Способ приготовления диагностических типоспецифических противоботулинических сывороток типов а,в,с,е Советский патент 1978 года по МПК A61K35/16 

Изобретение относится к способам приготовления диагностических типоспецифи- ческих противоботупинических сывороток типов А, В, С, Е путем иммунизации пошадей.

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что, с цепью повышения специфичности сывороток, подбирают лошадей, имеющих в сыворотке крови не более одного типа противоботулининеского антитоксина, и иммунизируют их проверенным на специфичность анатоксином, полученным из высокотоксигенного штамма Cd.Bot и tinos при на пепсинпепгонном бульоне или рыбо-кукурузной среде (для типов Аи В), на бульоне Хоттингера или среде иэ кислотнсих гидропизата казеина с добавлением кукурузного -экстракта (для типа с) и при 28 С на бульоне Хоттингера и рыбо-каэеиновой среде (для типа Н).

быть использованы для иммунизации с иелыо получения указанных сывороток. Ботупинические анатоксины типов А и В готовят при 35 С из токсинов, по- лученных как на пенсии-пепгонном бульоне, так и на рыбе-кукурузной среде, имеющей в своей основе сопянокислотный гидролизат рыбной и кукурузной муки.

Рыбо-кукуруэная среда имеет спедующий химический состав, мг:

Общий азот300-4ОО

Белковый азот1ОО-15О

Аминный азот8Ct.l2O

На этих средах получают ботулинические токсины типа А активностыо 200ООО- 1ОООООО ед/мл для белых мышей, типа В-5ООООО-10ООООО ед/мп из которых получаются высокоиммуногенные анатоксины с антитоксинно-связываюшей способностью 0,01-0,003 мл.

Ботулинические анатоксины типа С готовят при температуре 35 С как на бульоне Хоттингера, так и на среде из киояотяого гидролизата казеина с добавле- кием в качестве источн.ика факторов роота 3% кукурузного экстракта. Казеиновая среда должна иметь следующий химнчес кий состав, мг: Общий азот230-300 Белковый ааот130-180 Аминный a3t T90-120 Токсины, полученные на этой среде, имеют активность С 00000-1000000 ед/м на среде Хоттингера 10000-200000 ед/м для мышей, из которых получаются еысокоиммуногенные анатоксины с антигоксин связующей способность 0,01-0,003 мл. Ботулинические анатоксины типа Е готовят при температуре 28 С на бульон Хоттингера и на рыбо-казеиновой среде, включающей смесь кислотного гидролиза та рыбной мукк с кислотным гидролизатом казеина, В качестве источника факт ров роста добавляют 3% кукурузного экстракта. Рыбо-казеиновая среда должна иметь следующий состав, мг: Общий азот15О-230 Белковый азот35-60 АМИННЫЙ азот70-130 На этих средах сила токсина типа Е равна от 500ОО до 15000О ед/мл для мышей. Токсин перед обезвреживанием обязательно проверяется на специфичность путем постановки реакции нейтрализации. К 5-7-суточным фильтратам, культур добавляют 8% формалина. Обезвреживани продолжается при температуре 38 С от трех до четырех недель, в зависимости от типа обезвреживаемого токсина. Проверку стерильности антигена производят, согласно инструкции, по проверке бакпрепаратов. Антиген высеивают на среду Тароцци , пoлyжидkий агар, 1 84 сахарный бульон, косой агар и среду Сабуро, Высевы выдерживаются в термосате на первых двух средах 21 день, на остальных средах 7-8 дней. Иммуногенные свойства проверяются на пяти морских свинках, каждой из которых вводится 5 мл антигена. Через четыре недели всем морским свинкам вводится под кожу 100едсоответствующего токсина. Токсин типа Е вводится в дозе до 30 ед. Антиген считается имеющим удовлетворительные иммуногенные свойства, если более 50% морских свинок остаются здоровыми. Проверенные на стерильность, безвредность и нммуногенные свойства анатоксины пригодны для иммунизации лощадей. Формула изобретения Способ приготовления диагностических типоспецифических противоботулинических сывороток типов А, В, С, Е путем иммунизации лошадей, отличающийся тем, что, с целью повыщения специфичности, подбирают лошадей, имеющих в сыворотке крови не более одного типа противоботулинического антитоксина, и иммунизируют их проверенным на специфичность анатоксином, полученным из высокотоксигенного штамма Сб. tjottjE irtOS при 35 С на пепсинпептонном бульоне или рыб.о-кукурузной среде (для типов А и В), на бульоне Хоттингера или среде из кислотного гидролизата казеина с добавлением кукурузного экстракта {для типа С) и при 28 С на бульоне Хоттингера и рыбо-казеиновой среде (для типа Е).