Способ определения противовоспалительной активности Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для скрининга противовоспалительных веществ, обладающих гепатотропной активностью. Цель изобретения - повышение точ ности способа для оценки гепатотроп ных средств за счет использования в качестве агента, вызывающего воспаление, зимозана и оценки противовос палительных свойств по степени торм жения мононуклеарной инфильтрации. Способ осуществляется следующим образом. Зимозан - дрожжевой полисахарид из Saccharotnyces cerevisiae в дозе от 0,02 до 2 мг в 0,5 мл 0,85%-ный NaCl на мышь линии (СВАхС57В1) F весом 18-22 г вводят внутривенно после его предварительной гомогенизации. Забой осуществляется путем декапитации через 2,5,9,15 и 21 сут после введения зимозана. Кусочки печени фиксируются в смеси Карнуа, заливаются в парафин, после чего делают срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивают гематоксилин-зозином. Через 2 сут после внутривенного введения зимозана в печени образуются мононуклеарные инфильтраты, занимающие 3-5% площади среза печени. Через 5 сут площадь, занимаемая ими, составляет 20-25% площади среза печени В это время мононуклеарные инфильтра ты четко выражены, имеют очерченные границы. Пик мононуклеарной инфильтрации приходится на 9-е сут, когда площадь, занимаемая мононуклеарньвж инфильтратами, составляет 30-35%, после чего происходит постепенное обратное развитие процесса. Морфологическая картина, наблюдаемая на срезах печени после введения зимозана, идентична морфологической картине мезенхимально-воспалительного синдрома, развивающегося при вирусном гепатите. Морфометрия площади, занимаемой мононуклеарными инфильтратами, осуществляется по Автандилову Г.Г. в 50 полях зрения. Испытуемый препарат вводят в живой организм в фармакологической дозе за 2 ч до, через 2 ч после или .через 5 сут после введения зимозана Антивоспалительные свойства вещества оценивают по торможению наступления мононуклеарной инфильтрации в первом и втором случаях и по снижению уровня инфильтрации на 6-9-е сут в третьем случае. Пример 1. В опыте мыши весом 20 г линии (СВАхС57В1) F внутрибрюшинно вводят стандартный препарат гидрокортизона в дозе 1,25 мг/10 г массы тела, т.е. в среднем на мьшь вводится 2,5 мг гидрокортизона. Через Z ч вводят зимозан в дозе 1мг/10 г массы тела, в среднем 2 мг на мьщ1Ь в 0,5 мл 0,85% NaC. Через 2сут мышей забивают путем декапитации,- забирают кусочки печени, фиксируют в смеси Карнуа, заливают в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивают гематоксилин-зозиноми исследуют на наличие мононуклеарных инфильтратов. В этом случае мононуклеарные инфильтраты не обнаруживаются. Контролем служат мьши той же линии, которым вместо гидрокортизона вводится 0,85%-ный NaCf и зимозан по той же схеме, что и в опыте. В контроле мононуклеарные инфильтраты занимают 3-5% площади среза печени. Другой :.: контрольной группе мьшзей вводят только гидрокортизон, в печени инфильтратов не обнаруживают. По отсутствию мононуклеарньк инфильтратов в печени у мьш5ей, получающих зимозан через 2 ч после введения гидрокортизона, заключают, что гидрокортизон оказывает антивоспалительное действие. Пример 2. Гидрокортизон, введенньй через 2 ч .после введения зимозана, при ана логичных условиях описанных в примере 1, также оказывает антивоспалительное действие, т.е. мононуклеарные инфильтраты в печени через 2 сут отсутствуют. Пример 3. Гидрокортизон вводят через 5 сут после введения зимозана, т.е., на фоне вьфаженной мононуклеарной инфильтрации. Забой животных осуществляют через 1,2,3 и 4 сут после введения гидрокортизона. В контроле вводят 0,5 мл 0,85%-ного NaCl через 5 сут после введения зимозана. В опыте введение гидрокортизона приводит к обратному развитию мононуклеарной инфильтрации в первые же сутки после его введения, в то время как в контроле она продолжает нарастать до 9 сут после введения зимозана. По обратному развитию мононуклеарной инфильтрации,.не достигшей своего пика, заключают, что гид31рокортизон оказывает антивоспалитель ное действие. Использование предлагаемого способа для скрининга гепатотропных пре паратов для оценки их антивоспалительных свойств обеспечивает по срав нению с известным способом для скрининга антивоспалительных веществ на модели карагинанового воспаления следуюп;ие преимущества: способ более достоверен, так как включенная в способ эимозановая модель обеспечивает развитие воспалительного процес са в печени, ближе воспроизводит реальную ситуацию, развивакяцуюся при вирусном гепатите, поскольку воспроизводит один из главных морфологических признаков вирусного гепатита, каким является мононуклеарная инфильтрация .. Кроме того, предлагаемый способ прост в исполнении и для 464 количественной оценки воспалительного процесса.. Формула изобретения Способ определения противовоспалительной активности путем введения животным вещества, вызывающего воспаление, с последующим введением испытуемого вещества, взятием пунктата «чага воспаления и оценкой противовоспалительной активности испытуемого вещества по степени торможения клеточной инфильтрации, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа для оценки гепатотропных средств, в качестве агента, вызывающего воспаление, используют зимозан, а противовоспалительные свойства оценивают -по степени торможения мононуклеарной инфильтрации.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии, может быть использовано для скрининга противовоспалительных веществ, обладающих гепатотропной активностью. Цель изобретения - повышение точности способа путем использования в качестве агента, вызывающего воспаление, зимозана и оценки противовоспалительных свойств. Для этого зимозандрожжевой полисахарид из Saccharomyces cerevisiae в 0,85%-ном растворе NaCl вводят подопытным животным (мы, шам) внутривенно после его предварительной гомогенизации. Забой осуществляют путем декапитации через 2,5, 9,15 и 21 сут после введения зимозана - кусочки печени фиксируют в смеси Карнуа, заливают в парафин к делают срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивают гематоксилин-зозином. В печени через 2 сут после введения зи- мозана образуются мононуклеарные инфильтраты, занимающие 3-5% площади среза печени, через 5 сут площадь с инфильтратами - 20-25%, они четко выражены. Пик инфильтрации - на 9-е сут, площадь ее 30-35%, после чего идет обратный процесс. Испытуемый I препарат вводят в живой организм в фармакологической дозе за 2 ч до, (Л через 2 ч после или через 5 сут после введения зимозана. Антивоспалительные свойства вещества оценивают по торможению наступления мононуклеарной инфильтрации в первом и втором случаях и по снижению уровня инфильтрахщи на 6-9 сут в третьем случае.