Способ моделирования стрессорных повреждений миокарда Советский патент 1986 года по МПК G09B23/28 

ю

IN9

00

4

00 Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной патологии, и может быть использовано для воспроизведения в эксперименте заболеваний сердечно-сосудистой системы. Целью изобретения является воспроизведение вялотекущего дистрофического процесса путем внутривенного введения натриевой соли циклического 3,5-аденозинмонофосфата. Способ осуществляют следующим обраИммобилизированному животному производят инъекцию в вену хвоста, предварительно расширенную путем согревания. Вначале вводят 1%-ный раствор кофеинабензоата натрия из расчета 2,5 мг на 100 г массы тела животного, затем через 3-5 мин внутривенно вводят свежеприготовленный 10%-ный раствор натриевой соли 3,5-аденозипмонофосфата из расчета 10-20 мг на 00 г массы тела животного. Пример 1. Крыса белая беспородная, самец массой 180 г. Крысу иммобилизируют. Хвост животного согревают в теплой воде 45-50°С) для расширения вен хвоста. В боковую вену хвоста шприцом медленно в течение 1 мин вводят 0,45 мл 1%-ного раствора кофеина-бензоата натрия. Через 3 мин в вену хвоста медленно в течение 1 мин вводят свежеприготовленный на воде для инъекций 10%-ный раствор натриевой соли циклического З З-аденозинмонофосфата в количестве 0,18 мл (10 мг на 00 г массы тела). После инъекции животное находилось в клетке. Крысу умертвляют декапитацией под легким эфирным наркозом через 15 мин после инъекции. Сердце останавливают погружением в охлажденный физиологический раствор (4°С). Из боковых стенок правого и левого желудочков и межжелудочковой перегородки через всю толщу миокарда продольно иссекают кусочки для фиксации в формалине и для низкотемпературного хранения. Кусочки, фиксированные в 10%-ном забуференном формалине, заливают в парафин и серийные срезы толщиной 5 мкм окрашивают гематоксилином и эозином; гематоксилином - основным фуксином - пикриновой кислотой (ГОФП). Для гистохимических и гистоэнзимологических исследований кусочки миокарда замораживают в изооктане, охлажденном жидким .азотом и на параллельных криостатных срезах толщиной 10 мкм вьшпляют липиды по Zison, активность мопояминоксидазы (МАО), я-глицерофосфатдегидрогеназы (аГФДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), сукцкнатдегидрогеназы (СДГ), изоцитратдегидрогеназы (ИДДГ), НАД- и НАДФ-дегидрогеназ, р-оксибутиратдегидрогеназы ( ОБДГ) методами с использованием солей тетразолия (ТНСТ); кислой фосфатазы по Burstone. Для исследования состояния сокрг.тительного аппарата кардиомиоцитов используют метод поляризационной микроскопии. Степень контрактурных изменений кардиомиоцитов оценивают по известным критериям. При изучении полученного материала в миокарде боковых стенок левого и правогожелудочков и, в меньшей степени, межжелудочковой перегородки выявляют измеиения структуры, гистохимические и гистоэнзимо,погические особенности кардиомиоцитов. В сократительном миокарде преимущественно боковой стеики левого желудочка и межжелудочковой перегородки обнаруживают группы кардиомиоцитов и отдельные клетки с полярнзационно-микроскопическими признаками контрактурных повреждений , И и 1И степени. Кардиомиоциты с сегментарными контактурами М-II степени выглядят несколько укороченными, саркоплазма их не выявляет поперечную и продольную исчерченность, окрашивается базофильно и обнаруживает фуксииоррагию при окраске ГОФП, которая свидетельствует о нарушении проницаемости сарколеммы. Клетки сократительного миокарда с сегментарными контрактурными изменениями I степени и субсегментарными контрактурами отличаются неравномерной эозииофилией н так называемой «бусовндной и «зональной фуксиноррагией. Гистохимические особенности контрактурно поврежденных клеток вклк чают также перераспределение гранул диформазана вдоль мышечных волокон при выявлении ферментов, локализованных н митохондриальных мембранах (СДГ, рОБДГ, НАД-дегидрогеназа), что может быть отражением смещения митохондрией из зон контрактуры. В целом гистохимические и гистоэнзимологические изменения миокарда свидетельствуют о быстрой утилизации внутриклеточных запасов гликогена и угнетении активности ряда оксидоредуктаз, в особенности связанных с пластическим обменом (НАДФ-эавнсимой ИЦДГ, Г-6-ФДГ, НАДФдегидрогеназы) и обменом катехоламиков (МАО). Акт+1вность ферментов цикла Кребса, р-окисления жирных кислот и дыхательной цепи (СДГ, р-ОБДГ, НАД-дегндрогеназа) близка к таковой у интактных животных. Изменения гемомнкроциркуляцнн в изученном материале были незначительны, в виде единичных, расширенных, переполненных кровью венул н капилляров. Пример 2. Крыса белая беспородная, самец массой 220 г. Методика проведения эксперимента и используемые гистологические, гистохимические и гистоэнзимологические методы иccлeдoвaF ия соответствуют опигсанным в примере I. Раствор кофенна-бензоата натрия вводят в количестве 0,55 мл, раствор натриевой соли циклического 3,5-адено,инмонофосфата - в количестве 0,22 мл (12 мг на 100 г массы тела). Крысу умерщвляют через 3 ч после инъек-. ции. Морфологическое изучение мибкарда боковых стенок левого и правого желудочков сердца и межжелудочковой перегородки позволило выявить прогрессирование дистрофических изменений кардномиоцитов до появления признаков необратимых повреждений некоторых из них на фоне незначительных нарушений гемомикроциркуляции. Наряду с углублением контрактурных повреждений клеток сократительного миокарда, увеличением количества сегментарных контрактур 1П степени при неизменном общем числе поврежденных клеток в них при гистохимическом и гистоэнзимологическом исследовании обнаруживают признаки повреждения митохондриальных мембран и плазматического пропитывания. В части кардиомиоцитов с сегментарными контрактурами II-HI степени при выявлении активности СДГ, Р-ОБДГ, НАД-дегидрогеназы на фоне перераспределения гранул диформазана обнаруживают участки диффузной закраски саркоплазмы, чередующиеся с неокрашенными. Вместе с тем в контрактурно поврежденных клетках сократительного миокарда выявляют накопление ШИК-положительных амилазоустойчивых веществ, свидетельствующих о плазматическом пропитывании нх. В целом в миокарде оставалась пониженной активность ферментов, сопряженных с процессами биосинтеза (НАДФ-зависимой ИДДГ, Г-6-ФДГ, НАДФ-дегидрогеназы). Активность моноаминоксидазы во всех исследованных отделах миокарда соответствует таковой у интактных животных, что косвенно указывает на нормализацию концентрации биогенных аминов в миокарде. С этим связаны незначительные нарушения гемомикроциркуляции в виде спазмов единичных артериальных сосудов и нерезко выраженной очаговой гиперемии. Пример 3. 6 крысам белым беспородным весом 100-120 г в вену хвоста вводят 1%-ный раствор кофеина-бензоата натрия в дозе 2,5 г на 00 г массы тела животного и через 5 мин производят инъекцию свежеприготовленным 10%-ным раствором натриевой соли циклического 3,5аденозинмонофосфата в дозе 20 мг на 100 г массы тела. После инъекции у животных наблюдается учащенно дыхание и сердцебиение, электрокардиогфафически выявлены признаки гипоксии ми ;}карда. Материал для исследования забран через 1 и 3 ч после инъекций. В/ исследованном миокарде животных наблюдаи тся выраженные дисциркуляторные изменения в виде полнокровия миокарда, раси1ирения капилляров и артерий наряду со спазмом некоторых из них, расширения капилляров и венул со стазами в них, переваскулярного и интерстицмального отека, геморрагии и плазморрагий, преимущественно в стенке левогожелудочка и перегородки. Изменения в миокардиоцитах выражаются в неравномерном окрашивании цитоплазмы их с чередованием слабо окрашенных участков с исчезновением поперечной исчерченностн и появлением поперечной зернистости в цитоплазме и участков пересокращения миокардиоцитов. В миокарде формируются очаги повреждения из групп дистрофически измененных миокардиоцитов, частью гастопографически связанных с очагами кривоизлияний, обнаруживаются отдельные мышечные волокна миокарда с явлениями очагового мноцитолизиса. Перечисленные изменения обнаружены преимущественно в стенке левого желудочка и межжелудочковой перегородки. Способ позволяет уточнить механизм повреждающего действия катехоламинов на сердце и производить поиск новых лекарственн| 1х средств для защиты миокарда от повреждения и испытание их на модели. Формула изобретения Способ моделирования стрессорных повреждений миокарда путем введения животным кофеина-бензоата натрия, отличающийся тем, что, с целью воспроизведения вялотекущего дистрофического процесса, после инъекции кофеина внутривенно однократно вводят раствор натриевой соли циклического З б-аденозинмонофосфата в дозе 10- 20 мг на 100 г массы тела животного.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной патологии, может быть применено для моделирования заболеваний сердечно-сосудистой системы. Цель изобретения - воспроизведение вялотекущего дистрофического процесса путем внутривенного введения натриевой соли циклического 3,5-аденозинмонофосфата. Для этого иммобилизованному животному проводят инъекцию в вену хвоста. Вначале вводят 1%-ный раствор кофеина-бензоата натрия из расчета 2,5 мг на 100 г массы тела животного. Затем через 3-5 мин внутривенно вводят свежеприготовленный 10%-ный раствор натриевой соли 3,5-аденазинмонофосфата из расчета 10-20 мг на 100 г массы тела животного. Способ позволяет уточнить механизм повреждающего действия катехоламинов на сердце и производить поиск новых лекарственных средств для защиты миокарда от повреждений и испытания их на модели. . с S