Способ диагностики атеросклероза Советский патент 1986 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для диагностики атеросклероза.

Цель изобретения - повышение точности способа за счет диагностирования в период регрессии атеросклероза

Способ осуществляют следующим образом.

У больного производят забор крови в пробе которой определяют содержание холестерина (ХС) и липидов. Липи ды экстрагируют из тромбоцитов и эритроцитов 20 объемами смеси хлороформ метанол 2:1. Разделяют на 2 фазы добавлением 0,5 мл подкисленной воды и центрифугированием в течение 10 мин при 1500 об/мин. Нижнюю фазу, содержащую липиды, отбирают и вьшаривают в токе азота при 37°С, Остаток растворяют в 100 мкл хлороформа и наносят капилляром старт хроматографи- ческих пластин. Разделение фракций проводят на пластинах Silufol (ЧССР) в смеси растворителей: петро- лейный эфир, днэтиловый эфир, ледяная уксусная кислота - 30:10:0,2.Проявляют пластинки 2%-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кис„,. показатель денситометра пятна АС х 100

% содержание ХС

интегральный показатель денситометра

всех фракций липидов.

1 И при увеличении этого показателя 35 получают плазму, обогащенную тромбоотносительно нормы диагностируют ате- цитами. Для этого берут утром натощак у больного из локтевой вены в силиконированную посуду 5 мл крови с 3,8%-ным цитратом натрия в соот- ношении. 9:1. Цдтратную кровь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин или отстаивают в течение одного часа при комнатной температуре.

Полученная плазма содержит 300 использованы два способы. Содержание тыс. тромбоц 1тов в 1 мм Ч Под- общего ХС общепринятым способом Abe // счет тромбоцитов проводят под микро- показал, что содержание ХС в плазме крови составляет 170 мг/дл. Полученный показатель ниже срерчего уровня нормы, следовательно, он не выявляет у данного больного признаков атеросклероза, хотя диагноз ИБС и атеро- склеротического поражения сосудов

росклероз.

Пример 1. Больной Васильев Н.В., 45 лет, поступил с клиническим диагнозом: ИБС, стенокардия напряжения, атеросклероз аорты, коронарных артерий.

L

Для диагностики заболевания были

50

скопом с применением фазового контрастного устройства. 2 мл плазмы, обогащенной тромбоцитами, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин. Полученный тромбоцитарный осадок трижды отмывают раствором, содержащим 0,279 г ЭДА (этилендиамин- тетраацетат), 0,21 г Tris, 0,186 г 55 КС на 500 ьш дистиллированной воды. Отмывание производят в процессе центрифугирования при 300 об/мин в течение 15 мин;

бьш поставлен врачами клиницистами на основании инструментальных и других методов исследования.

Поэтому определяют относительное содержание ХС в тромбоцитах, Вначал

лоты и высушивают при в течение 5 мин.

Определяют следующие фракции липидов: фосфолипиды, ХС, свободнь е жирные кислоты, триглицериды, эфиры холестерина со следующими значениями Rf .

В таблице приведены значения Rf полученных липидных фракций.

Фракции

Rf

Фосфолипиды Холестерин

Свободные жирные кислоты

Триглицериды

Эфиры холестерина

На старте 0,1 1 ± 0,007

0,26 t0,01 0,45 ±0,02

0,72 ±0,01

30

Пластинки денситометрируются с последующим вычислением процентного j содержания по формуле:

тыс. тромбоц 1тов в 1 мм Ч Под- счет тромбоцитов проводят под микро-

скопом с применением фазового контрастного устройства. 2 мл плазмы, обогащенной тромбоцитами, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин. Полученный тромбоцитарный осадок трижды отмывают раствором, содержащим 0,279 г ЭДА (этилендиамин- тетраацетат), 0,21 г Tris, 0,186 г КС на 500 ьш дистиллированной воды. Отмывание производят в процессе центрифугирования при 300 об/мин в течение 15 мин;

Экстрагируют липиды тромбоцитов. Для этого в пробирку с отмытыми трон боцитами добавляют 2,4 мл хлороформа и метанола (2:1), закрывают плотно пробкой и оставляют для экстракции на 5 мин. Добавляют 0,5 мл подкисленной воды (0,5 мл концентрированной серной кислоты на, л дистиллированной воды), встряхивают 20 раз и оставляют на 10-20 ч для разделения на 2 фазы. Отбирают нижнюю фазу; содержащую липиды и выпаривают в токе азота при ЗУС. Сухой липидный экстракт разводят в 100 мкл хлороформа и капилляром наносят на старт хроматографической пластины, покрытой силикагелем (например, Silufol ЧССР). Разделение фракхщй проводят в смеси растворителей: петролейньш эфир, диэтиловый эфир, уксусная кислота (30:10:0,2). Проявляют пластинки 2%-ным спиртовым раствором фос- форномолибденовой кислоты и высушиванием при 100 С в течение 5 мин.

Определяют фракции липидов исходя из значений Rf и денситометрируют пластинки на денситометре (Биан). Интегральньй денситометрический показатель равняется 357, а для ХС - 104.

Вычисляют относительное содержание ХС в тромбоцитах (29,1%). Полученный показатель превышает норму, что свидетельствует о. наличии у больного атеросклеротических изменений в организме с последующей клиникой ИБС.

Составитель Н.Валеева Редактор В.Ковтун Техред Л.Сердюкова Корректор М.Демчик

Заказ 6661/37 Тираж 778Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

. Производственно-полиграфическое предприятие,г.Ужгород ул.Проектная,4

0

5

0

0

5

Пример 2. Больной Григорьев Н.Р., 36 лет, поступил в клинику с неясными болями за грудиной, сходными с клиникой ИБС, являющейся отражением атеросклероза коронарных артерий.

Проведенные инструментальные мето- дь не могут подтвердить наличие ате- росклеротического процесса.

Определение ХС по прототипному способу вьшвило показатель равный 220 мг/дл, что является пограничным показателем между нормой и патологией . Определение относительного содержания ХС в тромбоцитах по предлагаемому методу составило 21%, что является критерием нормы. Последующее клиническое обследование больного выявило, что происхождение болей за грудиной связано с периодическими спазмами пищевода и не имеет отношения к клинике ИБС.

Формула изобретения

Способ диагностики атеросклероза путем определения холестерина относительно общего содержания липидов в крови, о тличающий ся тем, что, с целью повьшения точности способа за счет диагностирования в период регрессии атеросклероза, определение проводят в тромбоцитах и при значении этого показателя выше диагностируют атеросклероз.

Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - повышение точности способа за счет диагностирования в период регрессии атеросклероза. В пробе крови определяют содержание холестерина и липидов. Липиды экстрагируют из тромбоцитов и эритроцитов. Остаток растворяют в хлороформе и наносят капилляром старт хроматографических пластин. В смеси растворителей проводят разделение фракций. Затем пластинки проявляют и высушивают. Определяют фракции липидов. Пластинки денсйтометрируются. После этого вычисляют содержание холестерина . При увеличении этого показателя относительно нормы диагностируют атеросклероз.-1 табл. S tSP sj а CD