СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА Российский патент 2007 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к аллергологии, и касается способов оценки степени тяжести атопического дерматита.

Известен способ оценки степени тяжести атопического дерматита у детей [1], основанный на биохимическом исследовании липидных фракций кожи - фосфолипидов (ФЛ), холестерина (ХС), жирных кислот (ЖК), триацилглицеридов (ТАГ) и эфиров холестерина (ЭХС). Способ включает смыв с пораженного участка кожи поверхностной липидной пленки (ПЛП), выделение нейтральных липидов, определение их фракций методом тонкослойной хроматографии и оценку степени тяжести атопического дерматита по процентному содержанию отдельных фракций липидов.

Недостатком способа является оценка степени тяжести заболевания только по локальным проявлениям в коже, тогда как заболевание атопическим дерматитом касается всего организма, и для объективности оценки требуется сочетание параметров как местного (липидов кожи), так и интегрального характера (липидов плазмы крови).

Задача изобретения - повышение информативности и точности способа оценки степени тяжести атопического дерматита.

Задача решается тем, что в способе оценки степени тяжести атопического дерматита, включающем определение состава липидов поверхностной липидной пленки кожи, согласно изобретению дополнительно определяют состав липидов плазмы крови. Полученные показатели липидов в коже и плазме крови оценивают в баллах, причем значение показателя ФЛ крови 31-45% оценивают как 1 балл, 22-30% - 2 балла; значение ФЛ кожи 7-10% - 1 балл, 11-18% - 2 балла; значение ХС крови 5-15% - 1 балл, 16-35% - 2 балла; значение ХС кожи 18-21% - 1 балл, 22-35% - 2 балла; значение ЖК крови 11-15% - 1 балл, 8-10% - 2 балла; значение ЖК кожи 11-13% - 1 балл, 14-18% - 2 балла; значение ТАГ крови 7-9% - 1 балл, 10-13% - 2 балла; значение ТАГ кожи 15-19% - 1 балл, 8-14% - 2 балла; значение ЭХС крови 30-43% - 1 балл, 20-29% - 2 балла; значение ЭХС кожи 35-42% - 1 балл, 24-34% - 2 балла. О тяжести атонического дерматита судят по полученной сумме баллов: при сумме баллов от 10 до 14 диагностируют легкую степень, а при сумме баллов от 15 до 20 - тяжелую степень атопического дерматита.

Способ осуществляют следующим образом.

1. Определение состава липидов плазмы крови. Проводят экстракцию липидов плазмы крови: 150 мкл плазмы помещают в пробирку с резиновой пробкой, обернутой фольгой; добавляют 2,4 мл хлороформметаноловой смеси в соотношении 2:1 и интенсивно встряхивают 30 секунд. Через 5 минут добавляют 0,5 мл подкисленной воды (0,5 мл концентрированной серной кислоты на 1 л дистиллированной воды). Пробирку 20 раз переводят из вертикального положения в горизонтальное без встряхивания. Пробу оставляют на 12 часов до полного расслоения на две фазы. Нижнюю хлороформенную фазу, содержащую липидный экстракт, отбирают и 750 мкл экстракта переносят в пробирку, добавляют 800 мкл изопропанола и интенсивно встряхивают в течение 20 минут, после чего пробу отстаивают 20 минут, добавляют 1600 мкл хлороформа и снова интенсивно встряхивают в течение 5 минут. Непосредственно перед нанесением на пластины липидный экстракт упаривают на водяной бане под вытяжной системой при температуре 70°С до полного испарения хлороформа. Подготовка пластин для хроматографии: используют промышленно изготовленные пластины с нанесенным на них слоем силикагеля («Silufol»). Перед нанесением образца их активируют в сухожаровом шкафу при температуре 100°С в течение 1 часа. Подготовка элюентных камер: за 5 часов до помещения пластины в камеру их заполняют системами элюентов: гексан - диэтиловый эфир - ледяная уксусная кислота в соотношении 90:30:0.6. Хроматографирование в системе элюентов: пластины помещают в насыщенные соответствующим элюентом камеры вертикально с минимальным углом наклона. Фракции выявляют путем мелкодисперсного опрыскивания высушенных под вытяжной системой пластин 5%-ным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в 96%-ным растворе этанола с последующим нагреванием при 100°С в течение 5 минут. Хроматограммы денситометрируют в отраженном свете на денситометре "Chromoscan-200" (Германия). Определяют состав нейтральных липидов - общие фосфолипиды (ФЛ), свободный холестерин (СХ), свободные жирные кислоты (ЖК), триацилглицериды (ТАГ), эфиры холестерина (ЭХС). Расчет относительного содержания фракций проводят, исходя из суммы площадей всех пиков на денситограммах. Результат выражают в процентах от общего количества липидов, которое берут за 100%.

2. Определение состава липидов в ПЛП кожи проводят по известному способу [1].

С помощью ватного тампона, смоченного этиловым спиртом (96%), забирают пробу с пораженного участка кожи путем смыва с кожи ПЛП. Нейтральные липиды экстрагируют хлороформметанольной смесью по Фолчу: к пробе добавляют 1 мл метанола и оставляют на 10 минут, после этого добавляют 2 мл хлороформа и оставляют также на 10 минут. Затем центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин, после центрифугирования собирают 2,5 мл надосадка. В пробу добавляют 1/5 объема 50 мМ раствора хлорида кальция (CaCl₂). Через 15 минут эту смесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут.

Далее удаляют верхнюю фазу, а нижнюю выпаривают на водяной бане до образования липидной капли. Разделение нейтральных липидов (ФЛ, ХС, ЖК, ТАГ, ЭХС) проводят с помощью тонкослойной хроматографии в системе растворителей гексан/диэтиловый эфир/метанол/ледяная уксусная кислота в соотношении 90:20:3:2 соответственно. Разделение липидов проводят на пластинках "Silufol". Результат выражают в процентах от общего количества липидов, которое берут за 100%.

Оценку полученных показателей липидов в коже и крови проводят по оценочной шкале:

Исследуемый показательВеличина показателя, %Баллы тяжестиФЛ крови31-451 22-302ФЛ кожи7-101 11-182ХС крови5-151 16-352ХС кожи18-211 22-352ЖК крови11-151 8-102ЖК кожи11-131 14-182ТАГ крови7-91 10-132ТАГ кожи15-191 8-142ЭХС крови30-431 20-292ЭХС кожи35-421 24-342

При сумме баллов от 10 до 14 диагностируют легкую степень, а при сумме баллов от 15 до 20 - тяжелую степень атопического дерматита.

Предлагаемый способ был апробирован в I детском отделении клиники при ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМЫ.

Примеры использования метода.

Пример 1. Больной А., 10 лет. Диагноз: Атопический дерматит, локализованный, стадия обострения.

Показатели липидов в коже и кровиИсследуемый показательВеличина показателя, %Баллы тяжестиФЛ крови31,861ФЛ кожи7,581ХС крови12,401ХС кожи19,531ЖК крови11,751ЖК кожи16,742ТАГ крови8,801ТАГ кожи11,422ЭХС крови35,171ЭХС кожи35,721

При полученной сумме баллов 12 у данного больного диагностируют легкую степень атопического дерматита.

Пример 2. Больной Б., 8 лет. Диагноз: атопический дерматит, распространенный, стадия обострения.

Показатели липидов в коже и кровиИсследуемый показательВеличина показателя, %Баллы тяжестиФЛ крови30,112ФЛ кожи12,462ХС крови8,821ХС кожи31,642ЖК крови10,562ЖК кожи17,342ТАГ крови11,212ТАГ кожи10,822ЭХС крови27,202ЭХС кожи37,721

При полученной сумме баллов 18 у данного больного диагностируют тяжелую степень атопического дерматита.

Разработанный способ оценки степени тяжести атопического дерматита позволяет точно и объективно определить состояние больного и является основой для целенаправленного медикаментозного лечения и повышения его эффективности. Способ применим для больных всех возрастов.

Источник информации

1. «Способ оценки степени тяжести атопического дерматита» RU 2239837 С2. Опубл. 10.11.2004.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к аллергологии. Сущность изобретения заключается в том, что определяют состав липидов (ФЛ, ХС, ЖК, ТАГ, ЭХС) поверхностной липидной пленки кожи и в плазме крови, затем полученные показатели липидов в коже и плазме крови оценивают в баллах, затем суммируют полученные баллы и при сумме баллов от 10 до 14 диагностируют легкую степень, а при сумме баллов от 15 до 20 - тяжелую степень атопического дерматита. Способ позволяет осуществлять точную и объективную оценку степени тяжести атопического дерматита и применим для больных всех возрастов. 3 табл.

Способ оценки степени тяжести атопического дерматита, включающий определение состава липидов (ФЛ, ХС, ЖК, ТАГ, ЭХС) поверхностной липидной пленки кожи, отличающийся тем, что дополнительно определяют те же липиды в плазме крови, затем полученные показатели липидов в коже и плазме крови оценивают в баллах, причем значение показателя ФЛ крови 31-45%, оценивают как 1 балл, 22-30% - 2 балла; значение ФЛ кожи 7-10% - 1 балл, 11-18% - 2 балла; значение ХС крови 5-15% - 1 балл, 16-35% - 2 балла; значение ХС кожи 18-21% -1 балл, 22-35% - 2 балла; значение ЖК крови 11-15% - 1 балл, 8-10% - 2 балла; значение ЖК кожи 11-13% - 1 балл, 14-18% - 2 балла; значение ТАГ крови 7-9% - 1 балл, 10-13% - 2 балла; значение ТАГ кожи 15-19% - 1 балл, 8-14% - 2 балла; значение ЭХС крови 30-43% - 1 балл, 20-29% - 2 балла; значение ЭХС кожи 35-42% - 1 балл, 24-34% - 2 балла, суммируют полученные баллы и при сумме баллов от 10 до 14 диагностируют легкую степень, а при сумме баллов от 15 до 20 - тяжелую степень атопического дерматита.