ступке в порошок и добавляют 1 мл 6%-ной НСЮ и 2 мл 5 мМ трис-НС буфера. Титруют 5 н. HjCOj до нейтрального рН. Затем центрифугируют в течение 10-15 с при 3-4 тыс. об/мин. Из супернатанта отбирают 0,1 мл, доводят бидистиллированной водой до 3 мл, добавляют 0,5 мл 0,05%-ного диацетила и 1 мл раствора -нафтола. Через 30 мин смотрят на спектрофотометре при длине волны 525 нм свободньй креатин. Для определения общего креатина к О,1 мл супернатанта добавляют 1 мл 0,1 н. НС1 и помещают на 10 с в водяную баню при . Затем пробы охлаждают, добавляют 1 мя 0,1 н. NaOH, доводят объем до 3 мл водой, добавляют 0,5 мл диацетила и 1 мл Д;-нафтола. Получают общий креатин. Затем определяют креатин-фосфат по формуле: общий креатин - свободный креатинкреаТин-фосфат. Содержание креатин-фосфата в тка- ни миокарда, фиксированной предлагаемым способом, определяют у кроликов . контрольной и опытной групп (внутривенно вводят вазопрессин в дозе 0,2 ед/кгдля воспроизведения острой коронарной недостаточности, при которой резко снижаегся содержание креатин-фосфата) . Для сравнения в аналогичных груп пах определяют содержание креатинфосфата в ткани миокарда, фиксированной известным способом. В каждую из 4 групп входило 6 кроликов, идентичных по полу, возрасту и существенно не отличающихся по весу (2,5-3 кг) (табл. 1 и 2). Использование способа предотвраает артефициальный катаболизм и возникновение дефектов, ограничиващих морфометрический анализ ультраструктуры кардиомицитов, что позвояет проводить на одном органе качественные морфометрические и биохимические исследования с получением стабильных воспроизводимых результатов, более близких к истинным.значениям . ,12640 , концентрации изучаемого соединения в ткани миокарда. .. Формула изобретения5 Способ фиксации ткани миокарда путем перфузии в сердце охлажденного фиксирующего раствора 4%-ного пара- 10 формальдегида в 0,1-0,2 М фосфатном Содержание креатин-фосфата в

Таблица 1 миокарде, ммоль/г, при фиксации ткани миокарда 37 4 буфере, содержащем 1% сахарозы, о т личающийся тем, что, с целью предотвращения артефициального катаболизма макроэргических фосфатов в ткани миокарда, раствор охлажденного фиксатора вводят 5-7 с в полость левого желудочка в области верхушки сердца до полной остановки сердца, при этом в каждую секунду вводят раствор в объеме 70-75% полного объема левого желудочка сердца. способом

Изобретение относится к области медицины, а именно, к кардиологии, и может быть использовано для изучения ультраструктуры миокарда.и биохимических исследований. Цель изобретения - предотвращение артериального катаболизма макроэргических фосфатов в ткани миокарда. После введения животного в наркоз быстро вскрывают грудную клетку, в полость левого желудочка в области верхушки сердцаживотного через иглу с диаметром канала 1-3 мм, одетую на шприц, вводят охлажденный до (-2)0°С фиксирующий раствор в объеме 70-75% полного объема полости левого желудочка сердца в каждую секунду в течение 5-7 с до полной остановки сердца. Для морфологического исследования ультраструктуры кардиомиоцитов мелкие кусочки ткани дофиксируют в 1%-ном забуференном растворе с глютаральдегида, обезвоживают и за- ключают по общепринятой методике с АЛ последующим стереологическим анализом электроннограмм. 2 табл.